顧菲菲　徐小梅（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院　合肥　230031）

小兒熱速清口服液中葛根素的含量測(cè)定

顧菲菲徐小梅（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院合肥230031）

目的：建立小兒熱速清口服液中葛根素含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水（75∶25）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，流速為1.0mL/min。結(jié)果：葛根素在3.446μg/mL～17.228μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為r=0.9999（n＝7），平均回收率為99.6%（RSD＝0.26%，n＝9）。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好?？勺鳛樵撝苿┑母鸶|(zhì)量控制方法。

小兒熱速清口服液 葛根素 高效液相色譜法 含量測(cè)定

小兒熱速清口服液具有清熱解毒、瀉火利咽的功效，用于小兒風(fēng)熱感冒、發(fā)熱頭痛、咽喉紅腫等癥。其主要有柴胡、黃芩、葛根、金銀花、水牛角、連翹等多味藥材加工制成，其中，葛根主要有解表退熱、生津、透疹、升陽止瀉等功效［1］。目前。文獻(xiàn)報(bào)道了用高效液相色譜法測(cè)定小兒熱速清口服液中黃芩苷的含量和《中國藥典》2010年版一部中黃芩苷的含量測(cè)定［2］，缺少測(cè)定葛根中葛根素的含量方法。本文采用高效液相色譜法測(cè)定葛根素的含量，方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，結(jié)果滿意。

1　儀器與試藥

1.1儀器：戴安U-3000高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器）；Fisherbrand FB15065超聲波清洗器；XPE-205電子分析天平（梅特勒-托利多）

1.2試藥及試劑：葛根素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定院；批號(hào)：110752-201313；含量為95.5%）；小兒熱速清口服液（市售品批號(hào)：150106，150526，150806）；甲醇（色譜純Fisher Scientific）；乙醇（分析純，上海振興化工一廠）；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1最佳檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇［3］、［4］：參考《中國藥典》2015年版葛根素的含量測(cè)定方法以及文獻(xiàn)，選擇250nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2色譜條件［3］：AgilengtC18柱（0.5μm，250mm×4.6mm）；流動(dòng)相為甲醇-水（25∶75）；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；柱溫為30℃；流速為1.0mL/min；進(jìn)樣量為5μL；理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。見圖1：

2.3樣品溶液的制備

2.3.1對(duì)照品溶液的制備：精密稱取葛根素對(duì)照品18.04mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液（344.564μg/mL）。精密量取3mL置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品使用液（10.337μg/mL）。

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL、5mL分別置100mL量瓶中，加稀釋至刻度，搖勻，濾過。吸取5μL注入液相色譜儀，進(jìn)行檢測(cè)，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。并求得線性回歸方程：A= 0.29711C+0.04467，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果表明濃度在3.446μg/mL～17.228μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。見表1：

表1　線性關(guān)系考察結(jié)果

2.5重復(fù)性試驗(yàn)：取批號(hào)150106的樣品，精密量取2mL置20mL量瓶中，同供試品溶液的制備方法處理，濾過。取續(xù)濾液作為供試品溶液。按2.2色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定葛根素峰面積A。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見表2。表明重復(fù)性良好。

表2　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)：取葛根素對(duì)照品使用液（8.6141μg/mL），于室溫下放置0、1、2、4、8h后進(jìn)樣測(cè)定，按2.2色譜條件測(cè)定葛根素峰面積A，結(jié)果見表3，結(jié)果表明葛根素對(duì)照品溶液在8h內(nèi)較穩(wěn)定。

表3　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7加樣回收率試驗(yàn)：取批號(hào)150106的樣品，取9份，分別置9 個(gè)100mL容量瓶中，分別精密加入3個(gè)梯度量的對(duì)照品，再精密加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定上述9份供試品溶液的葛根素含量，考察加樣回收率。結(jié)果：平均回收率為99.6%，RSD為0.26%（n=9），表明本法測(cè)定葛根素的含量準(zhǔn)確性較高，結(jié)果見表4。

表4　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8樣品含量測(cè)定：取本品，精密量取2mL置20mL量瓶中，精密加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。取續(xù)濾液作為供試品溶液。按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定葛根素峰面積A，計(jì)算樣品中葛根素的含量，結(jié)果見表5。

表5　樣品含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1通過試驗(yàn)，確定了小兒熱速清口服液中葛根素的含量測(cè)定方法，測(cè)定結(jié)果可靠，方法簡(jiǎn)便，為小兒熱速清口服液的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

3.2流動(dòng)相為甲醇一水（25∶75）時(shí)，峰形較好，理論板數(shù)高，流動(dòng)相組成簡(jiǎn)單、安全。

3.3采用HPLC法測(cè)定小兒熱速清口服液中葛根素的含量，操作方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。不同批號(hào)的小兒熱速清口服液的含量測(cè)定結(jié)果表明，葛根素的含量，精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收率都較好，所以，RP—HPLC法可作為藥品質(zhì)量分析檢驗(yàn)方法用來有效控制小兒熱速清口服液的質(zhì)量。

本研究建立了HPLC法測(cè)定小兒熱速清口服液含量的方法，通過大量試驗(yàn)得出最優(yōu)的色譜條件。本法具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。可作為該制劑質(zhì)量控制的方法之一。

［1］中國科技大學(xué).中藥辭海（第三卷）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1995：699-707.

［2］許海棠，黃富嶸，廖藝.高效液相色譜法測(cè)定小兒熱速清口服液中綠原酸、黃芩苷和葛根素［J］.理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)）.2011，47 （11）：1326-1329.

［3］中國藥典［S］．一部．2010：312-313.

［4］遲霽菲，張國剛.高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地葛根中葛根素的含量［J］.中南藥學(xué)，2006，4（4）：307-309.

Content determination of“Xiao-er resuqing”oral liquid for injection

Gu FeigeiXu Xiaomei（Anhui Provincial Hospital of traditional Chinese Medicine Hefei 230031）

0bjective：To establish a method for determine the content of“Xiao-er resuqing”oral liquid For injection.Methods：Using the method of HPLC，with eighteen alkyl silane bonded silica as filler，Methanol and water（25∶75）as mobile phase，The detection wavelength was 250nm，The flow rate was 1.0mL/min。Results：Purerin sodium in 3.446μg/mL～17.228 μg/mL and the linear range，correlation coefficient r=0.9999（n=7），the average recovery rate was 99.6%（RSD=0.26%，n=9）.Conclusion：the method is accurate and reliable，reproducible.Can be used as one of the methods for quality control of this preparation.

“Xiao-er resuqing”orl liquid Purerin HPLC Content

R286.0

A

1672-8351（2016）09-0004-02