何　山　劉　凱　黃永坤

(昆明醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科，昆明650000)

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美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散對(duì)UC大鼠血中PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF的影響

何山①劉凱①黃永坤②

(昆明醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科，昆明650000)

①現(xiàn)供職于云南省第一人民醫(yī)院兒科，昆明650000。

目的：探討模型UC大鼠血中前列腺素-E2(PG-E2)、白三烯B4(LT-B4)、血小板活化因子(PAF)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的水平，及經(jīng)過美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散治療干預(yù)后上述四個(gè)因子的變化情況，以了解這四個(gè)炎性因子在模型UC大鼠血中的意義及上述三種藥物對(duì)這四個(gè)炎性因子的干擾效果。方法：將100只大鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、美沙拉秦組、酪酸梭菌組、蒙脫石散組，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分別檢測(cè)各組小鼠血中第12天血中的PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF的含量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：①模型組、美沙拉秦組、酪酸梭菌組、蒙脫石散組較正常組的DAI及血清PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②與模型組比較，美沙拉秦組、酪酸梭菌組、蒙脫石散組的DAI及血清PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF含量均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散的治療效果比較，美沙拉秦及蒙脫石散療效較好，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，美沙拉秦與蒙脫石散療效無差異。結(jié)論：①在TNBS/乙醇法誘導(dǎo)的UC大鼠血清中PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF表達(dá)增高，與炎癥呈正相關(guān)。②美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散可下調(diào)模型大鼠促炎因子PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF的表達(dá)，這可能與UC大鼠腸道炎癥的緩解，促進(jìn)大鼠UC的恢復(fù)有關(guān)。

美沙拉秦； 酪酸梭菌； 蒙脫石散； 潰瘍性結(jié)腸炎；大鼠；細(xì)胞因子

潰瘍性結(jié)腸炎的臨床表現(xiàn)，主要以慢性、反復(fù)性、難以自限性的腹瀉、腹痛、嘔吐甚至便血，并伴隨不同程度的腸外表現(xiàn)及全身癥狀，人發(fā)熱，消瘦，營(yíng)養(yǎng)不良等。從而造成患者生活質(zhì)量明顯下降。UC的發(fā)病，可見于任何年齡，但一般好發(fā)于20～30歲[1]，無性別差異，兒童患者約占1/4[2]。幾乎大部分UC患者都存在較為明顯的免疫紊亂。目前研究發(fā)現(xiàn)多種免疫學(xué)因素參與了UC的發(fā)病[3]，如B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、吞噬細(xì)胞和單核細(xì)胞等，以及這些細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體、補(bǔ)體及其免疫復(fù)合物。免疫細(xì)胞分泌具有活性的細(xì)胞因子或多肽類。本研究的目的是通過TNBS/乙醇法建立大鼠UC模型，了解潰瘍性結(jié)腸炎免疫功能的變化及美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散對(duì)免疫功能的影響，研究討論酪酸梭菌、蒙脫石散治療UC的機(jī)理，為臨床治療UC提供新的依據(jù)。

1　資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯⑶鍧嵔】敌坌赃m齡(6～8 w)SD大鼠100只，隨機(jī)分成5組，每組20只，分別為健康組(A組)，模型組(B組)，美沙拉秦組(C組)，酪酸梭菌組(D組)，蒙脫石散組(E組)，除A組外，其余四組用TNBS(100 mg/kg)和50%乙醇溶液1∶1混合液從肛門注入造模，造模成功后，除A、B組外，其余三組分別每天灌服美沙拉秦、酪酸梭菌和蒙脫石散，并在第12天時(shí)處死大鼠，并采集腸道組織及血標(biāo)本。

