馮建文

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院，哈爾濱 150069)

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高效液相色譜法測(cè)定豆制品(腐竹)中吊白塊的含量

馮建文

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院，哈爾濱 150069)

目的：建立高效液相色譜法(HPLC)直接測(cè)定各類食品中吊白塊的特異性，準(zhǔn)確度高的方法,以保證人體健康。方法：在酸性溶液中，食品中殘留的甲醛次硫酸氫鈉分解釋放出甲醛和亞硫酸鹽，甲醛與2，4-二硝基苯肼發(fā)生加成反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在HPLC上用乙腈與水做流動(dòng)相，通過(guò)C18柱分離，利用紫外檢測(cè)器，在365nm波長(zhǎng)下測(cè)定。結(jié)果：其產(chǎn)物有很高的響應(yīng)值，其色譜峰面積與吊白塊的含量呈正相關(guān)，r=0.9998，線性范圍為0～52μg，回收率94.0%～100.5%，RSD=2.6%。結(jié)論：該方法特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，線性關(guān)系好，適用于多種食品中添加吊白塊的檢測(cè)。

吊白塊(甲醛次硫酸氫鈉)；甲醛；高效液相色譜法；二硝基苯肼

0　引言

吊白塊, 又稱雕白粉，系以福爾馬林結(jié)合亞硫酸氫鈉再還原制得，化學(xué)名稱甲醛次硫酸氫鈉, 分子式NaHSO2· CH2O· 2H2O, 分子量154.11, 常在印染工業(yè)和橡膠工業(yè)中使用。常溫下較為穩(wěn)定，高溫下具有極強(qiáng)的還原性，有漂白作用，易溶于水，遇酸即分解，其水溶液在60℃以上就開(kāi)始分解出有害物質(zhì)，120℃以下分解產(chǎn)生甲醛、二氧化硫和硫化氫等有毒氣體。[1]

吊白塊是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，對(duì)人體的肺、肝臟和腎臟損害極大，普通人經(jīng)口攝入純吊白塊10克就會(huì)中毒致死，其高溫分解出來(lái)的甲醛能與體細(xì)胞的原生質(zhì)中的蛋白質(zhì)結(jié)合, 改變蛋白質(zhì)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)并凝固, 從而具有殺傷力。甲醛對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有麻醉作用, 尤其是對(duì)視力有強(qiáng)烈的毒害作用；甲醛還能損傷細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì), 是可疑的致癌物和重要的環(huán)境污染物。[2]雖然國(guó)家明文規(guī)定嚴(yán)禁在食品加工中使用，但還是被一些不法商販作為增白、防腐、增強(qiáng)韌性用于豆制品、米粉、魚翅、糍粑等食品加工中，造成食品污染，嚴(yán)重影響人體健康。

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定豆制品(腐竹)中甲醛含量，間接測(cè)定是否添加吊白塊，以確保食品質(zhì)量安全，保障人體健康。

本實(shí)驗(yàn)依據(jù)GB/T 21126-2007《小麥粉和大米粉及其制品中甲醛次硫酸氫鈉的含量測(cè)定》，采用高效液相色譜法測(cè)定豆制品中甲醛次硫酸氫鈉含量。[3]該法在酸性溶液中，樣品中殘留的甲醛次硫酸氫鈉分解釋放出的甲醛被水提取，提取后的甲醛與2，4-二硝基苯肼發(fā)生加成反應(yīng),生成黃色的2,4-二硝基苯腙，用正己烷萃取后，經(jīng)高效液相色譜儀分離，與標(biāo)準(zhǔn)甲醛衍生物的保留時(shí)間對(duì)照定性，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。

1　實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

1.1儀器

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀 No：I-HPLC-201010-007(色譜柱：C18柱 檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器)；Discovery DV215CD電子天平；SHA-C水浴恒溫振蕩器；組織攪碎機(jī)；旋渦混勻器；CU-600恒溫水浴鍋。

1.2試劑及溶液

所用化學(xué)試劑中，乙腈、正己烷為色譜純，其余均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為重蒸水、

1)甲醛/水溶液(10.4mg/ml；中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；批號(hào)：10001 BW3450)；

2)鹽酸-氯化鈉溶液：稱取20g氯化鈉與1000ml量瓶中，用少量水溶解，加60ml37%的鹽酸，加水至刻度；

3)磷酸氫二鈉溶液：稱取18gNa2HPO4·12H2O，加水溶解并定容至100ml；

4)2,4-二硝基苯肼純化：稱取20g2,4-二硝基苯肼于燒杯中，加167ml乙腈和500ml水，攪拌至完全溶解，放置過(guò)夜。用濾紙過(guò)濾結(jié)晶，分別用水和乙醇洗滌5-6次后于干燥器中備用；

