徐仙赟　謝瓊珺　彭　威③　寧慧婷③　溫俊程　王　濤　馬靚雯　郝彥斌　劉　潛

(江西省贛南醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，贛州341000)

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三種不同β受體阻滯劑治療小鼠血管瘤的實(shí)驗(yàn)研究①

徐仙赟②謝瓊珺②彭威②③寧慧婷②③溫俊程②王濤②馬靚雯②郝彥斌劉潛②

(江西省贛南醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，贛州341000)

①本文為江西省贛鄱英才“555工程”領(lǐng)軍人才項(xiàng)目(贛才字[2012]1號)；人力資源與社會保障部2011年度留學(xué)人員科技啟動項(xiàng)目(贛人社字[2011]474號)、江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2010GZY0016)、江西省青年自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No. 20142 BAB215026)、江西省教育廳教學(xué)改革項(xiàng)目(No. JXJG-14-13-11)、江西省衛(wèi)生與計(jì)劃生育委員會中醫(yī)藥科研項(xiàng)目(No. 2014A149)、贛南醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)研究計(jì)劃(No.YB201312)、2015年贛南醫(yī)學(xué)院本科生創(chuàng)新項(xiàng)目(ZR2014015、 ZR2014016和 ZR2014017)資助及江西省教育廳科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目(No.150963)。

②同時就職于江西省脈管性疾病臨床研究中心(培育)，贛州341000。

③江西省贛南醫(yī)學(xué)院研究生院，贛州341000。

目的：比較三種不同β受體阻滯劑對小鼠血管瘤(EOMA細(xì)胞)細(xì)胞體內(nèi)外的影響，初步探討普萘洛爾對小鼠血管瘤的治療作用及可能機(jī)制，為β受體阻滯劑治療嬰幼兒型血管瘤提供參考。方法：體外培養(yǎng)EOMA細(xì)胞，用不同濃度美托洛爾、普萘洛爾、布托沙明作用EOMA細(xì)胞，作用24 h。應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞存活率、吖啶橙染色檢測細(xì)胞凋亡情況，觀察美托洛爾、普萘洛爾、布托沙明對EOMA細(xì)胞體外增殖和凋亡的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)將EOMA細(xì)胞移植裸鼠，待腫瘤體積生長至100 mm3，將動物隨機(jī)分為4組，分別為對照組、美托洛爾組、布托沙明組和普萘洛爾組，藥物組按2 mg/(kg·d)灌胃給藥，對照組給予等體積的生理鹽水(NS)，每兩天測量腫瘤體積大小。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時收集血清，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)的表達(dá)水平。結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)顯示，普萘洛爾作用24 h后，EOMA細(xì)胞存活率隨劑量增加逐漸下降， 50 μmol/L時有顯著差異(P<0.05)，藥物增加至800 μmol/L，細(xì)胞存活率接近10%。吖啶橙染色顯示50 μmol/L時凋亡細(xì)胞顯著增多。美托洛爾、布托沙明作用24 h后， 100 μmol/L時細(xì)胞存活率與對照組相比有顯著差異(P<0.05)， 800 μmol/L時細(xì)胞存活率下降至20%，明顯高于相同濃度的普萘洛爾組，存在顯著性差異(P<0.05)。吖啶橙染色亦出現(xiàn)相似的規(guī)律。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時美托洛爾、布托沙明小鼠和普萘洛爾藥物組的腫瘤體積分別為(1 642.8±89.3)、(1 529.3±119.1)和(752.7±46.5) mm3，與對照組小鼠的腫瘤體積(2 023.3±123.07) mm3相比明顯減少(P<0.001)。美托洛爾、布托沙明小鼠和普萘洛爾藥物組血清中VEGF分別水平為(606.5±105.8)pg/ml、(534.3±243.2)pg/ml和(420.1±123.7) pg/ml，明顯低于PBS對照組的[(825.8±145.7) pg/ml,(P<0.05)],TNF-α結(jié)果依次是(301.3±62.3) pg/ml、(305.1±53.8) pg/ml和(288.8±59.5) pg/ml,明顯低于正常對照組[(444±100.4) pg/ml,(P<0.05)]。結(jié)論：三種β受體阻滯劑均可在體外有效抑制小鼠血管瘤EOMA細(xì)胞的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡普萘洛爾的這一作用較布托沙明和美托洛爾明顯。三種β受體阻滯劑不同程度的抑制小鼠血管瘤的生長，其中普萘洛爾的抑制作用明顯強(qiáng)于美托洛爾和布托沙明。三種β受體阻滯劑均可降低體內(nèi)VEGF和TNF-α的水平。提示普萘洛爾對小鼠血管瘤的作用可能與β1和β2受體協(xié)同作用有關(guān)，其治療血管瘤的機(jī)制可能與VEGF和TNF-α有關(guān)。

