李　玲，張　琴，朱衛(wèi)敏，孫　蓮

(1 新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,新疆　烏魯木齊　830011; 2 烏魯木齊職業(yè)大學(xué)，新疆　烏魯木齊　830002)

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藥桑葉中1-脫氧野尻霉素(DNJ)的薄層鑒別的研究*

李玲1，張琴2，朱衛(wèi)敏1，孫蓮1

(1 新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,新疆烏魯木齊830011; 2 烏魯木齊職業(yè)大學(xué)，新疆烏魯木齊830002)

建立了藥桑葉中DNJ的薄層鑒別的方法。分析了不同薄層板、展開(kāi)劑、顯色劑及溫度對(duì)分離的影響。在試驗(yàn)中，以正丁醇-冰醋酸-水(5:2:1)為流動(dòng)相在硅膠G板上展開(kāi)，茚三酮為顯色劑，藥桑葉提取物中在與DNJ標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)應(yīng)位置上出現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)，Rf為0.36。分離后的斑點(diǎn)圓整、清晰，重現(xiàn)性好，符合薄層層析要求，可用于藥桑葉的質(zhì)量控制。

藥桑葉；DNJ；薄層鑒別

桑葉為?？?Moraceae)桑屬植物桑(Morus alba Linn.)的樹(shù)葉，是一種藥食兩用的植物。自古以來(lái)，傳統(tǒng)的中醫(yī)就將桑葉作為治療消渴癥的藥物應(yīng)用于臨床。新疆的藥桑屬于?？粕俸谏７N的一種，是新疆獨(dú)有的桑品種之一，是我國(guó)國(guó)內(nèi)唯一的具有22倍體花性染色體的桑品種，藥用價(jià)值極高[1]。在桑葉中1-脫氧野尻霉素(以下均用簡(jiǎn)稱：DNJ)含量遠(yuǎn)高于其它植物，具有降血糖、抗病毒和抗腫瘤轉(zhuǎn)移等作用，因此應(yīng)用價(jià)值和開(kāi)發(fā)前景非常廣闊[2]。無(wú)論是少量制備還是大量生產(chǎn)的過(guò)程中，都必須建立DNJ的分離鑒定方法，以控制其在制備、生產(chǎn)過(guò)程中的品質(zhì)。薄層層析法操作簡(jiǎn)單，成本較低，本文參考近幾年文獻(xiàn)中對(duì)DNJ的分析檢測(cè)方法，結(jié)合實(shí)際情況，對(duì)新疆藥桑葉中DNJ的薄層鑒別方法進(jìn)行了研究。

1　試劑與儀器

1.1材料與試劑

DNJ標(biāo)準(zhǔn)品(HPLC≥98%，上海源葉生物科技有限公司)；乙醇、三氯甲烷，氨水，正己烷，丙酮，正丁醇，冰乙酸、磷鉬酸，碘化鉍鉀，茚三酮，香草醛均為分析純。

硅膠G板(青島海洋)；堿性硅膠G薄層板及Al2O3薄層板，自制；藥桑葉，采自新疆不同地方，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院天然藥物教研室帕麗達(dá)·阿布力孜教授鑒定為?？浦参锼幧５娜~。

1.2主要儀器與設(shè)備

KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

2　試驗(yàn)方法

2.1溶液的制備

2.1.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取5.0 mg的DNJ標(biāo)準(zhǔn)品，置于5 mL容量瓶中，加入少量去離子溶解，定容，配制成濃度為1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2樣品的準(zhǔn)備

稱取5.0 g過(guò)40目篩的干燥的藥桑葉粉，40 mL 65%乙醇，超聲20 min，離心取清液，剩下的殘?jiān)儆?0 mL 65%乙醇重復(fù)處理一次，所得清液和前一次合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)溶液濃縮到較小體積，離心后取清液，再濃縮至0.5 mL[2]。

2.1.3顯色劑的配制

(1)磷鉬酸試劑：稱取10 g磷鉬酸，溶于100 mL乙醇中；噴灑后120 ℃條件下加熱15 min，再用氨氣熏。

(2)改良碘化鉍鉀：稱取碘化鉍鉀2 g，溶于20 mL冰乙酸中，溶解后加入50 mL蒸餾水，量取此溶液10 mL，加入20 mL 0.6 mol·L-1HCl溶液，加入100 mL蒸餾水。

(3)茚三酮顯色：稱取0.2 g茚三酮，溶于5 mL冰乙酸和95 mL正丁醇中；噴灑0.2%的茚三酮，105 ℃條件下加熱15 min。

(4)香草醛：稱取5 g香草醛溶于100 mL 10%硫酸乙醇溶液。

2.2薄層層析分析[3-4]

用毛細(xì)管吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液適量，距薄層板底部邊沿1 cm處點(diǎn)樣，吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑，放入已用展開(kāi)劑預(yù)飽和30 min 的層析缸中，在室溫條件下，進(jìn)行上行展開(kāi)，展距為8 cm，揮干展開(kāi)劑，顯色劑顯色，計(jì)算比移值Rf。

2.2.1薄層板的選擇

選取硅膠G薄層板、堿性硅膠G薄層板、Al2O3薄層板、按2.2步驟將各種薄層板放入展開(kāi)劑中展開(kāi)，考察不同薄層板的展開(kāi)效果。

2.2.2展開(kāi)劑的選擇

按2.2步驟將薄層板分別放入展開(kāi)劑中展開(kāi)，考察不同展開(kāi)劑不同配比的展開(kāi)效果，具體見(jiàn)表1、表2。

表1　不同展開(kāi)劑的配比

表2　一種展開(kāi)劑不同的配比

2.2.3顯色方法的選擇

選取2.1.3中顯色劑，考察DNJ的展開(kāi)效果，計(jì)算Rf值。

3　結(jié)果與討論[5-6]

