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        Livin在不同病理分型脂溢性角化病組織中表達(dá)的研究

        2016-09-20 02:10:18許向前,陳勇飛,梁偉容
        北方藥學(xué) 2016年9期
        關(guān)鍵詞:棘層脂溢性黑素

        Livin在不同病理分型脂溢性角化病組織中表達(dá)的研究

        許向前1陳勇飛2梁偉容3張弘 (11.深圳市龍崗中心醫(yī)院(深圳市第九人民醫(yī)院)皮膚科深圳518116;2.深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院皮膚科深圳518101;3.深圳市大鵬新區(qū)南澳人民醫(yī)院皮膚科深圳518121)

        目的:觀察Livin在不同病理分型脂溢性角化病組織中的表達(dá)情況。方法:脂溢性角化病病例120例(6個(gè)類型,每種病理類型各20例),并以10例正常包皮組織作為對照,采用免疫組化SP法對所有病例的Livin表達(dá)情況進(jìn)行染色檢測。結(jié)果:Livin在不同病理分型的脂溢性角化病組織中的陽性表達(dá)率均高于正常包皮組織,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),不同病理分型脂溢性角化病組織中Livin的表達(dá)強(qiáng)度差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:脂溢性角化病組織普遍表達(dá)Livin,提示其發(fā)病可能與凋亡抑制相關(guān),其發(fā)生可能與Livin表達(dá)上調(diào)有關(guān);Livin在脂溢性角化病組織中的表達(dá)強(qiáng)度與病理分型無關(guān),提示不同病理分型SK組織細(xì)胞凋亡過程中可能存在相同路徑。

        脂溢性角化病 病理分型 Livin免疫組織化學(xué)

        脂溢性角化?。╯eborrheic keratosis,SK)是一種與日光照射、老年性皮膚變化或感染有關(guān),并有潛在惡變傾向的常見良性表皮內(nèi)腫瘤,目前關(guān)于其確切的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚不明了,大量的研究顯示在脂溢性角化病組織中角質(zhì)形成細(xì)胞出現(xiàn)成熟遲緩和凋亡受阻。我們既往的研究[1]檢測發(fā)現(xiàn),Livin在SK皮損中明顯表達(dá)上調(diào),并隨著患者年齡增長、病程延長,陽性表達(dá)率明顯增高,而與患者的性別、皮損直徑大小、皮損部位及數(shù)目的多少無明顯相關(guān)性。為了進(jìn)一步探討Livin在SK皮損中表達(dá)強(qiáng)度的差異與不同病理分型的關(guān)系,我們應(yīng)用免疫組化SP法檢測120例不同病理分型脂溢性角化病組織中Livin的表達(dá)情況,現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

        1 資料與方法

        1.1臨床資料:回顧選取2006年10月~2014年10月就診于我院皮膚科資料保存完整,臨床表現(xiàn)和病理診斷均符合脂溢性角化病的病理標(biāo)本120例,所有病理切片按朱學(xué)駿、孫建方主譯的《皮膚病理學(xué)-與臨床聯(lián)系》[2]制訂的標(biāo)準(zhǔn)將SK組織學(xué)分型分為6個(gè)類型:①角化過度型;②棘層肥厚型;③腺樣型;④菌落型;⑤刺激型;⑥黑素棘皮瘤型,每種病理類型20例。并對不同病理類型脂溢性角化病患者的性別、皮損大小、發(fā)病部位、皮損數(shù)目、年齡及病程進(jìn)行比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對照組為10例正常健康男性包皮標(biāo)本,均來自我院泌尿外科門診進(jìn)行包皮環(huán)切術(shù)的男性包皮,既往無外生殖器疾病史,并經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)為正常上皮。

        1.2主要實(shí)驗(yàn)試劑:Livin為兔抗人多克隆抗體,工作濃度為1∶50,SP檢測試劑盒,DAB顯色試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。

        1.3實(shí)驗(yàn)方法:應(yīng)用免疫組化SP法,先通過枸櫞酸鹽緩沖液微波熱修復(fù),Livin抗體的工作濃度為1∶50,再進(jìn)行DAB顯色及蘇木精襯染。PBS代替一抗作陰性對照,已知乳腺癌陽性片做陽性對照。