小鼠血管瘤；β受體阻滯劑；普萘洛爾；凋亡；TNF-α

2008年，Léauté-Labrèze等[1]醫(yī)生應(yīng)用普萘洛爾(Propranolol)成功治療嬰幼兒型血管瘤。因其治療效果顯著，較類固醇副作用少，逐漸成為治療嬰幼兒型血管瘤的新選擇[2,3]。普萘洛爾是常用非選擇性β腎上腺素受體阻滯劑，可用于治療嬰幼兒型血管瘤，其他類型的β腎上腺素受體阻滯劑能否應(yīng)用于嬰幼兒型血管瘤的治療呢？張艷等[4]使用β1腎上腺素受體阻滯劑美托洛爾、非選擇性β腎上腺素受體阻滯劑普萘洛爾和選擇性β2腎上腺素受體阻滯劑丁氧胺作用于人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，研究發(fā)現(xiàn)β腎上腺素受體阻滯劑可抑制HUVEC細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時可下調(diào)VEGF和MMP-9的水平。有研究顯示，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是由角質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，介導(dǎo)皮膚免疫和炎癥的一類細(xì)胞因子。當(dāng)皮膚受到外界因素的影響，分泌大量TNF-α,引起皮膚血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,從而導(dǎo)致血管瘤的發(fā)生。這些研究提示：普萘洛爾等β腎上腺素受體阻滯劑可能也是通過以上的作用方式達(dá)到治療血管瘤的目的。

因此，為探討不同類型β腎上腺素受體阻滯劑美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明對嬰幼兒型血管瘤的作用及可能的機(jī)制，本研究以小鼠血管瘤(Murine Hemangioendothelioma Model,EOMA)細(xì)胞為模型，體外實(shí)驗(yàn)初步比較對三種不同類型β腎上腺素受體阻滯劑對EOMA細(xì)胞體外增殖及凋亡調(diào)控作用的影響；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)比較三種不同類型β腎上腺素受體阻滯劑對血管瘤生長的影響以及體內(nèi)VEGF和TNF-α的影響，以期探討β腎上腺素受體阻滯劑對VEGF和TNF-α的調(diào)節(jié)作用。

1　材料與方法

1.1材料小鼠血管瘤EOMA細(xì)胞(重慶醫(yī)科大學(xué)金先慶教授惠贈)。DMSO、MTT、美托洛爾(Metoprolol)、普萘洛爾(Propranolol)和布托沙明(Butoxamine)購自Sigma公司。吖啶橙(AO)購自美國Amerseo公司。胎牛血清、胰蛋白酶等購于Gibco公司，青霉素、鏈霉素和高糖DMEM培養(yǎng)基等購于北京雷根生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)方法小鼠血管瘤(EOMA細(xì)胞)細(xì)胞由金先慶教授惠贈。用含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/L鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基，在5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2MTT比色法檢測細(xì)胞增殖/存活率取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將1.0×105個/ml EOMA細(xì)胞接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h后加入不同濃度美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明PBS溶液：125、250、500、1 000、2 000、4 000和8 000 μmol/L，終濃度分別為12.5、25、50、100、200、400和800 μmol/L，作用時間為24 h。單純PBS處理作為溶劑對照組。處理結(jié)束后，每孔加入20 μl、5 mg/ml MTT溶液，5%CO2、37℃恒溫培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育4 h，棄上清液，每孔加入150 μl DMSO，酶標(biāo)儀(Thermo)測定A570 nm和A630 nm值。