1.2研究方法①觀察大鼠存活率：觀察不同模型中大鼠死亡情況；②大鼠的一般狀況：觀察大鼠每天的精神、毛發(fā)、大便性狀等。便血及腹瀉，黏液便的情況。然后對(duì)身體質(zhì)量，大便形狀及大便隱血實(shí)驗(yàn)這幾項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行UC評(píng)分(DAI評(píng)分)。DAI=(體質(zhì)量下降分?jǐn)?shù)+大便性狀分?jǐn)?shù)+便血分?jǐn)?shù))/3；③用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定各組大鼠血中PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF的含量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠情況經(jīng)過12 d的藥物灌胃結(jié)束了本實(shí)驗(yàn)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療，治療過程中，造模滿24 h模型組死亡大鼠1只；造模第2天模型組死亡大鼠2只，美沙拉秦組死亡大鼠3只，蒙脫石散組死亡大鼠1只；造模第3天酪酸梭菌組死亡3只；造模第4天蒙脫石組死亡1只。造模5 d后均無大鼠死亡。死亡原因考慮為嚴(yán)重的腹瀉、便血或腹脹導(dǎo)致，尸檢可見其結(jié)腸腸管充氣明顯，腸黏膜充血水腫和潰爛等，部分結(jié)腸因出血嚴(yán)重而發(fā)黑。中途死亡大鼠不計(jì)入評(píng)分，死亡率為11.9%。

2.2疾病活動(dòng)指數(shù)(Disease activity index，DAI)評(píng)分造模滿24 h開始每天觀察大鼠的精神、毛色情況，記錄大鼠的體重、大便情況，且每天通過傳統(tǒng)隱血實(shí)驗(yàn)方法觀察腸道出血情況，從而來DAI評(píng)分，各組評(píng)分結(jié)果見表1。

表1　各組DAI評(píng)分表Tab.1　

圖1　治療滿12 d各組遠(yuǎn)端結(jié)腸病理切片HE染色Fig.1　HE staining result of each group′s distal colon tissue after 12 days treatmentNote: A.Model group,ulcer deep into muscular layer with decreased of inflammatory cell count;B.Mesalazine group，ulcer area was stable and recovered almost normal with fiber tissue hyperplasia；C.Clostridium group，ulcer was repairing with mild inflammatory infiltrate and intestinal mucosal fibrosis；D.Montmorillonite group:significant lymphocyte infiltrate with mucosal partly congestion and edema,ulcer almost repaired.

表2　各組PGE2第12天的水平(pg/ml，n=8)Tab.2　PGE2 level of each group after 12 days treatment(ng/ml,n=8)

圖2　各組PGE2第12天含量柱狀圖，濃度(pg/ml)Fig.2　PGE2 level′s bar chart of each group after 12 days treatment(pg/ml)Note: Compared with the group B,PGE2 level of four intervention groups is decreased and most effective group is group E,followed by group C and group D after 12 days treatment.

圖3　各組LT-B4第12天含量柱狀圖，濃度(pg/ml)Fig.3　LT-B4 level′s bar chart of each group after 12 days treatment(pg/ml)

2.3結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)價(jià)處死大鼠后，解剖取結(jié)腸組織HE染色光鏡和電鏡下觀察病理改變, 主要觀察大鼠腸黏膜及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況，腺體結(jié)構(gòu)及杯狀細(xì)胞的變化，有無隱窩膿腫的形成，結(jié)腸黏膜上皮脫落及修復(fù)的情況，見圖1。

表3　各組LB-B4第12天的水平(pg/ml，n=8)Tab.3　LB-B4 level of each group after 12 days treatment

表4　各組PAF第12天的水平(pg/ml，n=8)Tab.4　PAI level of each group after 12 days treatment(pg/ml，n=8)

圖4　各組PAF第12天含量柱狀圖，濃度(pg/ml)Fig.4　PAF level′s bar chart of each group after 12 days treatment(pg/ml)Note: Compared with group B,PAF level of four intervention groups is decreased and most effective group is group C,followed by group D and group E after 12 days treatment.

