張紅兵　芮平平　張登平　楊曉偉　繆 超　馬士孝　孫小柱

（1.南京市高淳區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京　211300；2.南京市高淳區(qū)東壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京　211300；3.南京市高淳區(qū)古柏鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京　211300）

豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病疫苗不同組合免疫試驗效果觀察

張紅兵1芮平平1張登平1楊曉偉2繆 超3馬士孝2孫小柱1

（1.南京市高淳區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京211300；2.南京市高淳區(qū)東壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京211300；3.南京市高淳區(qū)古柏鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京211300）

近幾年來，我區(qū)以建設高效生態(tài)畜牧業(yè)為目標，著力推進生豬養(yǎng)殖規(guī)?；⑸a標準化、管理規(guī)范化、經莒產業(yè)化，大力實施生豬標準化養(yǎng)殖，生豬產業(yè)已成為我區(qū)農業(yè)增效、農民增收的致富產業(yè)。隨著養(yǎng)豬業(yè)的快速增長，豬的傳染病也出現(xiàn)了更多、更新的種類，嚴重影響了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，尤其是豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病三病嚴重威脅著生豬的生產安全，雖經過幾年來的防控，但至今仍沒有得到徹底凈化。為探索科學免疫接種方法，確定合理有效的免疫程序，2012年我站申報實施了“規(guī)模豬場疫病防控標準化技術應用與推廣”三新工程項目，利用項目建設時間，筆者在本區(qū)轄內選擇了1個萬頭規(guī)模豬場的120頭仔豬開展了豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病三種疫苗不同組合方式的免疫對比試驗，并評價不同組合方式免疫后的抗體水平和免疫副反應情況，以便遴選出免疫效果好、副反應小的三種疫苗最佳的免疫組合方式，制定和優(yōu)化免疫程序，并在全區(qū)規(guī)模化養(yǎng)豬場推廣應用。

豬口蹄疫；豬瘟；高致病性豬藍耳病；疫苗；試驗；免疫效果

1 材料

1.1供試疫苗

（1）豬口蹄疫O型滅活疫苗——生產批號：1508001；生產日期：2015.08；有效期至2016.08；生產廠家：中牧實業(yè)股份有限公司蘭州生物藥廠。

（2）豬瘟活疫苗——生產批號：15080601；生產日期：2015.08.26；有效期至2017.02.25；生產廠家：中牧實業(yè)股份有限公司江西生物藥廠。

（3）高致病性豬藍耳病活疫苗——生產批號：20141112；生產日期：2014.11.26；有效期至2016.05.25；生產廠家：吉林和元生物工程有限公司。

1.2實驗試劑

（1）豬口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒（①生產批號：20160115101-2，有效期至2016.07.14，生產單位：中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所；②生產批號：20160330101-1，有效期至2016.09.23，生產單位：中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所）。

（2）豬瘟診斷試劑［BIONOTE CSFV Ab ELISA ］，生產批號：44BPO010；有效期至2017.05.17；生產廠家：韓國安捷。

（3）高致病性豬藍耳病診斷試劑［BIONOTE PRRS Ab ELISA 4.0］，生產批號：4404PO019；有效期至2017.05.16；生產廠家：韓國安捷。

1.3實驗儀器及器械

試驗檢測工作由高淳區(qū)畜牧獸醫(yī)站實驗室承擔，檢測所需的儀器及器械均符合實驗要求和標準。

1.4試驗動物

在高淳區(qū)山區(qū)片某萬頭規(guī)模豬場，選出飼養(yǎng)條件一致、健康狀況良好的育肥仔豬120頭（其中：40 日齡左右100頭、20 日齡左右20頭），在此之前均未接種任何疫苗。

