張津銘　呂正濤　盧偉偉　李興艷　董永輝　祁軍　黃暉　郭風(fēng)勁　陳安民

·骨科護(hù)理·

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1對(duì)小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬水平的影響

張津銘呂正濤盧偉偉李興艷董永輝祁軍黃暉郭風(fēng)勁陳安民

目的通過研究基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal derived factor-1，SDF-1）對(duì)小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬的影響，探討SDF-1在骨性關(guān)節(jié)炎中的作用及機(jī)制。方法分離并體外培養(yǎng)小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，分別予以0、1、10、100、1 000 μg/L濃度的五組重組SDF-1蛋白干預(yù)24 h。運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞的微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule associated protein 1 light chain 3，LC3）和UNC-51樣激酶復(fù)合物1 （uncoordinated-51 like kinase 1，ULK1）mRNA表達(dá)情況，運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、ULK1及泛素連接蛋白62（ubiquitin-binding protein p62，p62）蛋白表達(dá)水平，通過透射電鏡觀察自噬溶酶體。結(jié)果RT-PCR結(jié)果顯示10、100、1 000 μg/L濃度條件下LC3、ULK1的mRNA水平明顯高于對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western Blot結(jié)果顯示1、10、100、1 000 μg/L的各組細(xì)胞的LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比值、ULK-1表達(dá)水平較對(duì)照組升高，p62蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。透射電鏡結(jié)果顯示經(jīng)SDF-1干預(yù)后，自噬溶酶體較對(duì)照組增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論SDF-1可誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬的發(fā)生，SDF-1可能通過調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬水平參與了骨性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1；軟骨細(xì)胞；自噬；骨關(guān)節(jié)炎

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal derived factor-1，SDF-1）又稱為CXC趨化因子配體-12［chemokine（C -X-C motif）ligand 12，CXCL12］，是屬于CXC趨化因子亞家族，其受體為CXC趨化因子受體4［chemokine（C-X-C）receptor 4，CXCR4］和趨化因子受體CXC趨化因子受體7［chemokine（C-X-C）receptor 7，CXCR7］，具有調(diào)控細(xì)胞動(dòng)員、遷移等作用［1］。

目前認(rèn)為SDF-1/CXCR4軸在骨性關(guān)節(jié)炎及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生中也起著重要作用［2］。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中SDF-1濃度較正常人增高，并且其濃度與骨性關(guān)節(jié)炎程度呈正相關(guān)，并發(fā)現(xiàn)SDF-1導(dǎo)致骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生可能通過其促進(jìn)軟骨細(xì)胞釋放基質(zhì)金屬蛋白酶-3（matrix metalloproteinase 3，MMP-3）、基質(zhì)金屬蛋白酶-13（matrix metalloproteinase 13，MMP-13）等導(dǎo)致軟骨損傷［3］。自噬是真核生物中高度保守的生理過程，缺氧、氧化應(yīng)激、營養(yǎng)缺乏及其他細(xì)胞應(yīng)激均能導(dǎo)致自噬水平的升高以維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞在惡劣條件下存活［4］，自噬在骨性關(guān)節(jié)炎中起重要作用［5］。

本研究擬通過研究不同濃度的SDF-1對(duì)小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬水平的影響，探討SDF-1在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展過程中的作用及機(jī)制。以期為進(jìn)一步揭示骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制及其藥物治療等提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

材料與方法

一、主要試劑及材料

胎牛血清（Gibco公司，美國）；Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基與F12營養(yǎng)素1∶1培養(yǎng)基（Dulbecco's Modified Eagle Media∶Nutrient Mixture F-12，DMEM/F12，Hyclone公司，美國）。Rever Tra Ace-α-逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、RT-PCR試劑盒（Toyobo公司，日本）。LC3抗體、ULK-1抗體、p62抗體（CST公司，美國）。甘油醛-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體、蛋白定量檢測(cè)試劑盒、凝膠試劑盒、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒、胰蛋白酶、Ⅱ型膠原酶（武漢博士德公司，中國）。重組小鼠SDF-1α蛋白（PeproTech公司，美國）。LC3、ULK1、GAPDH引物由武漢擎科生物公司合成。