5)衍生劑：稱取經(jīng)純化處理的2,4-二硝基苯肼200mg，用乙腈溶解并定容至100ml；

6)甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確移取甲醛/水溶液500μl，加水溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含甲醛0.052mg；

7)樣品：腐竹(A廠 批號(hào)：0453)，腐竹(B廠 批號(hào)：0456)，腐竹(C廠批號(hào)：046204650469 )。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜分析條件

化學(xué)鍵合C18柱(4.6mm×250mm)，粒徑5μm；流動(dòng)相乙腈-水(70：30)；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)365nm，進(jìn)樣量10μl；柱溫40℃。

2.2樣品前處理

精確稱取5g豆制品于250ml的具塞三角瓶中，加200ml鹽酸-氯化鈉溶液，于組織攪碎機(jī)中勻漿3min，置于振蕩器上振蕩提取40min。移取20ml提取液于50ml的離心管中，于12000r/min離心15min，上清液備用。

2.3樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

2.3.1樣品溶液的制備

取2.0ml樣品處理所得上清液于25ml比色管中，加入1.0ml磷酸氫二鈉溶液、0.5ml衍生劑，補(bǔ)加水至10ml，蓋上塞子，渦旋混勻。于50℃恒溫水浴加熱40min，取出用流水冷卻至室溫。準(zhǔn)確加入5.0ml正己烷，將比色管橫置，水平方向振搖5次，再將比色管傾斜放置，增加正己烷與水溶液的接觸面積。在一個(gè)小時(shí)內(nèi)，每隔5min振搖3～5次。再靜置30min，取正己烷層，過(guò)0.45μm有機(jī)相微孔濾膜，直接供HPLC測(cè)定。

2.3.2曲線的繪制與樣品測(cè)定[4]

準(zhǔn)確移取甲醛/水溶液500μl，加水溶解并定容100mL，此溶液每毫升含甲醛0.052mg。制成甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液(52μg/ml)。準(zhǔn)確移取甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液0μl、50μl、100μl、200μl、500μl、1000μl(相當(dāng)于0、2.6、5.2、10.4、26、52μg甲醛)于25ml比色管中，分別加入2.0ml鹽酸-氯化鈉溶液、1.0ml磷酸氫二鈉溶液、0.5ml衍生劑，補(bǔ)加水至10ml，蓋上塞子，渦旋混勻，按2.3.1處理，即得。取10μl進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量，每個(gè)濃度重復(fù)做兩次，取平均值，以峰面積與甲醛濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取樣品處理液10μl注入HPLC測(cè)得積分面積后從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，計(jì)算甲醛含量。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

通過(guò)配制的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液按2.3.2進(jìn)行，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，做峰面積(Y)與甲醛含量(X)的關(guān)系曲線，得到其線性方程為Y=74380X+5194.9(r=0.9998)

表1　標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)數(shù)據(jù)

結(jié)果表明，甲醛含量在0-52μg時(shí)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)

取樣品(C廠 批號(hào)0465)5g，精密稱定，按照2.3.1處理，制備供試品溶液。在相同的色譜條件下測(cè)定6次,結(jié)果如下：結(jié)果表明，精密度良好。

表2　精密度試驗(yàn)

2.6樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

樣品0456按2.2項(xiàng)下方法處理，按2.3.1制備供試品溶液，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，在0h、2h、4h、6h、8h分別測(cè)定其峰面積。

表3　樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，樣品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD=2.5%。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(A廠 批號(hào)0453)，按2.2項(xiàng)下方法處理，按2.3.1制備6份供試品溶液，測(cè)得結(jié)果如下：

表4　重復(fù)性試驗(yàn)

2.8加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取約5g樣品(B廠 批號(hào)0456)，加入相應(yīng)量的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，按2.3.1制備供試品溶液，依法測(cè)定，按下列公式計(jì)算回收率。

回收率=(測(cè)得量-樣品含量)/標(biāo)準(zhǔn)加入量×100%

表5　加樣回收率試驗(yàn)

3　樣品測(cè)定結(jié)果

按2.2項(xiàng)下方法處理樣品，按照2.3.1制備供試品溶液，分別對(duì)5批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果如下：

4　討論

4.1反應(yīng)條件的選擇

批號(hào)稱樣量生產(chǎn)企業(yè)含量(μg/g)04535.0967A廠25.7204565.0098B廠5.3604625.0123C廠3.7904655.0909C廠4.6804695.0979C廠3.86

