陳娟，王婷，王書(shū)俠，施建豐，張家明，吳娟

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，南京 210028)

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冠心病患者KIF6基因rs20455多態(tài)性及其與血糖、血脂水平的關(guān)系

陳娟，王婷，王書(shū)俠，施建豐，張家明，吳娟

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，南京 210028)

目的了解冠心病患者驅(qū)動(dòng)蛋白分子6(KIF6)基因rs20455多態(tài)性，并觀(guān)察其與血糖、血脂水平的關(guān)系。方法80例冠心病(CHD)患者(觀(guān)察組)，健康體檢者147例(對(duì)照組)，采用TaqMan等位基因終點(diǎn)法分析各組KIF6基因rs20455多態(tài)性，比較不同KIF6基因rs20455多態(tài)性基因型血脂、血糖水平。結(jié)果觀(guān)察組KIF6基因rs20455多態(tài)性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對(duì)照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較，P均>0.05。KIF6基因rs20455多態(tài)性TT、CC+CT基因型的TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG水平比較，P均>0.05。結(jié)論冠心病患者KIF6基因rs20455多態(tài)性與正常人相似，且與患者血脂、血糖水平無(wú)關(guān)。

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟??；驅(qū)動(dòng)蛋白分子6；基因多態(tài)性；血脂；空腹血糖

冠心病(CHD)是發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)人口的主要死亡原因之一，近年我國(guó)CHD的發(fā)病率與病死率均呈上升趨勢(shì)，已接近發(fā)達(dá)國(guó)家水平[1]。驅(qū)動(dòng)蛋白分子6(KIF6)是近年發(fā)現(xiàn)的驅(qū)動(dòng)蛋白家族9的一類(lèi)分子馬達(dá)，研究[2]發(fā)現(xiàn)KIF6基因單核苷酸多態(tài)性與高加索人群的CHD患病風(fēng)險(xiǎn)有潛在相關(guān)性，而目前國(guó)內(nèi)鮮有KIF6基因與中國(guó)漢族人群CHD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性的報(bào)道。本研究觀(guān)察了CHD患者KIF6基因rs20455多態(tài)性，并觀(guān)察其與血糖、血脂水平的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料CHD患者80例(觀(guān)察組)，男48例，女32例；年齡(63.1±8.6)歲。CHD診斷標(biāo)準(zhǔn)：冠狀動(dòng)脈造影陽(yáng)性(至少1支冠狀動(dòng)脈狹窄≥50%)，或者既往有明確心肌梗死病史。健康體檢者147例(對(duì)照組)，男95例，女52例；年齡(46.1±8.8)歲。兩組均排除心腦血管病變、糖尿病、腎病、腫瘤及免疫系統(tǒng)疾病等。

1.2KIF6基因rs20455多態(tài)性分析所有受試對(duì)象禁食12 h后，采集肘靜脈血4 mL。3 mL置于無(wú)抗凝劑管，分離血清，用于生化指標(biāo)檢測(cè)；另1 mL置于EDTA-K2抗凝管，分離白細(xì)胞層，用于基因組DNA的提取。提取基因組DNA。取全血300 μL，根據(jù)試劑盒操作說(shuō)明提取基因組DNA(試劑盒由美國(guó)Gentra公司提供)，并于-20 ℃保存?zhèn)溆?。DNA標(biāo)本于波長(zhǎng)260 nm和280 nm處進(jìn)行吸光度分析并計(jì)算DNA濃度。采用TaqMan等位基因終點(diǎn)法分析。根據(jù)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)公共數(shù)據(jù)庫(kù)Blast功能設(shè)計(jì)并初步驗(yàn)證引物：正義鏈5′-GCCATTTCTCCAGACATCTGACT-3′，反義鏈5′-GTGATTCTCACCTTACCTTTTGTTAGA-3′。探針5′端標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)是FAM，3′端標(biāo)記熒光猝滅基團(tuán)MGB。PCR反應(yīng)在羅氏z480 PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行，PCR反應(yīng)總體積25 μL，基因組DNA 2 μL，TaqMan通用PCR擴(kuò)增預(yù)混試劑12.5 μL，KIF6 SNP分型試劑0.625 μL，無(wú)菌ddH2O 9.875 μL；空白對(duì)照管(即無(wú)模板對(duì)照，NTC)中加入11.875 μL無(wú)菌ddH2O，TaqMan通用PCR擴(kuò)增預(yù)混試12.5 μL，KIF6 SNP分型試劑0.625 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性10 min；92 ℃、15 s，60 ℃、1 min，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。不同基因型的PCR產(chǎn)物測(cè)序由上海生工測(cè)序部完成。