2.4各組大鼠血中PG-E2、LT-B4、PAF和VEGF的水平各細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2～5及圖2～5。

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異性統(tǒng)計(jì)，由表6可知，大鼠血清中PGE2，LT-B4，PAF，VEGF的含量，在第12天時(shí)，模型組均比正常組升高。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；美沙拉秦、酪酸梭菌及蒙脫石散干預(yù)治療后，可降低UC大鼠血清中的PGE2，LT-B4，PAF，VEGF的含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)于降低PGE2含量的效果順序?yàn)槊擅撌?美沙拉嗪>酪酸梭菌組；降低LT-B4，PAF的含量的效果順序?yàn)槊郎忱好?蒙脫石散>酪酸梭菌組；降低VEGF含量的效果順序?yàn)槊擅撌⒔M>酪酸梭菌組>美沙拉秦組。各組治療效果美沙拉秦與蒙脫石散較好，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，美沙拉嗪與蒙脫石散之間比較，療效差異不明顯。

表5　各組VEGF第12天的水平(pg/ml，n=8)Tab.5　VEGF level of each group after 12 days treatment(pg/ml,n=8)

圖5　各組VEGF第12天含量柱狀圖，濃度(pg/ml)Fig.5　VEGF level′s bar chart of each group after 12 days treatment(pg/ml)Note: Compared with group B,VEGF level of four intervention groups is decreased and most effective group is group E,followed by group C and group D after 12 days treatment.

表6　各組細(xì)胞因子第12天水平Tab.6　Cytokine level of each group at 12th ±s，pg/ml，n=8)

3　討論

UC是一組以反復(fù)發(fā)作性腹痛、腹瀉及黏液便和血便為主要特點(diǎn)的，病變范圍主要在直腸和結(jié)腸的慢性炎癥性疾病，迄今為止發(fā)病原因及致病機(jī)制仍不明確。目前國(guó)內(nèi)外大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，UC與某種遺傳易感因素有關(guān)，并在遺傳易感的基礎(chǔ)上，在環(huán)境及腸道微生物作用下，腸道發(fā)生了一系列異常的免疫應(yīng)答，從而引起的一種以直腸和結(jié)腸為主的慢性非特異性的炎癥性病變。鑒于免疫因素占主導(dǎo)地位，故目前主要的研究的熱點(diǎn)是UC中的各種免疫機(jī)制。

PGE2與潰瘍性結(jié)腸炎前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)是花生四烯酸經(jīng)過環(huán)氧酶催化而產(chǎn)生的一種重要的脂質(zhì)代謝產(chǎn)物，它在許多炎性疾病的病灶中都有很高的表達(dá)，包括在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)[4]。近年來發(fā)現(xiàn)PGE2可以直接誘導(dǎo)和維持Th17相關(guān)的免疫反應(yīng)，PGE2受體在腸道粘膜固有層單個(gè)核細(xì)胞上有所表達(dá)，而且，PGE2受體EP4在潰瘍性結(jié)腸炎中，在CD4+的T淋巴細(xì)胞中是明顯上調(diào)的[5]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TNBS/乙醇法誘導(dǎo)的UC大鼠血清PGE2的濃度較正常大鼠明顯升高，提示PGE2是UC發(fā)病中高度表達(dá)的致炎因子。而美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散對(duì)PGE2的表達(dá)顯著下調(diào)，治療后的病變結(jié)腸的病理改變也有所減輕。說明PGE2的含量與UC病變的嚴(yán)重程度成正相關(guān)。證實(shí)了PGE2在UC的發(fā)病過程中至關(guān)重要的作用。

