代洪波　張艷

[摘要]目的：探討子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）不孕患者血清中白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平變化及其與EMS發(fā)病的關(guān)系。方法：選取我院術(shù)后病理診斷為EMS合并不孕癥患者65例作為觀察組，另外選取我院產(chǎn)科門診體檢健康的育齡婦女65例作為對照組，采用放射免疫法對TNF-α及IL-6進(jìn)行檢測，觀察兩組患者血清中TNF-α及IL-6水平變化。結(jié)果：觀察組的TNF-α、IL-6水平分別為（33.48±5.70）ng/L、（30.84±5.37）ng/L，對照組的TNF-α、IL-6水平分別為（16.39±4.74）ng/L、（14.71±3.28）ng/L，觀察組明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；Ⅰ～Ⅱ期患者的TNF-α、IL-6水平分別為（23.54±4.72）ng/L、（14.74±3.90）ng/L，Ⅲ～Ⅳ期患者的TNF-α、IL-6水平為（38.56+6.93）ng/L、（22.78±4.18）ng/L，Ⅲ～Ⅳ期患者明顯高于I～Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P

[關(guān)鍵詞]子宮內(nèi)膜異位癥；不孕癥；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-6

[中圖分類號]R711.74 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMS）是指具有活性的子宮內(nèi)膜腺體、間質(zhì)組織出現(xiàn)在子宮內(nèi)膜以外部位而引起的疾病，以宮骶韌帶及卵巢最為常見，又稱為內(nèi)異癥，是育齡期婦女常見的婦科疾病。其臨床特點(diǎn)表現(xiàn)為進(jìn)行性加重的盆腔疼痛及粘連，和惡性腫瘤一樣，具有侵襲性及轉(zhuǎn)移性，是導(dǎo)致育齡婦女不孕的重要原因之一。研究表明，大約45%的婦女患有子宮內(nèi)膜異位癥，而患有此病的婦女中有30%會出現(xiàn)不孕癥狀。子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制尚不明確，經(jīng)血逆流學(xué)說是為大家所接受的理論機(jī)制，近年來的臨床相關(guān)研究表明子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生與免疫因素有關(guān)，研究者們發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中出現(xiàn)了腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及白細(xì)胞介素-6（IL-6）的升高。本研究通過檢測子宮內(nèi)膜異位不孕癥患者血清中TNF-α及IL-6水平，旨在研究TNF-α及II-6與子宮內(nèi)膜異位不孕癥的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 一般資料

病例來源于我院2012年3月至2015年3月收治的子宮內(nèi)膜異位不孕癥患者65例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《婦產(chǎn)科學(xué)》（第8版）子宮內(nèi)膜異位癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）有進(jìn)行性痛經(jīng)史：（3）盆腔檢查可觸及結(jié)節(jié)或合并有囊性腫物者；（4）經(jīng)腹或腹腔鏡手術(shù)可見組織粘連、紫藍(lán)色病灶等；（5）術(shù)后病理確診為子宮內(nèi)膜異位癥；（6）患者臨床資料完整，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求，患者知情同意，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）免疫性、結(jié)核性、代謝性及內(nèi)分泌疾??；（2）近期內(nèi)服用激素進(jìn)行治療史；（3）復(fù)發(fā)性子宮內(nèi)膜異位癥；（4）合并有血液系統(tǒng)疾病及腫瘤患者。將65例子宮內(nèi)膜異位不孕癥患者設(shè)為觀察組，另外選取我院產(chǎn)科門診體檢健康的育齡婦女65例作為對照組。觀察組：根據(jù)美國生育協(xié)會修正（AFS）標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期32例，年齡23～37歲，平均（32.4±3.5）歲；Ⅲ～Ⅳ期33例，年齡24～40歲，平均（33.2±3.9）歲。對照組：年齡25～38歲，平均年齡（33.7±2.8）歲。兩組患者在年齡等一般資料方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

術(shù)前禁食12h，手術(shù)時進(jìn)行椎管內(nèi)麻醉，采用保守性手術(shù)方法，保留患者子宮及其附件，采用腹腔鏡切除局部病灶，分離粘連組織，修復(fù)創(chuàng)傷組織。

1.3 實(shí)驗(yàn)檢測原理

人TNF-α實(shí)驗(yàn)檢測原理：此檢測試劑盒采用雙抗體夾心法來測定標(biāo)本中人TNF-α的水平，將純化后的人抗體包被微孔板，將抗原（待檢測的樣品）依次加入包被單孔的微孔中，然后加入被過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人抗體，使二者充分進(jìn)行結(jié)合，形成所謂的抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物即為酶標(biāo)抗體復(fù)合物，在進(jìn)行充分洗滌之后，往抗原抗體復(fù)合物中加入顯色劑四甲基聯(lián)苯胺。在酶的催化作用下，四甲基聯(lián)苯胺會變成藍(lán)色，經(jīng)過酸化后，藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色。樣品含量水平與復(fù)合物顏色深淺呈正相關(guān)。最后在納米波長下用酶標(biāo)儀測定吸光度值，然后通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對比，來計(jì)算TNF-α的濃度。