1.3血脂、血糖檢測(cè)方法采用已糖激酶紫外終點(diǎn)比色法檢測(cè)FBG，酶法檢測(cè)血清TC、TG，直接勻相法檢測(cè)HDL-C、LDL-C。以上項(xiàng)目均在羅氏cobas8000生化分析儀上檢測(cè)(試劑盒均由美國(guó)Roche公司提供)，所有測(cè)定均嚴(yán)格按照儀器、項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行，用高、低兩個(gè)水平質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制(質(zhì)控品由美國(guó)BioRad公司提供)。

2　結(jié)果

兩組KIF6基因rs20455位點(diǎn)基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。觀(guān)察組KIF6基因rs20455多態(tài)性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對(duì)照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較，P均>0.05。不同基因型血脂、血糖水平比較見(jiàn)表1，由表1可知,KIF6基因rs20455多態(tài)性TT、CC+CT基因型的TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG水平比較，P均>0.05。

表1　不同基因型血脂、血糖水平比較

3　討論

KIF6是驅(qū)動(dòng)蛋白超家族中一類(lèi)參與胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的特殊蛋白質(zhì)。KIF6基因位于染色體6p21，跨越約390 000堿基對(duì)。KIF6在大腦、結(jié)腸、眼、咽、皮膚、睪丸及結(jié)締組織中低表達(dá)。近年研究發(fā)現(xiàn)，KIF6基因Trp719Arg(又稱(chēng)rs20455)SNPs區(qū)域強(qiáng)連鎖不平衡，該變異體靠近KIF6基因尾部，由非極性殘基色氨酸取代堿性殘基精氨酸，由此改變基因尾部與“貨物”分子的親和力或調(diào)節(jié)KIF6蛋白質(zhì)運(yùn)動(dòng)活性，影響“貨物”結(jié)合[3]。因此，KIF6基因與心血管疾病易感性有相關(guān)性，且強(qiáng)化他汀類(lèi)藥物治療可使KIF6基因變異者顯著獲益。

本研究顯示，觀(guān)察組KIF6基因rs20455多態(tài)性TT基因型29例、TC基因型36例、CC基因型15例、T等位基因頻率58.8%、C等位基因頻率41.2%，對(duì)照組分別為44、70、33例和53.7%、46.3%，兩組基因型及等位基因頻率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。C等位基因頻率分布與我國(guó)北方地區(qū)、印度地區(qū)人群相差無(wú)幾[4～7]，與高加索人群、北美地區(qū)和非裔美洲人群等差異較大[8,9]，可見(jiàn)KIF6基因rs20455多態(tài)性基因人群種族分布的差異，可能造成基因頻率，等位基因頻率不同。本研究還發(fā)現(xiàn)，KIF6基因rs20455多態(tài)性對(duì)觀(guān)察組患者血脂、FBG水平無(wú)顯著影響，與之前研究[10～13]結(jié)果一致，這說(shuō)明KIF6基因多態(tài)性可能通過(guò)非血脂代謝途徑來(lái)達(dá)到他汀藥物降低心血管風(fēng)險(xiǎn)的療效。

本研究存在一定年齡組間不完全匹配的不足，對(duì)中國(guó)不同地域、不同民族人口進(jìn)行大規(guī)模調(diào)查研究KIF6基因多態(tài)性與CHD的相關(guān)性及其機(jī)制，對(duì)其防治、發(fā)生、發(fā)展提供遺傳學(xué)依據(jù)具有重要意義。

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