1.2.3吖啶橙(AO)染色熒光顯微觀察細(xì)胞凋亡于6孔板中放入蓋玻片接種EOMA細(xì)胞， 100 μmol/L美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明作用24 h。棄上清液，加入10 μg/ml的AO染液1 ml，室溫避光染色30 s，棄染液，PBS洗滌3次。熒光顯微鏡下觀察，常規(guī)方法計(jì)數(shù)，得出凋亡率。

1.2.4動物實(shí)驗(yàn)BALB/c雌性裸鼠，4周齡(20±2)g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司，[許可證號：SCXK(湘)2009-004]。于小鼠背部皮下注射EOMA細(xì)胞1.5×106個/只，每兩日測量腫瘤長徑(a)和短徑(b)，計(jì)算腫瘤體積V=1/2×a×b2。當(dāng)腫瘤體積增長至100 mm3左右時，將小鼠隨機(jī)分為4組，分別為：生理鹽水組(NS組)、美托洛爾組、布托沙明組和普萘洛爾組。每組6只。不同藥物組小鼠灌胃給予2 mg/(kg·d)藥量，對照組給予等量的生理鹽水。灌胃至第30天，處死小鼠，留取血清。

1.2.5血清中VEGF和TNF-α表達(dá)水平的檢測取各組小鼠血液經(jīng)離心分離血清，按照ELISA試劑盒說明書，分別進(jìn)行VEGF和TNF-α的檢測。

2　結(jié)果

2.1三種不同β受體阻滯劑對EOMA細(xì)胞增殖的影響MTT實(shí)驗(yàn)觀察美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明對EOMA細(xì)胞存活率的影響。美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明作用后， EOMA細(xì)胞存活率隨劑量增加逐漸下降，當(dāng)美托洛爾和布托沙明藥物濃度為100 μmol/L時，與對照組相比存在顯著性差異(P<0.05)，濃度增加至800 μmol/L時，EOMA細(xì)胞存活率接近50%；普萘洛爾藥物濃度為50 μmol/L時存在顯著性差異(P<0.05)，繼續(xù)增加至800 μmol/L時，細(xì)胞存活率接近10%。美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明的IC50值分別為382.5、320.8、155.52 μmol/L。見圖1。

2.2熒光染色(AO染色法)觀察細(xì)胞凋亡情況取出100 μmol/L美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明處理24 h后的細(xì)胞爬片，按照AO染色法進(jìn)行熒光染色，熒光顯微鏡下觀察三種不同類型阻滯劑對EOMA細(xì)胞凋亡的影響。熒光顯微鏡下觀察可見，美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明作用24 h后，EOMA細(xì)胞數(shù)量明顯減少，且可見細(xì)胞體積縮小、固縮，濃縮致密的暗綠色或黃綠色熒光，呈團(tuán)狀或串珠狀的凋亡細(xì)胞，對照組為均勻一致的綠色熒光。表示正常細(xì)胞，AO染色均一，為綠色熒光。表示凋亡細(xì)胞。細(xì)胞體積縮小、核固縮明顯，染色昏暗，見圖2。普萘洛爾作用24 h后，細(xì)胞數(shù)量較美托洛爾和布托沙明組減少，且凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯以上兩組。

2.3三種β腎上腺素受體阻滯劑抑制腫瘤體積的生長給藥前，PBS對照組、美托洛爾組、布托沙明組和普萘洛爾組的平均腫瘤體積分別為(100.8±9.6)mm3、(101.8±7.38)mm3、(100.7±7.5)mm3和(100±6.3)mm3。從給藥第4天開始，四組之間的差異開始具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)給藥29 d即實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時美托洛爾、布托沙明小鼠和普萘洛爾藥物組的腫瘤體積分別為(1 642.8±89.3)、(1 529.3±119.1)和(752.7±46.5)mm3，與對照組小鼠的腫瘤體積為(2 023.3±123.07)mm3相比(P<0.01)，經(jīng)雙因素的重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析，不同分組間比較的F值204.144和P值<0.001，腫瘤體積普萘洛爾組<布托沙明組=美托洛爾組< NS組，即β腎上腺素受體阻滯劑均能明顯抑制腫瘤的生長，且普萘洛爾對腫瘤生長的抑制作用最強(qiáng)，其次是布托沙明和美托洛爾，這兩者之間沒有差別。見圖4。