LT-B4與潰瘍性結(jié)腸炎白三烯最早在白細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，故而得名，是花生四烯酸經(jīng)5-脂氧合酶代謝產(chǎn)物，研究證實(shí)，白三烯無論是免疫調(diào)節(jié)還是炎癥趨化，都有很強(qiáng)的作用。白三烯由應(yīng)答炎癥的白細(xì)胞所釋放，并能趨化白細(xì)胞，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，從而分泌下一級(jí)的細(xì)胞因子，如組胺等，從而導(dǎo)致局部血管的通透性增強(qiáng)，水腫，分泌及滲出增多等。同時(shí)可以讓白細(xì)胞活化，并讓活化的白細(xì)胞黏附于炎癥組織上，進(jìn)一步加重炎癥。許多研究都已經(jīng)證實(shí)，很多免疫系統(tǒng)方面的疾病是由于體內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群失衡所導(dǎo)致的，尤其是Th1/Th2淋巴細(xì)胞亞群的失衡，而LT-B4恰恰能加重這種失衡。LT-B4主要是通過BLT1受體加速Th2型免疫應(yīng)答及Th2類細(xì)胞因子(IL-5、IL-13)的釋放，從而導(dǎo)致體液免疫處在高反應(yīng)狀態(tài)，加重了Th1/Th2失衡的[6,7]。國(guó)外研究還發(fā)現(xiàn)，LT-B4可能參與了小鼠樹突細(xì)胞的分化、成熟及活化過程，而這一過程，可以提高T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞對(duì)靶器官的殺傷作用[8]。本實(shí)驗(yàn)中，造模后的大鼠血清LT-B4的濃度較正常大鼠明顯升高，而經(jīng)過美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散治療后，LT-B4均顯著下降。說明LT-B4作為促炎因子與UC的發(fā)病高度相關(guān)，而炎癥的修復(fù)是通過抑制LT-B4的產(chǎn)生來發(fā)揮作用的。

PAF與潰瘍性結(jié)腸炎血小板活化因子(PAF)是花生四烯酸代謝相關(guān)的，內(nèi)源性的，具有強(qiáng)大生物活性的一類細(xì)胞因子，它的化學(xué)成分為乙酰甘油醚磷酸膽堿，磷脂酶A2是它的限速酶。體內(nèi)的PAF主要來自于血小板、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等。PAF的主要作用是活化血小板，促進(jìn)血小板聚集，中性粒細(xì)胞趨化及脫顆粒，中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)，從而收縮血管，增加血管的通透性，加劇炎癥的發(fā)生。PAF是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的血小板聚集誘導(dǎo)劑[9]。PAF主要是通過與相應(yīng)靶細(xì)胞膜上的PAF受體結(jié)合從而發(fā)揮作用。它可以引起血小板聚集，從而激活炎性細(xì)胞釋放大量的前列腺素及組胺，白三烯類物質(zhì)，使血管通透性進(jìn)一步增強(qiáng)，局部水腫及滲出增加。研究表明，在UC患者身上，PAF可以活化血小板，而活化的血小板又刺激機(jī)體產(chǎn)生PAF，形成正反饋效應(yīng)，導(dǎo)致局部血管通透性增加，血小板聚集，血液動(dòng)力學(xué)改變，從而促進(jìn)PG-E2，白三烯等致炎因子的釋放，同時(shí)還可以上調(diào)白細(xì)胞黏附因子，趨化和鎖定白細(xì)胞，導(dǎo)致局部的炎癥進(jìn)一步加重[10-11]。本研究中，模型組的血中PAF濃度顯著高于生理鹽水對(duì)照組，美沙拉秦組、酪酸梭菌組、蒙脫石散組血清PAF的表達(dá)明顯下調(diào)而且低于模型組水平。表明PAF在UC炎癥中發(fā)揮著重要作用。