二、小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的分離及培養(yǎng)

采用3～4天齡的C57BL/6小鼠，雌雄不限，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，為清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。常規(guī)處死小鼠后于無菌操作下游離膝關(guān)節(jié)，充分清理滑膜組織及半月板后以顯微剪分離關(guān)節(jié)軟骨組織，剪碎至1 mm3大小。依次用0.25%胰蛋白酶37℃消化30 min，0.2%Ⅱ型膠原酶消化6～ 8 h。收集小鼠細(xì)胞并接種于含10%胎牛血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基中，置于恒溫37.0℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細(xì)胞干預(yù)及分組

選取體外培養(yǎng)的第1～2代軟骨細(xì)胞按2×105個(gè)/孔接種于6孔板中，細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合后更換為無血清培養(yǎng)基并進(jìn)行藥物干預(yù)。行RT-PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)時(shí)，將細(xì)胞分為五組，分別予以SDF-1重組蛋白0、1、10、100和1 000 μg/L，干預(yù)時(shí)間為24 h，并設(shè)立3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。行透射電鏡檢測(cè)時(shí)將細(xì)胞分為0 μg/L和100 μg/L組，兩組分別予以SDF-1重組蛋白0、100 μg/L干預(yù)24 h，設(shè)立3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。

四、RT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)

抽提各組細(xì)胞總RNA，主要步驟如下:將實(shí)驗(yàn)處理后的細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS）洗滌3次，加入裂解液350 μl，充分裂解后收集懸液。12 000 g離心15 min，收集上清并靜置后加入200 μl三氯甲烷，靜置10 min后以12 000 g離心15 min。取上清液加入等體積異丙醇，充分混勻后離心去除上清液。經(jīng)75%乙醇洗滌后用無酶水重新溶解獲得總RNA。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中的隨機(jī)引物及逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。而后應(yīng)用RT-PCR儀對(duì)cDNA產(chǎn)物進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。反應(yīng)體系為20 μl，其中含SYBR RT-PCR SuperMix 10 μl，無酶水為7.4 μl，上、下游引物（表1）各0.8 μl，模板cDNA 1 μl。預(yù)變性:95℃30s。變性:95℃15 s；退火: 60℃15 s；延伸:72℃30 s；共40個(gè)循環(huán)。

表1　各基因引物序列及產(chǎn)物長(zhǎng)度

五、Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)

干預(yù)后的細(xì)胞用預(yù)冷的PBS洗滌，每孔加入100 μl細(xì)胞裂解液制備蛋白樣本。測(cè)定蛋白濃度后每孔加入20 μg蛋白樣本并進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜后使用5%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）溶液室溫?fù)u床上封閉1 h，加入按1∶1 000稀釋的一抗后于4℃孵育過夜，洗膜后加入按1∶5 000稀釋的辣根過氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP）標(biāo)記的二抗，室溫下孵育1 h。洗膜后用化學(xué)發(fā)光試劑盒顯色并采集照片，用Image Lab 5.1軟件測(cè)量條帶灰度值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

六、透射電鏡觀察自噬小體

干預(yù)后將軟骨細(xì)胞以0.25%胰酶消化脫壁，離心成細(xì)胞團(tuán)并用2.5%戊二醛磷酸鹽緩沖液固定，洗滌后再次用1%鋨酸固定液固定。經(jīng)乙醇、丙酮梯度脫水后包埋、固化，制備超薄切片后以3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色。透射電鏡觀察拍片。兩組細(xì)胞分別在電鏡下隨機(jī)挑選25個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體的數(shù)量并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

七、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組計(jì)量資料用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析及t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、SDF-1對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞ULK1和LC3的mRNA表達(dá)的影響