        1.4結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):采用半定量積分方法,根據(jù)免疫組化染色反應(yīng)的強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)量的百分率分別記分。其中染色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞的呈色反應(yīng)為準(zhǔn),棕褐色為3分,棕黃色為2分,淺黃色為1分,不著色為0分;陽性細(xì)胞數(shù)的百分率>75%為4分,51%~75%為3分,26%~50%為2分,6%~25%為1分,<5%為0分;每個(gè)視野染色強(qiáng)度得分與陽性細(xì)胞百分率相乘為該視野得分,雙盲法每例隨機(jī)選取5個(gè)不同高倍視野各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,最終得分為5個(gè)視野得分的平均值。陰性(-)為0~3分,弱陽性(+)為4~8分,陽性(++)為9~12分。

        1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,不同病理類型SK組織與正常包皮組織中Livin表達(dá)陽性率比較用X2檢驗(yàn),不同病理類型SK組織中Livin表達(dá)強(qiáng)度用秩和檢驗(yàn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        Livin在 SK組織中陽性表達(dá)為細(xì)胞漿著色(如圖1,2,3,4,5,6),表皮全層均有表達(dá),越近基底層表達(dá)強(qiáng)度越高,不同病理分型的表達(dá)部位無差異。120例SK組織中,Livin表達(dá)陽性103例,陰性17例,陽性率為85.8%。10例正常包皮組織對照組中陽性1例(圖7),陰性9例,陽性率為10%。不同病理分型SK組織中Livin的表達(dá)陽性率明顯高于正常包皮組織,兩者之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Livin在不同病理亞型的表達(dá)情況見表1,在角化過度型、棘層肥厚型、腺樣型、菌落型、刺激型、黑素棘皮瘤型之間Livin的表達(dá)強(qiáng)度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=4.786,P=0.443>0.05)。

        表1 Livin在不同病理分型SK組織與正常包皮組織中的表達(dá)情況

        *不同病理分型的SK組織與正常包皮組織的陽性率比較;**不同病理分型的SK組織中表達(dá)強(qiáng)度的比較。

        3 討論

        脂溢性角化?。⊿K)多發(fā)于中老年人,又稱為老年疣,在臨床中雖然癌變率較低,但也應(yīng)注意存在惡變的可能性。目前,關(guān)于其致病原因主要認(rèn)為與日光照射[3~4]、遺傳因素、年齡[5]及HPV病毒[6]感染有關(guān)。其確切的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚無定論,大量的研究證實(shí)在脂溢性角化病組織中,角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡受阻以及角質(zhì)形成細(xì)胞成熟遲緩[7]。近年關(guān)于凋亡蛋白抑制因子(IAPs)蛋白的研究顯示,其過度表達(dá)可引起凋亡不足與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系十分密切,Livin是IAPs家族中的新成員,其組織分布和作用機(jī)制具有一定的獨(dú)特性,主要功能是抑制細(xì)胞凋亡。Livin是IAP家族主要成員之一,可以直接或間接抑制caspase凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的起始分子caspase-3/-7和caspase-9的活性而阻斷細(xì)胞凋亡的發(fā)生[8~9]。Livin隨著進(jìn)一步研究的深入,發(fā)現(xiàn)Livin不僅在越來越多的惡性腫瘤中有表達(dá),而且在良性腫瘤中亦有不同程度表達(dá)。我們既往的研究顯示[1],在SK皮損中Livin表達(dá)陽性率明顯高于正常包皮組織,并隨著患者年齡增長、病程延長,Livin表達(dá)陽性率明顯增高,而與患者性別、皮損直徑大小、發(fā)病部位及皮損數(shù)目多少無明顯相關(guān)性。推測這可能與隨著患者年齡增加、病程延長接受日光照射的增多,皮損潛在惡變危險(xiǎn)性增高有關(guān)。

        病理組織學(xué)中將脂溢性角化病分為6型,分別為角化過度型、棘層肥厚型、腺樣型、菌落型、刺激型和黑素棘皮瘤型。角化過度型中具有顯著的角化過度和乳頭瘤樣增生,棘層肥厚不明顯,表皮大部分為鱗狀細(xì)胞,可見少量基底樣細(xì)胞,假性囊腫多見。棘層肥厚型中可見明顯的棘層細(xì)胞,也可見部分角化過度和乳頭瘤樣增生,表皮增厚形成粗網(wǎng)狀或條狀,基底樣細(xì)胞明顯多于鱗狀細(xì)胞,假性角囊腫及真角質(zhì)囊腫可見,黑素多于正常。菌落型中細(xì)胞巢明顯見于表皮內(nèi),部分類似表皮內(nèi)上皮瘤,細(xì)胞巢的細(xì)胞核深染而且小,有些則由較大的基底樣細(xì)胞組成,可見明顯的細(xì)胞間橋。腺樣型由大量的細(xì)條束狀表皮細(xì)胞構(gòu)成,條束相互分支或交織,由表皮向真皮伸展,細(xì)胞束條多數(shù)由兩層基底樣細(xì)胞組成,似腺體,少見角質(zhì)囊腫,有明顯黑素。刺激型為較多鱗狀旋渦,由鱗狀細(xì)胞組成,細(xì)胞扁平,嗜伊紅變性常見,棘突松解現(xiàn)象可見少數(shù)病變中。黑素棘皮瘤型表現(xiàn)為瘤內(nèi)黑素細(xì)胞明顯增多,黑素分布于整個(gè)皮損區(qū)內(nèi)。不同分型之間雖有區(qū)別但并無明顯的分界線,各型表現(xiàn)都以角化過度、假性角囊腫、乳頭瘤樣增生基底樣細(xì)胞為主,目前更多地認(rèn)為是病理譜系,表現(xiàn)為向其中一個(gè)病理亞型方向發(fā)展的傾向。