VEGF與潰瘍性結(jié)腸炎血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF),或稱血管通透性因子(VPF),最早在多種腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)，它可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化增殖，同時(shí)增加血管的通透性[12]。它對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖分化的機(jī)理，是由于它可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂，VEGF最先是從腫瘤細(xì)胞的分泌物中分離出來，現(xiàn)已證實(shí)它不僅在腫瘤血管生成，在其他的生理和病理以及血管生成中也是必不可少的誘導(dǎo)因子。UC病人腸黏膜組織中VEGF的轉(zhuǎn)錄水平和含量，都明顯高于正常人。最近幾年，國(guó)內(nèi)外的研究，均發(fā)現(xiàn)在UC患者中，血清里VEGF的水平顯著高于健康人群[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組VEGF的血清含量較正常組有所升高，治療組的血清VEGF含量均有所下降，五組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。能推測(cè)VEGF作為炎性細(xì)胞因子參與了UC的發(fā)病，而美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散可能通過下調(diào)VEGF的表達(dá)來抑制UC的炎性反應(yīng)。

PGE2、LT-B4、PAF、VEGF之間的相互作用：這四個(gè)細(xì)胞因子在本實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)在模型組大鼠的血清里，均明顯上調(diào)，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本文已對(duì)該四個(gè)因子導(dǎo)致UC的機(jī)理做了一定的闡述。那么，在國(guó)內(nèi)外大量的研究也表明，這四個(gè)因子之間，在致炎的過程中，也是相互關(guān)聯(lián)的[14]。

LT-B4作為一種炎性因子，它與支氣管哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及炎性腸病等多種炎性疾病密切相關(guān)，它與PGE2同為花生四烯酸在兩種酶系統(tǒng)催化下所生成的兩類衍生物，環(huán)氧合酶合成前列腺素、前列環(huán)素及血栓烷A-2，這些化合物都具促炎及抗炎特性。脂氧合酶合成花生四烯酸的羥酸衍生物，其中LTB-4是最強(qiáng)有力的趨化因子。一旦炎癥發(fā)生，前列腺素能夠激活T淋巴細(xì)胞的介導(dǎo)作用，并能擴(kuò)張血管，產(chǎn)生疼痛并導(dǎo)致血管通透性增加，而上述反應(yīng)能正向反饋LT-B4的表達(dá)，使LT-B4的水平提高，而當(dāng)LT-B4水平升高后，產(chǎn)生的下一級(jí)炎性因子，如組胺等，導(dǎo)致組織水腫，血管通透性進(jìn)一步加強(qiáng)，分泌物增多，炎癥加劇[15]。一旦LE-B4啟動(dòng)細(xì)胞因子風(fēng)暴之后，同時(shí)會(huì)激活PAF，因PAF與LT-B4同是花生四烯酸代謝相關(guān)的內(nèi)源性炎性因子，當(dāng)LT-B4導(dǎo)致血管通透性增加，炎性反應(yīng)加劇時(shí)，可以趨化炎性細(xì)胞，如嗜酸性粒細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞等，而PAF恰恰來自于這些細(xì)胞。隨著這些細(xì)胞的趨化，聚集，患者炎性部位的PAF也隨之升高，從而活化血小板，促進(jìn)血小板聚集，中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)，從而收縮血管，增加血管的通透性[16]。研究表明，PAF還可以通過誘導(dǎo)依賴NF-kB的各種血管新生因子的表達(dá)及蛋白質(zhì)的合成，其中最重要的就是VEGF，而VEGF此刻的產(chǎn)生，加劇了血管通透性，且促進(jìn)小血管的增生，導(dǎo)致局部的組織結(jié)構(gòu)進(jìn)一步混亂，微循環(huán)惡化，國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，VEGF本應(yīng)具有的保護(hù)性作用，在UC患者中并未體現(xiàn)出來[17]。故而，綜上所述，上述四個(gè)炎性因子之間在UC的發(fā)病中，是相互關(guān)聯(lián)，相互促進(jìn)的，它們本身不但能夠?qū)е聡?yán)重的組織炎癥，同樣還可以互相反饋促進(jìn)表達(dá)及合成，導(dǎo)致炎癥的進(jìn)一步加劇，病情惡化。