樣本經(jīng)RT-PCR檢測(cè)后運(yùn)用2-??Ct法進(jìn)行計(jì)算分析，結(jié)果顯示SDF-1濃度為0、1、10、100、1 000 μg/L各組細(xì)胞的ULK1的mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為: 1.00±0.16、1.14±0.29、1.83±0.23、2.47±0.38和1.98± 0.31，其中10、100和1 000 μg/L組較對(duì)照組升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1 a）。0、1、10、100和1 000 μg/L各組細(xì)胞的LC3的mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為:1.00±0.15、1.08±0.09、1.42±0.13、1.68±0.21和1.80±0.33，其中10、100和1 000 μg/L組的LC3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平較對(duì)照組增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1 b）。但1 μg/L組的ULK1、LC3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平較對(duì)照組，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

二、SDF-1對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及ULK1、p62蛋白表達(dá)水平的影響

Western Blot結(jié)果示各組細(xì)胞均表達(dá)LC3、ULK1、p62蛋白（圖2 a）。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞經(jīng)不同濃度SDF-1干預(yù)24h后，1、10、100和1000μg/L的各組細(xì)胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值較對(duì)照組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖2 b）。1、10、100和1 000 μg/L的各組的ULK-1蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖2 c）。1、10、100和1 000 μg/L的各組的p62蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖2 d）。

圖1　RT-PCR檢測(cè)ULK1及LC3的mRNA表達(dá)水平　a:經(jīng)不同濃度SDF-1干預(yù)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞ULK1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。1、10、100和1 000 μg/L組分別與0 μg/L組比較，P值分別為0.516、0.007、0.004、0.009；b:經(jīng)不同濃度SDF-1干預(yù)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞LC3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。1、10、100和1 000 μg/L組分別與0 μg/L組比較，P值分別為0.476、0.022、0.010、0.020

三、透射電鏡觀察SDF-1對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬小體的影響

透射電鏡實(shí)驗(yàn)中，0 μg/L組和100 μg/L組軟骨細(xì)胞經(jīng)透射電鏡檢查可見細(xì)胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等超微結(jié)構(gòu)（圖3 a、c）。圖3中白色箭頭所指示結(jié)構(gòu)即為自噬溶酶體，其內(nèi)可見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器結(jié)構(gòu)，部分內(nèi)容物已降解（圖3 b、d）?？梢娊?jīng)濃度為100 μg/L的SDF-1干預(yù)后，自噬溶酶體的數(shù)量較對(duì)照組增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖3 e）。

討論

一、自噬的定義及過程

圖2　Western Blot檢測(cè)并計(jì)算LC3-Ⅱ/Ⅰ比值以及ULK1、p62蛋白表達(dá)水平　a:蛋白凝膠電泳圖；b:條帶灰度分析計(jì)算LC3-II/I比值。1、10、100和1 000 μg/L組分別與0 μg/L組比較，P值分別為0.027、0.004、0.001、0.002；c:條帶灰度分析計(jì)算ULK1相對(duì)表達(dá)量。1、10、100和1 000 μg/L組分別與0 μg/L組比較，P值分別為0.001、0.012、0.001、0.005；d:條帶灰度分析計(jì)算p62蛋白相對(duì)表達(dá)量。1、10、100和1 000 μg/L組分別與0 μg/L組比較，P值分別為0.001、0.007、0.009、0.005

圖3　透射電鏡觀察小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬溶酶體（白色箭頭）（3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色） a:對(duì)照組，1 700×；b:對(duì)照組，3 500×；c:SDF-1組，1 700×；d:SDF-1組，3 500×；e:透射電鏡下觀察兩組細(xì)胞中自噬溶酶體的數(shù)量。與對(duì)照組比較，*P＜0.001