2 試驗方法

2.1方案設計

隨機將100頭日齡均為 40 日齡左右的仔豬分成5組，即甲組、乙組、丙組、丁組、戊組，每組20頭；再將20頭日齡均為 20 日齡左右的仔豬作為己組，開展豬瘟細胞源活疫苗、高致病性豬藍耳病弱毒疫苗、口蹄疫0型滅活苗免疫組合試驗。其中：甲組同時分點免疫 CSF 和 HP-PRRS，1周后再進行 FMD 免疫；乙組同時分點免疫FMD 和 HP-PRRS，1周后再進行 CSF免疫；丙組單用三種疫苗，間隔1周；丁組同時分點免疫 FMD 和 CSF，1周后再進行 HPPRRS 免疫；戊組同時分點免疫FMD、CSF、HP-PRRS三種疫苗［1］；己組首免HP-PRRS（20日齡左右），1周后同時分點免疫FMD 和CSF，4周后再同時分點免疫FMD 和CSF。

2.2試驗豬疫苗注射方法

嚴格免疫操作規(guī)程，各組單種疫苗免疫采取豬左或右頸部肌肉注射；二種疫苗同時免疫采取豬左、右頸部肌肉分點注射；三種疫苗同時免疫采取豬左、右頸部肌肉分點注射（左一、右二或左二、右一），免疫劑量：口蹄疫0型滅活苗2ml，豬瘟細胞源活疫苗2頭份，高致病性豬藍耳病弱毒疫苗2頭份，并加施免疫標識。

2.3臨床不良反應觀察

免疫當天至第7d，給予仔豬連續(xù)體溫測量，并觀察豬只精神狀況是否良好、飲食是否正常、體溫有無升高、是否有其它嚴重不良反應（如呼吸急促、嘔吐、皮膚發(fā)紅等現(xiàn)象）。對應急反應強烈的仔豬及時注射腎上腺素脫敏，并記錄注苗時間及注苗后反應。

2.4免疫抗體檢測

2.4.1血樣采集

每組最后一次免疫完成后分別在第29d、44d和66d取血樣，常規(guī)分離血清，并做好編號記錄，放置在冰柜內保存，溫度設置在零下20℃，以待檢測。

2.4.2檢測方法

分離血清進行豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病抗體檢測，口蹄疫抗體檢測采用液相阻斷ELISA法；豬瘟抗體檢測采用抗體阻斷ELISA法；高致病性豬藍耳病抗體檢測采用抗體間接ELISA法。試驗過程嚴格按農業(yè)部相關疫病防治技術規(guī)范及ELISA檢測試劑盒說明書操作，并對各組每次抗體檢測結果進行比較，測算抗體合格率。

3 結果與分析

3.1免疫不良反應觀察結果

本試驗中六組樣本豬均未出現(xiàn)明顯的免疫副反應［2］。

表1　豬口蹄疫O型液相阻斷ELlSA檢測平均抗體效價及免疫抗體合格率

3.2免疫效力與試驗結果

3.2.1判定標準

根據農業(yè)部動物疫病強制免疫及監(jiān)測實施方案的要求與規(guī)定，運用液相阻斷ELISA檢測豬口蹄疫免疫抗體效價≥26判定為合格；運用抗體阻斷ELISA檢測豬瘟，抗體陽性判定為免疫合格；運用抗體間接ELISA檢測高致病性豬藍耳病，抗體陽性判定為免疫合格。所有已免豬只平均免疫抗體合格率≥70%判定為合格。

3.2.2口蹄疫免疫抗體檢測結果

采用液相阻斷ELISA檢測甲、乙、丙、丁、戊、己組豬口蹄疫免疫抗體效價及免疫抗體合格率結果見表1。

3.2.3豬瘟、高致病性豬藍耳病免疫抗體檢測結果

采用抗體ELISA法檢測甲、乙、丙、丁、戊、己組豬瘟、高致病性豬藍耳病抗體離散度及免疫抗體合格率結果見表2。

表2　豬瘟、高致病性豬藍耳病抗體ELlSA法檢測抗體離散度及免疫抗體合格率

3.2.4各組比較與分析

從表1可以看出，在豬口蹄疫方面，甲組、乙組、丙組、戊組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測平均抗體效價logG ＜23（戊組于第29d抗體效價略高），免疫抗體合格率均為0；丁組最后一次免疫后于第29d、44d采樣檢測平均抗體效價變動范圍為25＜logG＜26，免疫抗體合格率分別為55%和15%，于第66d檢測抗體效價＜23，免疫抗體合格率為0；己組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測平均抗體效價logG>26，免疫抗體合格率為100%，且抗體離散度小（標準差S＜0.1），整齊度高。