美沙拉秦治療UC的作用機(jī)制：美沙拉嗪較之傳統(tǒng)的柳氮磺吡啶類制劑，具有療效好，副作用小，患者耐受度高的特點(diǎn)，目前在臨床中已經(jīng)廣泛的使用，多種研究都已證實(shí)，美沙拉嗪在治療IBD尤其是潰瘍性結(jié)腸炎方面，有非常明確的療效[18]。

美沙拉嗪的作用主要在于，可以有效的抑制腸道上皮釋放炎性細(xì)胞因子，如前列腺素、白三烯等，從而抑制炎癥介導(dǎo)的黏膜損傷，對(duì)于那些已經(jīng)被炎性損傷的腸道黏膜，效果更為明顯[19]：①通過抑制結(jié)腸過氧化物酶以及黏膜釋放前列腺素和白三烯；②可以抑制血小板活化因子的活性及巨噬細(xì)胞的遷移；③通過一系列抑酶作用，如抑制環(huán)氧化酶，脂氧化酶，血栓合成酶等，從而減少花生四烯酸產(chǎn)生；④可以有效的通過清除氧自由基的作用，來抑制腸道上皮脂肪酸的氧化；⑤可增強(qiáng)熱休克蛋白表達(dá)；⑥可明顯降低NOS活性，從而下降NO水平；⑦可通過PPARy通道，負(fù)反饋調(diào)節(jié)NF-κB表達(dá)，增加抑炎介質(zhì)IL-10 的釋放并減少促炎介質(zhì)IL-2 的生成；⑧降低脂肪酸過氧化并組織T淋巴細(xì)胞促B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化，從而減少抗體的分泌，局部降低體液免疫的應(yīng)答，并能誘導(dǎo)腸黏膜組織內(nèi)淋巴細(xì)胞的凋亡及降低腸黏膜組織內(nèi)TNF-α與其受體的結(jié)合能力等[20]。

本研究證實(shí)，美沙拉秦對(duì)于UC的療效顯著。美沙拉秦明顯降低了DAI評(píng)分，減輕了UC大鼠結(jié)腸的炎癥改變，顯著下調(diào)促炎細(xì)胞因子PGE2、LT-B4的表達(dá)，一定程度降低了促炎因子PAF及VEGF的血清含量；證實(shí)美沙拉嗪在治療UC中的療效是確切的。

益生菌治療UC的作用機(jī)制：Fuller在1992年，把益生菌定義為[21]：通過飲食攝取的，能夠維持人類正常腸道內(nèi)微環(huán)境的微生物。在健康人類，消化道內(nèi)大概有約100萬億的微生物，其中細(xì)菌的種類就多達(dá)500余種，這些有益的菌類包括雙歧桿菌，大腸桿菌，糞鏈球菌，酪酸梭菌等。這些益生菌在人體內(nèi)起著維持體內(nèi)菌群平衡，維持正常腸道內(nèi)微生物屏障，維護(hù)消化道免疫的重要作用。

在上述的益生菌中，酪酸梭菌(Clostridium butyricum,C.butyricum)的研究比較豐富，目前已知，酪酸梭菌除了維持正常腸內(nèi)的菌群之外，還可以刺激Th1細(xì)胞亞群，促進(jìn)和維持Treg/Th17淋巴細(xì)胞亞群的分化與增殖，從而起到非常強(qiáng)大的抑炎作用[22]。

有研究表明，在UC患者的腸道內(nèi)，菌群失衡的情況非常明顯。由于菌群失衡，導(dǎo)致局部有害菌的增值，激活了內(nèi)源性的致炎通道，導(dǎo)致局部的炎癥及潰瘍經(jīng)久不愈，且這些有害的病原菌可以產(chǎn)生大量的炎性趨化因子，使得炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并分泌大量的如前列腺素，白三烯等細(xì)胞因子，激活T淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞，在細(xì)胞免疫和體液免疫的雙重作用下，進(jìn)一步使腸道上皮受損，炎癥加重。故如果補(bǔ)充益生菌，對(duì)腸道的炎癥減輕及修復(fù)，有明確的作用。