自噬現(xiàn)象最早被發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)60年代，是真核生物在自噬相關(guān)基因（autophagy related gene，Atg）的調(diào)控下通過溶酶體降解和回收細(xì)胞組分、營養(yǎng)物質(zhì)的高度保守的生物過程［6，7］。研究報(bào)道自噬在關(guān)節(jié)軟骨發(fā)育［8］、腫瘤［9］、神經(jīng)系統(tǒng)疾?。?0］中均發(fā)揮重要作用。自噬發(fā)生初期會(huì)形成一個(gè)小的類似“脂質(zhì)體”樣的雙層膜結(jié)構(gòu)，通過擴(kuò)張、延伸、封閉成為具有雙層膜結(jié)構(gòu)的球狀自噬小體，其內(nèi)常包裹細(xì)胞質(zhì)、降解蛋白、損傷細(xì)胞器等結(jié)構(gòu)，而后自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體，期間自噬體的內(nèi)膜被溶酶體酶降解，自噬體中的“貨物”也被降解，氨基酸、脂肪酸等產(chǎn)物可被回收供細(xì)胞重新利用，而殘?jiān)虮慌懦黾?xì)胞外或滯留在胞質(zhì)中，該過程可通過透射電鏡觀察［7，11］。當(dāng)自噬發(fā)生時(shí)，ULK-1（即ATG1在哺乳動(dòng)物中的同源物）承擔(dān)啟動(dòng)作用，胞質(zhì)型LC3（即LC3-Ⅰ）蛋白與磷脂酰乙醇胺結(jié)合形成膜型LC3（即LC3-Ⅱ）定位于自噬體的膜上，參與自噬體膜的延伸過程，因此通過測(cè)定LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值可以反映細(xì)胞自噬水平的變化［12］。自噬的底物p62通常在自噬增加時(shí)其降解增多，表達(dá)量減少，當(dāng)自噬被抑制時(shí)p62發(fā)生累積表達(dá)增高，相反自噬增加時(shí)其表達(dá)降低［13］。

二、SDF-1對(duì)細(xì)胞自噬水平的影響

SDF-1是一種趨化因子，具有誘導(dǎo)炎性細(xì)胞遷移、定植的作用。Kanbe等［14］在對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液的研究中發(fā)現(xiàn)，其SDF-1濃度較正常人增高，并且其濃度與骨性關(guān)節(jié)炎程度呈正相關(guān)。Herberg等［15］的研究表明SDF-1β能通過提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬水平使其在過氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡中存活下來。Yang等［16］發(fā)現(xiàn)SDF-1α可以誘導(dǎo)牙髓干細(xì)胞發(fā)生自噬和遷移。王天寶等［17］通過敲減SDF-1的受體CXCR4的表達(dá)，抑制了人結(jié)腸癌細(xì)胞的自噬水平。本研究中給予不同濃度SDF-1干預(yù)小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)高濃度SDF-1干預(yù)后，LC3、ULK1 mRNA水平與ULK-1蛋白表達(dá)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值較對(duì)照組明顯升高，p62蛋白水平較對(duì)照組明顯下降。結(jié)果提示高濃度SDF-1可以誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬的發(fā)生。

但SDF-1對(duì)細(xì)胞自噬水平的調(diào)節(jié)并不一致，Mei等［18］通過研究發(fā)現(xiàn)SDF-1濃度與子宮內(nèi)膜的自噬水平呈負(fù)相關(guān)。Hashimoto等［19］在對(duì)胃癌細(xì)胞系的研究中發(fā)現(xiàn)SDF-1可以通過使絲氨酸/蘇氨酸特異性蛋白激酶（serine/threonine-specific protein kinase，AKT）磷酸化激活哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路，導(dǎo)致MMPs的升高、細(xì)胞遷移和自噬水平的降低，并且通過予以雷帕霉素（mTOR信號(hào)通路抑制劑）可以抑制上述過程，提高胃癌細(xì)胞的自噬水平。由于自噬是一個(gè)受多種機(jī)制調(diào)節(jié)的復(fù)雜、動(dòng)態(tài)的過程，造成研究結(jié)果不一致的原因可能是在不同組織細(xì)胞、不同疾病時(shí)期條件下SDF-1對(duì)自噬水平的調(diào)節(jié)會(huì)受到其他調(diào)控機(jī)制影響而變化。本研究中通過透射電鏡觀察到軟骨細(xì)胞自噬溶酶體的形態(tài)，給予100 μg/L的SDF-1重組蛋白后，軟骨細(xì)胞中自噬小體的數(shù)量較對(duì)照組明顯增多，進(jìn)一步提示高濃度SDF-1能誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞自噬的發(fā)生。