圖1　不同濃度美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明對EOMA細(xì)胞存活率的影響Fig.1　Effects of metoprolol,propranolol and butoxamine on cell viability in EOMA cellsNote: *.P<0.05，compared with PBS.

圖2　AO染色觀察美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明對EOMA細(xì)胞凋亡的影響(10×20)Fig.2　Effects of metoprolol,propranolol and butoxamine on induction of apoptosis in EOMA cells stained by AO(10×20)Note: A.Ctr(PBS);B.Metoprolol ;C.Butoxa mine;D.Propranolol.

圖3　AO染色觀察美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明對EOMA細(xì)胞凋亡的影響(10×20)Fig.3　Effects of metoprolol,propranolol and butoxamine on induction of apoptosis in EOMA cells stained by AO(10×20)Note: *.P<0.05，compared with PBS；#.P<0.05，compared with Metoprolol,Butaxamine.

圖4　三種β腎上腺素受體阻滯劑抑制腫瘤體積的生長Fig.4　Tumor volume in each group

2.4三種β腎上腺素受體阻滯劑降低小鼠血清中VEGF和TNF-α的水平ELISA法檢測血清中VEGF的水平結(jié)果顯示，美托洛爾、布托沙明小鼠和普萘洛爾藥物組血清中VEGF分別水平為(606.5±105.8)pg/ml、(534.3±243.2) pg/ml和(420.1±123.7) pg/ml， PBS對照組的(825.8±145.7) pg/ml,經(jīng)單因素方差分析，其F值=6.558和P值=0.003， (P<0.05)，經(jīng)SNK法兩兩比較，得美托洛爾、布托沙明和普萘洛爾與NS組比較存在差異，三種β腎上腺素受體阻滯劑組血清中VEGF水平明顯低于NS組，其他組兩兩比較無差異。見圖5。

圖5　不同藥物組小鼠血清中VEGF表達(dá)水平的變化Fig.5　Content of VEGF of serum in each groupNote: *.P<0.05，compared with NS.

圖6　不同藥物組小鼠血清中TNF-α表達(dá)水平的變化Fig.6　Content of TNF-α of serum in each groupNote: *.P<0.05，compared with NS.

TNF-α結(jié)果依次是(301.3±62.3) pg/ml、(305.1±53.8) pg/ml和(288.8±59.5) pg/ml,正常對照組(444±100.4) pg/ml 。經(jīng)單因素方差分析，其F值=6.281和P值=0.004，(P<0.05)，經(jīng)SNK法兩兩比較，得美托洛爾、布托沙明和普萘洛爾與NS組比較存在差異，三種β腎上腺素受體阻滯劑組血清中TNF-α明顯低于NS組，其他組兩兩比較無差異。P<0.05，存在明顯差異,見圖6。

3　討論

腎上腺素受體主要分布于交感神經(jīng)節(jié)后纖維所支配的效應(yīng)器細(xì)胞膜上，分為3種類型， 即β1受體、β2受體和β3受體。均可被β受體阻滯劑所阻斷和拮抗。β受體阻滯劑分為三類:第一類為非選擇性的，作用于β1和β2受體,常用藥物為普萘洛爾(心得安);第二類為選擇性的,主要作用于β1受體,常用藥物為美托洛爾(倍他樂克)等；第三類也為非選擇性的,可同時作用于β和α1受體,常用藥物為阿羅洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾。β受體阻滯劑還可以劃分為脂溶性或水溶性,以及具有內(nèi)在擬交感活性或不具有內(nèi)在擬交感活性等類型[5,6]。