益生菌治療UC的可能機(jī)制為：①腸道由于菌群的失調(diào)，導(dǎo)致炎癥的發(fā)生，從而暴露了更多的腸道細(xì)胞在致病因素之下，而補(bǔ)充益生菌可以重建正常的菌群，維持并修復(fù)細(xì)胞骨架，加強(qiáng)細(xì)胞之間的緊密連接，從而使腸道的屏障功能得以恢復(fù)[23]；②腸道菌群失調(diào)導(dǎo)致了腸道免疫的失衡，而補(bǔ)充益生菌可以下調(diào)巨噬細(xì)胞的活性，減緩炎性細(xì)胞的趨化和浸潤(rùn)，同時(shí)調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群，尤其是促進(jìn)Th1細(xì)胞的活性，并調(diào)節(jié)Treg/Th17抑炎淋巴細(xì)胞亞群，從而起到減輕及改善炎癥的作用；③由于益生菌的加入，直接改善了腸道菌群，優(yōu)勢(shì)的益生菌阻止其他致病菌的侵入，提高腸道上皮的完整性和黏附性，從而改善了腸道上皮的整體結(jié)構(gòu)，起到了抗炎及促進(jìn)潰瘍面修復(fù)的作用[24]。

本研究中，經(jīng)過酪酸梭菌治療后，UC大鼠血清中的促炎因子PGE2、LTB4、PAF及VEGF不同程度地下降了，大鼠DAI評(píng)分及結(jié)腸組織病理改變也有所減輕，證實(shí)了酪酸梭菌可以有效的改善及治療UC大鼠的結(jié)腸病損。

蒙脫石散治療UC的作用機(jī)制：蒙脫石散的主要成分為[Si8Al4O20(OH)4]，是一種雙八面體的蒙脫石結(jié)構(gòu)。這種由雙四面體氧化硅與單八面體氧化鋁組成的多層結(jié)構(gòu)，具有非均勻性電荷分布，可以覆蓋整個(gè)腸腔表面，并能維持長(zhǎng)達(dá)近6 h。蒙脫石散在臨床上較常用于腹瀉及各種消化道炎癥的治療。在對(duì)兒童的急性及慢性腹瀉的治療中，其效果尤為顯著。蒙脫石散可以清除病原微生物、保護(hù)黏膜屏障，這些作用在以往的研究中也早已被證實(shí)[25]。蒙脫石散是一個(gè)單純物理收斂保護(hù)作用的制劑，不會(huì)被機(jī)體所吸收，所以此藥即使長(zhǎng)期服用，也幾乎沒有不良反應(yīng)，患者有較好的耐受性及依從性。

蒙脫石散治療潰瘍性結(jié)腸炎的機(jī)制或?yàn)橐韵聨c(diǎn)：①它均勻覆蓋在腸腔表面，形成一層很好的黏膜保護(hù)劑，促進(jìn)局部破潰的病灶愈合，并能形成防御屏障，抵抗病原微生物的侵入，很好的保護(hù)腸道上皮細(xì)胞[26]；②蒙脫石散的雙八面體結(jié)構(gòu)，有很強(qiáng)的吸附作用，可以很好的吸附病原微生物，如細(xì)菌，病毒及致炎因子等，并將它們固定鎖死，隨著腸道的蠕動(dòng)排出體外[27];③對(duì)腸細(xì)胞頂端和細(xì)胞間橋起保護(hù)作用，其機(jī)制可能為：通過增加黏液凝膠的黏彈性、內(nèi)聚力及存在時(shí)間，使黏液屏障作用增強(qiáng)；可緩解空腸彎曲桿菌引起的黏膜組織病變，從而達(dá)到細(xì)胞間橋修復(fù)的作用，促使細(xì)胞連接更加緊密，從而避免了病原微生物入血而達(dá)到繁殖抑制的作用。通過減緩腸細(xì)胞的轉(zhuǎn)變速度，增強(qiáng)腸細(xì)胞吸收功能；④蒙脫石散強(qiáng)有力的吸水性，可以吸附腸腔內(nèi)大量的水分，鎖死水分的流失，從而改善UC患者長(zhǎng)期的腹瀉癥狀，改善電解質(zhì)紊亂[28]。