人IL-6實(shí)驗(yàn)檢測：原理同人TNF-α實(shí)驗(yàn)檢測原理。

1.4 標(biāo)本采集方法

所有患者入院后在清晨進(jìn)行空腹采血，抽取外周靜脈血4mL置于無菌試管內(nèi)，在室溫下放置，并避免溶血，以免影響檢測的準(zhǔn)確性，所有血清樣本以3 000 r/min的速度離心5min后，棄去沉淀，取上清液置于-80℃的冰箱中凍存。采用放射免疫法對TNF-α及IL-6進(jìn)行檢測，IL-6 ELISA試劑盒購于美國尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司（生產(chǎn)批號：150521），TNF-α放射免疫試劑盒購于北京三博生物工程有限公司（生產(chǎn)批號：150526），所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒的說明進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x²檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者TNF-α及IL-6水平比較

觀察組的TNF-α水平明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；觀察組的IL-6水平明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。見表1。

2.2 不同分期子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者TNF-α及IL-6水平比較

Ⅲ～Ⅳ期患者的TNF-α水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；Ⅲ～Ⅳ期患者的IL-6水平明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。見表2。

2.3 子宮內(nèi)膜異位癥不孕癥患者手術(shù)前后TNF-α及IL-6水平比較

手術(shù)前患者TNF-α水平明顯高于手術(shù)后患者，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；手術(shù)前患者IL-6水平明顯高于手術(shù)后患者，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。見表3。

3 討論

育齡期婦女是子宮內(nèi)膜異位癥的高發(fā)人群，子宮內(nèi)膜異位癥病理學(xué)性質(zhì)為良性，但是如果長期存在會增加女性惡性腫瘤的發(fā)病率，給患者的家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響患者自身的生活質(zhì)量。近年來子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病率不斷上升，與現(xiàn)代女性頻繁流產(chǎn)是分不開的，流產(chǎn)容易破壞子宮內(nèi)膜。子宮內(nèi)膜異位癥引起患者不孕的具體機(jī)制及原因尚不明確，公認(rèn)的理論機(jī)制為經(jīng)血倒流。大部分孕齡期婦女可以通過內(nèi)分泌調(diào)節(jié)將經(jīng)血里夾雜的子宮內(nèi)膜清除掉，但小部分人因自身體質(zhì)較弱或外界環(huán)境影響而引起內(nèi)分泌紊亂，從而無法清除子宮內(nèi)膜，殘留下來的子宮內(nèi)膜會在盆腔部位種植，發(fā)生免疫應(yīng)答，刺激血管增生，并進(jìn)展為子宮內(nèi)膜異位病灶。近年來研究表明細(xì)胞因子、多種炎癥因子、酶類均參與了這一異常種植過程，并參與了病灶形成及發(fā)展過程，但其具體作用機(jī)制尚不明確。

TNF-α是由NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等產(chǎn)生，具有改變內(nèi)皮細(xì)胞特性、殺傷腫瘤細(xì)胞、促進(jìn)血管增生、調(diào)節(jié)代謝等功能，同時研究者們還發(fā)現(xiàn)TNF-α能夠誘導(dǎo)IL-6、IL-8等炎性因子表達(dá)，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)異常的子宮內(nèi)膜時，發(fā)生異位的內(nèi)膜組織可以作為抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，引起血液中的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增多，進(jìn)而引起炎性因子釋放增加。TNF-α促進(jìn)血管增生作用體現(xiàn)在其可促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞粘附及子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖，有助于維持女性正常月經(jīng)周期及排卵功能，TNF-α的異常增高可引起患者不孕、早產(chǎn)、流產(chǎn)等疾病的發(fā)生，其與抗精子抗體聯(lián)系密切。IL-6是一種來源于單核細(xì)胞、羊膜細(xì)胞、纖維細(xì)胞、滋養(yǎng)層細(xì)胞、上皮細(xì)胞等的糖蛋白，參與機(jī)體的創(chuàng)傷愈合和炎癥反應(yīng)，其表達(dá)增高與盆腔局部粘連及輸卵管損傷具有相關(guān)性。同時還能參與炎癥瘢痕形成，刺激成纖維細(xì)胞增生，引起輸卵管阻塞導(dǎo)致不孕等。多數(shù)臨床研究表明子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中的IL-6明顯高于正?；颊撸腥苏J(rèn)為是由于子宮內(nèi)膜處于分泌期，從而導(dǎo)致IL-6水平增高，可能與激素含量升高有關(guān)；亦有研究表明IL-6可以刺激P450芳香酶表達(dá)，導(dǎo)致異位內(nèi)膜發(fā)生種植，其在卵泡中的表達(dá)也會相應(yīng)增高，引起卵泡發(fā)育不良及受精卵分泌受限，從而導(dǎo)致不孕癥。

本研究結(jié)果表明，觀察組的TNF-α、IL-6水平明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）：Ⅲ～Ⅳ期患者的TNF-α、IL-6水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；手術(shù)前患者TNF-α、IL-6水平明顯高于手術(shù)后患者，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。表明子宮內(nèi)膜不孕癥患者的TNF-α、IL-6水平明顯高于正?；颊撸⑶遗c疾病分期情況具有相關(guān)性，在進(jìn)行手術(shù)治療后，患者TNF-α、IL-6水平顯著降低。Gallicchio等對子宮內(nèi)膜不孕癥患者血清中TNF-α、IL-6水平進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，二者具有相關(guān)性，與本研究結(jié)果一致。

綜上所述，IL-6及TNF-α可能參與了子宮內(nèi)膜不孕癥病情的發(fā)生及進(jìn)展過程，通過對患者IL-6及TNF-α水平進(jìn)行測定將有助于臨床醫(yī)生判斷子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者的病情發(fā)展情況及預(yù)后。

（收稿日期：2015-07-15）endprint