3.1不同薄層板對(duì)桑葉中DNJ的展開(kāi)效果(表3)

表3　不同薄層板對(duì)桑葉中DNJ的展開(kāi)效果

從表3可以看出，用相同的展開(kāi)劑和顯色劑，桑葉中DNJ在不同薄層板的展開(kāi)效果表現(xiàn)出明顯差別，其中在硅膠G薄層板上的展開(kāi)效果明顯好于其它。

3.2不同展開(kāi)劑對(duì)桑葉中DNJ的展開(kāi)效果(表4)

表4　不同展開(kāi)劑對(duì)桑葉中DNJ的展開(kāi)效果

從表4可以看出，用相同的薄層板和顯色劑，桑葉中DNJ在比例相近的不同展開(kāi)劑中展開(kāi)效果表現(xiàn)出明顯差別，其中在展開(kāi)劑為正丁醇:冰乙酸:水的展開(kāi)效果最好，斑點(diǎn)圓整且顯色。

3.3不同展開(kāi)劑對(duì)桑葉中DNJ的展開(kāi)效果(表5)

表5　同種展開(kāi)劑不同配比對(duì)桑葉中DNJ的展開(kāi)效果

從表5可以看出，用相同的薄層板和展開(kāi)劑，桑葉中DNJ在比例不同的展開(kāi)劑中展開(kāi)效果表現(xiàn)出明顯差別，其中在展開(kāi)劑正丁醇:冰乙酸:水(配比(V/V)為5:3:1)的展開(kāi)效果最好，斑點(diǎn)圓整，顯色，Rf=0.36。在TLC分析中，一般認(rèn)為分析組分的顯色斑點(diǎn)圓整，清晰，不拖尾，Rf值在0.3～0.7為最合適。

3.4不同展開(kāi)劑對(duì)桑葉中DNJ的展開(kāi)效果(表6)

表6　不同顯色劑對(duì)藥桑葉中DNJ的顯色效果

從表6可以看出，用相同的薄層板和相同比例的展開(kāi)劑，桑葉中DNJ對(duì)不同顯色劑展開(kāi)效果表現(xiàn)出明顯差別，其中當(dāng)顯色劑為0.2%的茚三酮時(shí)，顯色明顯。

4　結(jié)　論

DNJ是哌啶類多羥基生物堿，分子結(jié)構(gòu)中無(wú)特殊官能團(tuán)，展開(kāi)后，在自然光下觀察不到有色斑點(diǎn)，置于254 nm和365 nm 紫外燈下觀察也無(wú)斑點(diǎn)。本試驗(yàn)建立了DNJ薄層層析分離鑒定方法，確定最佳條件:選用硅膠G薄層板，展開(kāi)劑為正丁醇:冰乙酸:水(5:3:1)，顯色劑為0.2%茚三酮，DNJ的Rf=0.36，分離效果和顯色效果均很好。

[1]梁明,王鵬,張會(huì)慧,等.1-脫氧野尻霉素的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(17):9222-9223.

[2]徐鑫,魏曉蕊,葉群,等.超聲波輔助提取桑葉中1一脫氧野尻霉素工藝的響應(yīng)面法優(yōu)化[J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版),2012,33(4):81-86.

[3]孔菲,丁瑩,梁雪,等.川穹、當(dāng)歸的薄層層析鑒別[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2013,41(2):56-57.

[4]范程浪,王雪松,臧威,等.紫杉醇的薄層層析顯色反應(yīng)與應(yīng)用[J].中國(guó)釀造,2012,31(9):160-162.

[5]孫蓮，嚴(yán)寒信，姑再努爾.桑枝中黃酮類的HPLC指紋圖譜的研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2014,37(3):312-314.

[6]李曉娜,曹清明,鐘海燕,等.薄層層析技術(shù)在植物活性成分研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].食品與機(jī)械, 2010,26(6):144-147.

Study on DNJ in the Mulberry Leaves by Thin-layer Chromatography*

LI Ling1, ZHANG Qin2, ZHU Wei-min1, SUN Lian1

(1 Pharmacy College, Xinjiang Medical University, Xinjiang Urumqi 830011;2UrumqiVocationalUniversity,XinjiangUrumqi830002,China)

The TLC method was established to separate and identify DNJ in the mulberry leaves. The effects of different plate, developing agent and reagent on the separation of components were analyzed. In the experiment, using silica gel G plate, n-butanol:acetic acid:water(5:3:1) was used as a developing agent, chloro-O-toluidine was used for reagent. Rfvalues between the 2nd spot evolved by ester-phase of in and the spot of standard reagent DNJ was the same. Spots were round and dear, reproducibility well, Rf=0.36. The research aimed to lay the foundation for separating and identifying DNJ from mulberry leaves.

mulberry leaves; 1-deoxojirimyci; thin-layer chromatography

新疆醫(yī)科大學(xué)科研創(chuàng)新(XJC201316)。

李玲(1982-)，女，講師，主要從事新疆天然藥物開(kāi)發(fā)利用。

孫蓮(1961-)，女，教授，主要從事藥物分析研究。

TQ460

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1001-9677(2016)01-0073-03