在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，蒙脫石散可以通過下調(diào)UC大鼠促炎細(xì)胞因子PGE2、LTB4、PAF及VEGF，從而達(dá)到修復(fù)UC大鼠的結(jié)腸炎癥的目的。對(duì)于PGE2的下調(diào)作用較為顯著。而且蒙脫石散明顯降低了DAI評(píng)分、減輕了結(jié)腸病理改變，提示蒙脫石散對(duì)UC的治療效果較好。

總體上看，造模后的潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清中的PGE2、LTB4、PAF、VEGF的含量較正常大鼠升高，而美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散干預(yù)后，UC大鼠血清中的PGE2、LTB4、PAF、VEGF的含量與生理鹽水組相比，均有不同程度的下降。相應(yīng)地，三組大鼠的DAI評(píng)分及結(jié)腸組織病理改變較之生理鹽水組也有所減輕。提示美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脫石散可能通過下調(diào)促炎細(xì)胞因子PGE2、LTB4、PAF、VEGF來減輕UC大鼠結(jié)腸的炎癥反應(yīng)。這與大多數(shù)相關(guān)的研究相吻合。

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[收稿2015-12-02修回2016-01-28]

(編輯許四平)

Impacts of mesalazine,clostridium and montmorillonite powder on plasma PG-E2,LT-B4,PAF and VEGF in rats with ulcerative colitis

HE Shan，LIU Kai，HUANG Yong-Kun.Department of Pediatrics,the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College,Kunming 650000,China

Objective:To investigate the Prostaglandin E2(PG-E2),Leukotrienes B4(LT-B4)、Platelet activating factor(PAF) and vascular endothelial growth factor(VEGF) levels in the model of UC rats serum,and the changes after the Mesalazine,clostridium,and montmorillonite powder treatment intervention,in order to understand the significance of the four inflammatory factors in UC rats and the interference effect of the above three drugs on the four inflammatory cytokines.Methods: 100 rats were randomly divided into normal group(A),model group(B),Mesalazine group(C),clostridium group(D)and montmorillonite group(E),The levels of the plasma PG-E2,LT-B4,PAF and VEGF were measured by ELISA.The different changes of the four cytokines were compared in the different groups.Results: ①The scores of DAI and the levels of the plasma PGE2,LTB4,PAF and VEGF in the B,C,D and E group were higher than ones in A group(P<0.05).②Compared B group,the scores of DAI and the levels of plasma PGE2,LT-B4,PAF and VEGF in B,C,D and E group were lower(P<0.05).③Compared the efficacy among mesalazine,clostridium and montmorillonite powdergot treating UC,mesalazine and montmorillonite powder got the best results(P<0.05).The efficacy between mesalazine and montmorillonite was similar.Conclusion: ①The PGE2，LT-B4，PAF and VEGF are very active higher in the blood of rats with UC and have a positive correlation with inflammation.②Mesalazine,clostridium and montmorillonite powder may renovate the damage of inflammatory tissues of rats with UC,and relieve the symptoms of inflammation,and also shorten the duration of inflammation by reducing exudation of proinflammatory cytokines PGE2，LTB4，PAF and VEGF.

Mesalazine;Clostridium;Montmorillonite powder;Ulcerative colitis;Rats;Cytokines

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.08.029

R547文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

1000-484X(2016)08-1212-07

何山(1979年-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事兒科臨床的診療、教學(xué)及科研研究。

及指導(dǎo)教師：黃永坤(1961年-)，男，碩士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事小兒消化系統(tǒng)與營(yíng)養(yǎng)、感染與免疫疾病的診治和研究，E-mail：13577097854@163.com。