侯金霞，李志平，丁國勝，魏蓮花，丁進芳（甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)在慢性淋巴細(xì)胞白血病中的應(yīng)用

侯金霞，李志平，丁國勝，魏蓮花，丁進芳
（甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

目的 分析多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型在慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）中的應(yīng)用價值，為臨床提供可靠的診斷依據(jù)。方法 收集我院2011年3月至2016年3月初診CLL患者60例（CLL組），同時以60例增生性貧血患者為對照（貧血組）。使用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)測定其免疫型，評價免疫型特征。結(jié)果 CLL組患者HLA-DR+、CD5+和CD22+均為45例，CD19+38例（63.33%），CD20+46例（76.67%），CD23+35例（58.33%），CD11c+22例（36.67%），CD38+7例（11.67%），CD11b+28例（46.67%），與貧血組比較，差異有顯著性。但CD10和FMC7在CLL組和貧血組均無陽性表達，差異無顯著性。結(jié)論 多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型檢測CLL相關(guān)抗原，可協(xié)助臨床準(zhǔn)確及時診斷和評估預(yù)后。

慢性淋巴細(xì)胞白血?。欢鄥?shù)流式細(xì)胞術(shù)；免疫分型

慢性淋巴細(xì)胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）是一種以體積小而形態(tài)成熟的淋巴細(xì)胞在外周血、骨髓和外周淋巴器官中克隆性增殖為特點的惡性疾病。2008年，WHO造血與淋巴組織腫瘤分類［1］中定義CLL均為B細(xì)胞型。該病在歐美國家發(fā)病率很高，近年來，隨著先進技術(shù)的應(yīng)用和對該病診斷水平的提高，我國患病率呈逐年上升趨勢［2］。本研究利用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測CLL患者免疫型表達情況，以協(xié)助臨床診斷和評估預(yù)后。

1　對象與方法

1.1對象

收集我院2011年3月至2016年3月初診CLL患者60例（CLL組），男39例，女21例，年齡38～82歲，中位年齡63歲，＞60歲者44例。以60例臨床確診為增生性貧血患者為對照（貧血組），男40例，女20例，中位年齡56歲。CLL診斷符合3版《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［3］。鑒別診斷主要參考Moreau等［4］提出的免疫表型積分系統(tǒng)，見表1，典型CLL積4～5分。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，納入患者均簽署知情同意書。

表1　CLL免疫表型積分系統(tǒng)

1.2研究方法

1.2.1試劑與儀器鼠抗人單克隆抗體CD45-PE、CD38-PE、CD20-FITC、CD10-FITC、CD5-FITC、FMC7-FITC、CD19-PE、CD3-PE、CD22-PE、CD23-APC、CD33-APC、HLA-DR-APC，陰性對照抗體小鼠IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-Percp、IgG1-APC試劑和FACS Calibur多參數(shù)四色流式細(xì)胞儀（美國Becton Dickinson公司），光學(xué)顯微鏡BX-53 limps（日本Olympus公司）。

1.2.2方法 經(jīng)無菌骨髓穿刺取0.2 ml骨髓液，涂片，瑞—姬氏染色，光鏡下進行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)實驗室診斷。另取2～4 ml骨髓液置于肝素鈉抗凝管，用四色流式細(xì)胞儀的Cell Quest軟件獲取每管10 000個細(xì)胞進行分析，對數(shù)取樣，通過CD45設(shè)門圈定淋巴細(xì)胞群，陽性水平根據(jù)FITC-/PE-/Per-cp-/APC-自發(fā)熒光范圍確定。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果以熒光強度＜102為陰性，102～103為弱陽性，＞103為強陽性，膜抗原≥20%為表達陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

采用病例對照研究，以Excel軟件和SPSS 16.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以百分率表示，CLL組與貧血組免疫分型結(jié)果采用Fisher確切概率法。以P＜0.05為差異有顯著性。

2　結(jié)果

流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，HLA-DR+59例（98.33%），CD5+和CD22+均為45例（75.00%），CD19+38例（63.33%），CD20+46例（76.67%），CD23+35例（58.33%），CD11c+22例（36.67%），CD38+7例（11.67%），CD11b+28例（46.67%），與貧血組比較，差異有顯著性（P＜0.05）。但是，CD10和FMC7在CLL組和貧血組均無陽性表達，差異無顯著性（P=1.000）。見表2。