近期，法國Léauté-Labrèze等[1]報(bào)道了普萘洛爾治療嬰幼兒型血管瘤的新作用后，其藥理作用機(jī)制再次引起同行們關(guān)注。廣義的“血管瘤”指一大類疾病，是兒童時期最常見的“腫瘤”，主要包括血管瘤(真性)及血管畸形兩大類[7]，目前普萘洛爾治療報(bào)道多集中于血管瘤(真性)[8]，其與血管畸形的區(qū)別主要在于血管內(nèi)皮細(xì)胞等的增殖狀態(tài)，前者常有異常增殖，而后者增殖狀態(tài)往往正常。這一區(qū)別提示，普萘洛爾治療血管瘤可能與抑制細(xì)胞的增殖有關(guān)。

EOMA瘤是一種129P3/J小鼠來源的血管瘤[9]，主要由異常增殖的血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成瘤體，伴不同程度的管腔化，是目前常用的血管瘤實(shí)驗(yàn)動物及細(xì)胞培養(yǎng)模型。

體外實(shí)驗(yàn)顯示，作為選擇性β1腎上腺素受體阻滯劑的美托洛爾、選擇性β2腎上腺素受體阻滯劑的布托沙明以及非選擇性β腎上腺素受體阻滯劑的普萘洛爾處理組細(xì)胞增殖狀況明顯均低于對照組，同時細(xì)胞凋亡明顯增加，提示以上β腎上腺素受體阻滯劑具有抑制EOMA細(xì)胞體外增殖，誘導(dǎo)其凋亡的作用。

以上結(jié)果提示：β受體腎上腺素阻滯劑抑制EOMA細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)其凋亡的作用可能是通過β1和β2受體阻滯劑協(xié)同作用完成的。吉毅等[10]研究發(fā)現(xiàn)，β腎上腺素受體阻滯劑抑制嬰幼兒血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，其作用可能與β腎上腺素受體信號通路有關(guān)[11]。這些研究與本課題組的研究結(jié)果相似，但是，是否其他非選擇β受體阻滯劑也具有相同的藥理作用，是否比單一的β1、β2受體阻滯劑具有更強(qiáng)的抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用有待于進(jìn)一步的研究。

體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三種不同β腎上腺素受體阻滯劑美托洛爾、普萘洛爾和布托沙明均能有效的抑制血管瘤的增長。

β腎上腺素受體阻滯劑可以明顯影響免疫炎癥因子的釋放和調(diào)節(jié)[12,13]。有研究顯示，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是由角質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，介導(dǎo)皮膚免疫和炎癥的一類細(xì)胞因子。當(dāng)皮膚受到外界因素的影響，分泌大量TNF-α,引起皮膚血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,從而導(dǎo)致血管瘤的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)：三種不同β腎上腺素受體阻滯劑可抑制血管瘤的快速生長，此時，TNF-α表達(dá)明顯低于血管瘤模型組，與王勝等[14]在血管瘤的快速增生期TNF-α的表達(dá)明顯高于血管瘤消退期結(jié)果相一致。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)β腎上腺素受體阻滯劑可降低VEGF的水平，從而達(dá)到抑制血管瘤的生長，這些都與國內(nèi)研究相似。

本研究結(jié)果顯示，三種β腎上腺素受體阻滯劑均可明顯降低血清中VEGF和TNF-α的表達(dá)。以上結(jié)果提示：三種β腎上腺素受體阻滯劑可能通過調(diào)節(jié)VEGF和TNF-α水平，從而抑制血管瘤的生長。

綜上所述，普萘洛爾對體外EOMA細(xì)胞具有抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的調(diào)控作用，可能是通過β1和β2受體協(xié)同作用完成的。其可能通過降低VEGF和TNF-α水平，從而抑制血管瘤的生長。

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[收稿2015-10-28修回2016-01-07]

(編輯許四平)

Experimental study of three different β-receptor blockers in treatment on murine hemangioendothelioma

XU Xian-Yun,XIE Qiong-Jun,PENG Wei,NING Hui-Ting,WEN Jun-Cheng,WANG Tao，MA Liang-Wen,HAO Yan-Bin,LIU Qian.Gannan Medical University Bascial Medical College,Ganzhou 341000,China