從表2可以看出，在豬瘟方面：甲組、乙組、丙組、丁組、己組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%；戊組最后一次免疫后于第29d、44d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%，于第66d檢測群體免疫抗體合格率為85%。且各組抗體離散度相差不大，整齊度較高。

從表2可以看出，在高致病性豬藍耳病方面：甲組、乙組、丙組、丁組、己組最后一次免疫后于第29d、44d、66d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%；戊組最后一次免疫后于第29d、44d采樣檢測群體免疫抗體合格率均為100%，于第66d檢測群體免疫抗體合格率為90%。且各組抗體離散度相差不大，整齊度較高。

4 結論

（1）從試驗檢測情況看，己組口蹄疫免疫效果最佳，丁組口蹄疫抗體效價和免疫抗體合格率均高于甲組、乙組、丙組、戊組，緣于它的免疫組合方式與己組相似。

（2）豬口蹄疫O型滅活疫苗免疫一次不能得到較高的抗體滴度，且平均抗體效價和保護率低。因此，口蹄疫必須進行二次以上免疫，才能產生堅強的免疫力。

（3）豬口蹄疫O型滅活疫苗、豬瘟弱毒疫苗、高致病性豬藍耳病活疫苗三種疫苗中任何二種或三種疫苗同時分點免疫注射，臨床上無嚴重的不良反應。

（4）在無二免情況下，各組豬瘟、高致病性豬藍耳病平均群體抗體合格率在一定時期均能達到國家規(guī)定的合格標準，但各組間相較免疫力及免疫持續(xù)期均存在差異。

（5）本研究通過對FMD、 CSF和HP-PRRS 三種疫苗進行不同組合同時分點免疫，發(fā)現(xiàn)己組采用的免疫組合方式（即：仔豬20日齡左右首免HP-PRRS，1周后同時分點免疫FMD 和CSF，4周后再同時分點免疫FMD 和CSF），免疫效果及副作用均優(yōu)于其他組合方式，具有效價高、安全性好等特性，效果令人滿意，值得在規(guī)模養(yǎng)豬場應用與推廣。為此，根據本區(qū)轄內規(guī)模豬場豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病等重大疫病血清流行病學調查及免疫組合試驗結果，結合我區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖環(huán)境，制定出如下免疫組合程序（供參考）：

①商品仔豬：仔豬18～21日齡首次免疫豬藍耳病弱毒苗，劑量為2頭份；28～30日齡同時分點免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，劑量分別為2頭份和2ml；60～65日齡同時分點免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，劑量分別為2頭份和2ml。

②種母豬：70日齡前豬瘟、口蹄疫、藍耳病三種疫苗接種程序同商品仔豬，以后每隔4個月同時分點免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，并每次于配種前使用藍耳病弱毒苗加強免疫，免疫劑量按說明書使用。

③種公豬：后備公豬使用藍耳病滅活苗初免，初免1個月后加強免疫一次藍耳病滅活苗；70日齡前豬瘟、口蹄疫二種疫苗接種程序同商品仔豬。以后每隔4個月同時分點免疫豬瘟弱毒苗和口蹄疫滅活苗，免疫7天后使用藍耳病滅活苗加強免疫，免疫劑量按說明書使用。

［1］梁朝君.豬口蹄疫 豬瘟 高致病性豬藍耳病三種疫苗不同組合同時分點免疫效果探析［J］.當代畜牧，2014，（4Z）：81-83.

［2］任宇斕，于厚軍，蔣文生，等.豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病三種疫苗不同組合同時分點免疫效果觀察與分析［J］.中國動物檢疫，2011，28（5）：67-71.

農業(yè)三新工程項目資助