3　討論

（1）CLL是一種惡性度較低的單克隆淋巴細(xì)胞增殖性疾病，臨床和病理表現(xiàn)往往有很大的異質(zhì)性。近年來，隨著我國人口老齡化，CLL發(fā)病率有逐年上升趨勢，并且隨著年齡的增長而增加。本研究發(fā)現(xiàn)，我院初診的60例CLL患者中位年齡為63歲，其中＞60歲44例，也是以老年人為主。

（2）流式細(xì)胞術(shù)白血病免疫分型是一種定量分析技術(shù)，利用熒光標(biāo)記的單克隆抗體作為分子探針，多參數(shù)分析白血病細(xì)胞的免疫表型，由此了解被測白血病細(xì)胞所屬細(xì)胞系列及分化程度。本研究采用CD45設(shè)門圈定淋巴細(xì)胞群，進而對其免疫型進行分析，由于CLL患者的淋巴細(xì)胞具有特征性表型［5］，B-CLL起源于B淋巴細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和克隆，按照WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］，我們納入的CLL患者均為B細(xì)胞型，即CD19+、CD5+，同時表達CD23、CD20，弱表達或不表達CD22或CD79b，不表達FMC7。本次研究發(fā)現(xiàn)，59例（98.33%）患者表達HLA-DR，高表達CD5、CD22、CD19、CD20、CD23、CD11c、CD11b，分別為45例（75.00%）、45例（75.00%）、38例（63.33%）、46例（76.67%）、35例（58.33%）、22例（36.67%）、28例（46.67%）。CD5+、CD23+是CLL的典型特征，本實驗中二者雙陽性為35例（58.33%），與貧血組比較，差異有顯著性。同時，CD10和FMC7在CLL組和貧血組均無陽性表達，差異無顯著性，與姚建新等［6］的研究結(jié)果基本一致。

表2　兩組免疫分型結(jié)果比較［n（%）］

（3）CD38表達于前體B細(xì)胞，是一種促使白細(xì)胞活化和增殖的II類跨膜糖蛋白，是CLL侵襲性的重要標(biāo)志，具有獨立的預(yù)后意義。目前大部分研究認(rèn)為CD38表達與CLL預(yù)后呈負(fù)相關(guān)［7］，CD38+的CLL患者生存期明顯縮短，顯示出明顯的激活和疾病進展?fàn)顟B(tài)。本次實驗中由于CD38+的CLL患者僅7例（11.67%），因此需擴大檢測標(biāo)本量進一步驗證其預(yù)后意義。

（4）總之，多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)可以協(xié)助臨床醫(yī)師對CLL進行診斷、評估預(yù)后，具有重要的臨床意義，有利于進一步研究不同臨床分期和藥物治療前后其免疫型變化，促進對CLL的認(rèn)識與評價。

［1］Steven H S，Elias C，Nancy L H，et al.World Health Organization Classification of Tumours of Hematopoietic and Lymphoid Tissues［M］.Lyon：IARC Press，2008.

［2］邱錄貴.慢性淋巴細(xì)胞白血病治療模式的轉(zhuǎn)變［J］.中華血液學(xué)雜志，2014，35（4）：275-277.

［3］張之楠.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.3版.北京：科學(xué)出版社，2007.

［4］Moreau E J，Matutes E，A’Hern R P，et al.Improvement of the chronic lymphocytic leukemia scoring system with the monoclonal antibody SN8 （79a）［J］.Am J Clin Pathol，1997，108（4）：378-382.

［5］劉艷榮，常艷，王卉，等.慢性淋巴細(xì)胞白血病免疫表型分析［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2003，26（1）：17-20.

［6］姚建新，李建勇.126例慢性淋巴細(xì)胞白血病免疫表型分析［J］.中國血液流變學(xué)雜志，2016，16（3）：367-372.

［7］Delpoeta G，Maurilb I，Venditti A，et al.Clinical significance of CD38 expression in chronic lymphocytic leukaemia［J］.Blood，2001（98）：2633-2639.

R551.2

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1671-1246（2016）15-0143-02