Objective:To comparison of three different beta blockers on murine hemangioma(EOMA cells) cells in vitro and in vivo effects.Preliminary study on the therapeutic effect of propranolol on vascular tumor in mice and possible mechanisms,provide a reference for beta blockers in the treatment of infantile hemangioma.Methods: Comparative study on the effects of three kinds of different β-receptor blockers---metoprolol,propranolol and butoxamine,on the proliferation and apoptosis of Mouse Hemangioendothelioma Endothelial cell(EOMA cells) was conducted in vitro.EOMA cells were cultured in vitro,randomly divided into different groups,propranolol and timolol were added into the medium respectively,after 24 h intervention.MTT assay and acridine orange staining assay were conducted respectively to detect cell viability and apoptosis level.EOMA cells were transplanted into nude mice in vivo.Tumor volume growth to 100 mm3,animals were randomly divided into 4 groups respectively,the control group,metoprolol group,Bhutto Samin group and propranolol group,drug group according to 2 mg/(kg·d) oral gavage,control group were given an equal volume of saline(NS),every two days measurement tumor volume size.Serum levels of tumor necrosis factor alpha(TNF-α)and vascular endothelial growth factor(VEGF)were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)in the end of the experiment.Results: For propranolol,after 24 h treatment,significant differences of cell viability and apoptosis were noted(P<0.05) at the concentration of 50 μmol/L,while continuing to increase to 800 μmol/L,the cell survival rate decreased sharply to close to 10%.Acridine orange staining at the 50 μmol/L group after 24 h revealed many apoptotic cells.For metoprolol and butoxa mine,significant differences of cell viability and apoptosis were noted(P<0.05) at the concentration of 100 μmol/L,while continuing to increase to 800 μmol/L,the cell survival rate decreased sharply to close to 20%.It was significantly higher than propranolol group at the same concentration(P<0.05).It showed a similar trend in acridine orange staining.In vivo experiments showed that the end of the experiment of metoprolol,butoxamine group and propranolol drugs in mice tumor volume,respectively(1 642.8±89.3),(1 529.3±119.1) and (752.7±46.5)mm3,significantly lower than the control group of mice tumor volume of (2 023.3±123.0) mm3(P< 0.001).Metoprolol,butoxamine mice and propranolol drugs group,serum VEGF levels for (606.5±105.8) pg/ml,(534.3±243.2) pg/ml and (420.1±123.7) pg/ml， significantly lower than the PBS control group[(825.8±145.7) pg/ml,(P< 0.05)],the TNF alpha result was followed by(301.3±62.3) pg/ml，(305.1±53.8) pg/ml and (288.8±59.5) pg/ml,significantly lower than the normal control group [(444±100.4) pg/ml,P< 0.05].Conclusion: Three kinds of beta-blockers can effectively inhibit EOMA cells proliferation and induce apoptosis in vitro,the role of propranolol more significantly than butoxamine and metoprolol.Three kinds of beta blockers restrain the growth of the hemangioma in vivo,in which the inhibitory effect of propranolol is stronger than the metoprolol and butoxa mine.Three kinds of beta blockers can lower the levels of VEGF and TNF-α in vivo.Indicating that propranolol on vascular tumor in mice may be one of the mechanisms of β1 and β2 receptor synergy effect and its mechanism in the treatment of hemangioma may be associated with VEGF and TNF-α.

Murine hemangioendothelioma;β receptor blocker;Propranolol;Apoptosis;TNF-α

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.08.007

R392.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

1000-484X(2016)08-1118-05

徐仙赟(1982年-)，男，碩士，實(shí)驗(yàn)師，主要從事腫瘤與免疫方面的研究，E-mail:xuxianyun_1982@163.com。通訊作者及指導(dǎo)教師：劉潛(1971年-)，男，博士，教授，主任醫(yī)師，主要從事嬰幼兒型血管瘤等脈管性疾病的研究，E-mail:18907979876@126.com。