三、SDF-1可能通過調(diào)控軟骨細(xì)胞自噬參與骨性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展

通常認(rèn)為適當(dāng)?shù)淖允煽梢允辜?xì)胞適應(yīng)缺氧、應(yīng)激的外界環(huán)境而使細(xì)胞存活，但過高水平的自噬則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡（即Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡）［20，21］。同時(shí)也有研究表明早期骨性關(guān)節(jié)炎患者，尤其是接近關(guān)節(jié)面的軟骨細(xì)胞的自噬水平較正常對(duì)照組明顯升高，但隨著骨性關(guān)節(jié)炎病情進(jìn)展，軟骨細(xì)胞的自噬水平則明顯降低［5］。Caramés等［22］在小鼠模型的研究中發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的自噬水平隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸降低。Almonte-Becerril等［23］認(rèn)為在骨性關(guān)節(jié)炎初期，自噬表現(xiàn)為軟骨損傷的代償機(jī)制發(fā)揮保護(hù)作用，但在骨性關(guān)節(jié)炎后期可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡而促進(jìn)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生。通過分析本研究的結(jié)果，可以推測(cè)在早期軟骨損傷后，SDF-1可能通過促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬從而抑制軟骨損傷，但高濃度的SDF-1可能會(huì)通過誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞自噬性死亡而加重骨性關(guān)節(jié)炎的病情進(jìn)展，SDF-1可能通過調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬水平參與了骨性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。

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Effect of stromal derived factor-1 on autophagy level of articular chondrocyte in mice.

ZHANG Jinming，LYU Zhengtao，LU Weiwei，LI Xingyan，DONG Yonghui，QI Jun，HUANG Hui，GUO Fengjin，CHEN Anmin. Department of Orthopaedics，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China

CHEN Anmin，E-mail:anminchen@hust.edu.cn

ObjectiveTo investigate the effect of stromal derived factor-1（SDF-1）on autophagy level of articular chondrocyte in mice and to explore the effect and mechanism of SDF-1 in osteoarthritis.Methods The articular chondrocytes were obtained from 3-to 4-days-old C57BL/6 mice，cultured in vitro，and treated by recombinant SDF-1 protein for 24 h.The concentrations of SDF-1 were 0，1，10，100 and 1 000 μg/L respectively. The mRNA levels of LC3 and ULK1 were detected by the real-time polymerase chain reaction（RT-PCR）.The expression levels of LC3-Ⅱ，LC3-Ⅰ，ULK1 and p62 proteins were examined by Western Blot.ResultsAfter chondrocytes were treated with SDF-1 of 10，100 and 1 000 μg/L，the mRNA expression levels of LC3 and ULK1 were up-regulated as compared with control group.The ratio of LC3-Ⅱto LC3-Ⅰand the expression of ULK-1 protein were increased，and the expression of p62 protein was reduced in SDF-1-treated groups（1，10，100 and 1 000 μg/L）as compared with control group（P＜0.05 for all）.Transmission electron microscopy revealed that as compared with control group，autophagic lysosomes were increased significantly after chondrocytes were treated with SDF-1（P＜0.05）.ConclusionSDF-1 can induce autophagy of articular chondrocytes in mice.SDF-1 maybe participate the progress of osteoarthritis through regulating autophagy level of articular chondrocyte.

Stromal cell-derived factor-1；Chondrocyte；Autophagy；Osteoarthritis

10.3969/j.issn.1674-8573.2016.04.011

國家自然科學(xué)基金（81472082，81572094）

430030武漢，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院骨科

陳安民，E-mail:anminchen@hust.edu.cn

（2015-12-26）