        我們的研究證實(shí)作為凋亡抑制蛋白的Livin在脂溢性角化病的普遍高表達(dá),提示脂溢性角化病的發(fā)生發(fā)展與凋亡抑制的密切相關(guān);而不同病理類型脂溢性角化病組織Livin表達(dá)強(qiáng)度無顯著差異,提示Livin的表達(dá)強(qiáng)度與病理亞型無關(guān),雖然亞型不同,但是其凋亡代謝路徑是相同的。

        我們既往的研究[1]結(jié)果證實(shí)Livin與survivin表達(dá)呈正相關(guān),兩者表達(dá)強(qiáng)度無差異。而孫令[10]等在關(guān)于脂溢性角化病中survivin表達(dá)的研究結(jié)果顯示,在角化過度型、棘層肥厚型及腺樣型脂溢性角化病中,都觀察到survivin的明顯表達(dá),而在刺激型脂溢性角化病和正常表皮不表達(dá)。推測可能與角化過度型、棘層肥厚型及腺樣型脂溢性角化病組織中多以基底樣細(xì)胞為主,而在刺激型脂溢性角化病多由分化成熟的鱗狀細(xì)胞組成,細(xì)胞凋亡增強(qiáng),可能與survivin不表達(dá)有關(guān)。大量的研究顯示Livin 與survivin兩者雖然在結(jié)構(gòu)和功能上有許多共性,但也存在較多區(qū)別,這可能與兩者表達(dá)的差異有關(guān),也可能與我們研究選取病例相對較少有關(guān)。

        總之,脂溢性角化的發(fā)生機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的,多種因素、多種基因、多個(gè)階段參與其中的生物學(xué)事件,其確切的發(fā)生發(fā)展機(jī)制還需在以后工作中深入全面地觀察研究。

        [1]許向前,莫令君,李健清,等.Livin、Survivin和Fas在脂溢性角化病組織中的表達(dá)[J].中國皮膚性病學(xué)雜志,2012,26(10):890-893.

        [2]朱學(xué)駿,孫建方,主譯.皮膚病理學(xué)-與臨床聯(lián)系[M].北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社,2007:1158-1163.

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        Expression of Livin in different pathologic types of seborrheic keratosis

        Xu Xiangqian1Chen Yongfei2Liang Weirong3Zhang Hong1(1.Department of Dermatology,Longgang District Central Hospital of Shen Zhen,Shenzhen 518116,China;2.Department of Dermatology,Longgang District Second People′s Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518112,China.3.Department of Dermatology,Dapeng newDistrict Nan'ao People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518121,China)

        0bjective:To explore the expression of Livin in different pathologic types of seborrheic keratosis.Methods:120 cases with SK were grouped by pathologic classification(6 types and every groups have 20 cases),10 cases of prepuce of nomal men as control,Immunohistochemical staining method was used to detect the expression of Livin in all cases.Results:The positive expression rate of livin in 6 pathologic classification groups of seborrheic keratosis were significantly higher than in normal prepuce tissues(P<0.05);There were no significant differencens in the positive expression levels of Livin among different pathologic classification groups of seborrheic keratosis(P>0.05).Conclusion:The higher expression of Livin are observed widespreadly in all types seborrheic keratosis,it suggested that Livin may related with apoptosis inhibition,and play an important role in the pathgenesis of seborrheic keratosis.;The expression levels of Livin in SK are not associated with pathologic types,it indicated that there could be a same mechanism in the cells apoptosis of different pathologic types of seborrheic keratosis.

        Seborrheic keratosis Pathologic classification Livin Immunohistochemistry

        R752.5

        B

        1672-8351(2016)09-0134-03

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