圖1　對(duì)照品液相色譜圖

圖2　供試品色譜圖

試驗(yàn)中通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定產(chǎn)物2，4-二硝基苯腙的含量，間接求出樣品中甲醛含量，在試驗(yàn)中加入磷酸氫二鈉，且水浴溫度控制在50℃的原因是：產(chǎn)物苯腙熔點(diǎn)較低，且在酸性條件下可水解為原來(lái)的醛，為防止苯腙水解，需控制溶液的pH值、反應(yīng)溫度在一定范圍內(nèi).[6]實(shí)驗(yàn)表明，在50℃時(shí)有利于苯腙的合成反應(yīng)，又不會(huì)造成其他成分的分解，色譜峰穩(wěn)定清晰。

4.2萃取

用正己烷萃取水溶液中的苯腙時(shí)，需每隔5min振搖3～5次，使兩種非均相溶劑充分混合，提高萃取效率。試驗(yàn)中易發(fā)生乳化現(xiàn)象，使兩液相不能很清晰地分開(kāi)，可采用以下方法處理:[7]1)較長(zhǎng)時(shí)間放置；2)因堿性原因產(chǎn)生乳化，可加入幾滴稀硫酸振搖后破除乳化；3)還可加入破壞乳化的物質(zhì)如乙醇，增大苯腙在有機(jī)相中的溶解度，更好得溶于正己烷中。

4.3結(jié)果分析

由于食品中大多含有不同水平的甲醛本底值,[8]按照實(shí)驗(yàn)方法測(cè)得的甲醛含量超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)上限值10ug/g時(shí)，需要考慮是人為添加的吊白塊分解產(chǎn)生的甲醛，還是由于食品本身在該實(shí)驗(yàn)條件下處理分解產(chǎn)生的甲醛。即存在不確定因素，有待繼續(xù)探索研究。

5　結(jié)語(yǔ)

本方法采用酸水解的方法解離出豆制品中甲醛后，通過(guò)2，4-二硝基苯肼衍生—高效液相色譜法測(cè)定樣品中甲醛的含量，具有良好的線性關(guān)系，靈敏度高，重復(fù)性好，適用于豆制品中甲醛含量測(cè)定.[5]通過(guò)甲醛含量的測(cè)定值，可以間接檢測(cè)出食品中是否添加吊白塊，即甲醛次硫酸氫鈉含量是否超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)值。

[1]馮婧媛.食品中添加吊白塊的危害及檢測(cè)方法[J].保鮮與加工， 2011，11(4)：43-47.

[2]余明池.食品中吊白塊的測(cè)定方法研究進(jìn)展[J].安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，8(4):280-281. [3]GB/T21126-2007.小麥粉與大米粉及其制品中甲醛次硫酸氫鈉含量的測(cè)定[S].

[4]蔡寶昌.中藥制劑分析[M].高等教育出版社，2007:90-93.

[5]馬敬軍，周德慶，柳淑芳等.二硝基苯肼衍生—高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中甲醛含量的研究[ J]. 海洋水產(chǎn)研究，2005, 26(1): 28-31.

[6]倪沛洲.有機(jī)化學(xué)[M].6.人民衛(wèi)生出版社，2010:281-282.

[7]宋毛平，劉宏民，王敏燦.有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].鄭州大學(xué)出版社，2004:64-65.

[8]鄧紅，劉曉莉，魏強(qiáng)等.淀粉及面制品中吊白塊的鑒定試驗(yàn)探討[J]. 中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2002, 14(3): 21-24.

(編輯馬海超)

The Determination of Sodium Sulfoxylate Formaldehyde in Bean Products by HPLC

FENG Jianwen

(Department of Gardening, Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150069, China)

Objective: Establish a method with high specificity and accuracy for the direct determination of sodium sulfoxylate formaldehyde in foods by high performance liquid chromatography (HPLC), in order to keep people’s health. Methods: The sample was analyzed to sulfur dioxide and formaldehyde under acidic conditions. Formaldehyde and 2,4-Dinitrophenyl hydrazine produce a yellow substance. The product in HPLC by water and acetonitrile mobile phase, was separated by C18column, using UV detection. The absorbance was determined by pararosaniline hydrochloride colorimetric at 365 nm．Results: The products have a high response value. And the chromatographic peak area was positively correlated with the content of sulfoxylate, r=0.9998; and linear range was 0～52μg; recovery is 94.0%～100.5%; and RSD=2.6%．Conclusions: This method has a strong specificity, high accuracy, good repeatability, and good linear relationship, which is suitable for determination of most kinds of foods with sodium sulfoxylate formaldehyde．

sodium sulfoxylate formaldehyde (SSF); formaldehyde; high performance liquid chromatography (HPLC); dinitrophenyl hydrazine

2016-03-01

馮建文(1988.03—)，科員。主要研究方向：蔬果加工。

S-3

B

1672-0601(2016)06-0001-04