謝茂云，黃耀，彭家桃，王新根，余利娃

（廣東醫(yī)學院附屬福田醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

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程序性細胞死亡因子4在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及意義*

謝茂云，黃耀，彭家桃，王新根，余利娃

（廣東醫(yī)學院附屬福田醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

目的研究程序性細胞死亡因子4（PDCD4）蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及臨床意義。方法應用免疫組織化學SP法檢測PDCD4蛋白在62例甲狀腺乳頭狀癌、20例癌旁正常組織及28例甲狀腺良性腫瘤中的陽性表達，并結合臨床資料進行統(tǒng)計學分析。結果甲狀腺乳頭狀癌組織中PDCD4蛋白的陽性表達率明顯低于癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤（P＜0.05）。隨著PDCD4表達水平的降低，甲狀腺乳頭狀癌惡性程度可能也隨之增加（P＜0.05）。PDCD4蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結論PDCD4蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中低表達，與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系。

甲狀腺乳頭狀癌；程序性細胞死亡因子4；免疫組織化學

程序性細胞死亡因子4（programmed cell death 4，PDCD4）是新近發(fā)現(xiàn)的與細胞凋亡相關的基因，已被證實為是一種腫瘤抑制基因。已有不少研究表明，PDCD4在腎癌、前列腺癌、肝細胞癌、胃癌、口腔唾液腺癌、卵巢癌等人類惡性腫瘤中表達低下或缺失［1-5］，但有關PDCD4在甲狀腺癌組織中的表達研究在國內尚未見報道。甲狀腺癌多起病隱匿，常以無痛性甲狀腺結節(jié)為最初臨床表現(xiàn)，具體機制不是十分明確，本研究利用免疫組織化學法，探討PDCD4在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展中的可能機制以及與腫瘤臨床病理分期、淋巴結轉移的關系，檢測PDCD4在甲狀腺乳頭狀癌的表達并探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2012年5月-2015年7月于廣東醫(yī)學院附屬福田醫(yī)院甲乳外科收治的住院患者。經病理診斷明確為甲狀腺乳頭狀癌62例，作為甲狀腺乳頭狀癌組（有淋巴結轉移者21例，無淋巴結轉移者41例），20例癌旁正常組織及28例甲狀腺良性腫瘤作為對照組。所有患者術前都未作放療、化療及其他針對腫瘤的治療。

1.2主要試劑及儀器

鼠抗人PDCD4抗體（美國Ray Biotech公司），SP免疫組織化學試劑盒及DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術開發(fā)有限公司）。

1.3免疫組織化學法檢測PDCD4的陽性表達

免疫組織化學主要步驟參照免疫組織化學SP檢測試劑盒說明書進行操作，主要操作步驟為：標本用10%甲醛固定，脫水，石蠟包埋，5μm石蠟連續(xù)切片，切片厚度2μm，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，抗原修復，血清封閉，一抗稀釋至1∶200，滴加一抗，體積分數(shù)1%過氧化氫H2O2封閉內源性過氧化物酶，滴加二抗及鏈霉親和素-過氧化物酶復合物，DAB顯色，蘇木精復染。

1.4PDCD4陽性表達判定標準

PDCD4主要在核周、細胞漿陽性表達，以棕黃色或黃褐色顆粒為陽性細胞，在高倍視野下（×100），選取5個不重復陽性視野進行計數(shù)，根據染色強度和陽性細胞所占百分比進行評分判定。①按染色強弱：陰性為0分，染色弱但明顯強于陰性對照者為1分，染色較強者為2分；染色強者為3分。②陽性細胞比例：陽性細胞比例≤10%為1分，11%～30%為2分，31%～60%為3分，＞60%為4分；上述兩種分值相加≥3分為陽性。

1.5統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據分析，PDCD4各組間陽性表達率用χ2檢驗（必要時采用校正χ2檢驗或Fisher精確檢驗），P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1PDCD4蛋白在不同組織中的表達率

在癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤中PDCD4陽性顆粒以核周、細胞漿表達為主，呈棕黃色或黃褐色顆粒（見圖1，A為癌旁正常組織，B為甲狀腺腺瘤），在甲狀腺乳頭狀癌組織中PDCD4陽性顆粒表達以細胞漿為主（見圖2，A為PDCD4陽性表達，B為陰性表達）。PDCD4在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達率為27.4%（17/62），在癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤中的陽性表達率分別為 100.0%（20/20）、89.3%（25/28），組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2PDCD4蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌惡性程度及淋巴結轉移的關系

PDCD4的陽性表達率隨甲狀腺乳頭狀癌臨床病理分期的增高而降低，Ⅰ、Ⅱ期的癌組織PDCD4陽性表達率高于Ⅲ、Ⅳ期的癌組織，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。淋巴結轉移組的PDCD4陽性表達率低于無淋巴結轉移組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

3組間比較差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。其中甲狀腺乳頭狀癌與癌旁正常組織比較，χ2=32.171，P= 0.000；甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性腫瘤相比較，χ2=29.663，P=0.000。

圖1　癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤中PDCD4蛋白表達（SP×100）

圖2　甲狀腺乳頭狀癌組織中PDCD4蛋白表達（SP×100）

表1　PDCD4蛋白在不同組織中的表達率

表2　PDCD4蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌惡性程度及淋巴結轉移的關系

3　討論

甲狀腺癌是最常見的內分泌腫瘤，近年來發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，而甲狀腺癌中以甲狀腺乳頭狀癌為最多見。早期容易出現(xiàn)區(qū)域淋巴結轉移，晚期可發(fā)生遠處轉移，其分化程度越差，惡性程度越高。雖然甲狀腺癌的治療取得了長足的進展，尤其是在外科治療方面的發(fā)展取得較好的效果。但仍有少部分患者出現(xiàn)術后癌灶復發(fā)和轉移情況，臨床上對甲狀腺癌的發(fā)病機制尚不十分明確，關于甲狀腺癌的發(fā)病原因至今仍未完全探明，目前認為其為環(huán)境因素和個體遺傳因素共同作用的結果。

PDCD4是一種新的腫瘤抑制因子，PDCD4的蛋白序列編碼469個氨基酸，在蛋白序列的164-275區(qū)和329-440區(qū)兩個區(qū)域各含有一個保守的a螺旋結構區(qū)-MA3。MA3同樣也存在于真核翻譯起始因子eIF4GⅠ和eIF4GⅡ中，因此PDCD4可以通過MA3的結構域競爭性的結合到eIF4A上。eIF4A是一種依賴ATP的RNA解旋酶，其能夠展開mRNA，使核糖體移行到3’位，定位到起動密碼子AUG上，從而啟動基因的翻譯。PDCD4通過阻止eIF4A和eIF4G的結合來抑制解螺旋酶活性，從而抑制翻譯的進行［6-7］。也有研究發(fā)現(xiàn)PDCD4本身可以抑制自噬的發(fā)生，通過對LPS誘導自噬的幾個通路進行分析，進一步探索發(fā)現(xiàn)LPS可以誘導磷酸化P38 MAPK的表達，并且在PDCD4-/-小鼠的巨噬細胞中，這種誘導作用更加明顯，磷酸化P38 MAPK的表達明顯高于c57小鼠，因此P38 MAPK通路可能是PDCD4調控自噬發(fā)生的主要通路。

本研究結果表明，PDCD4蛋白在癌旁正常組織全部陽性表達，在甲狀腺良性腫瘤絕大多數(shù)呈陽性表達，而在甲狀腺乳頭狀癌中的表達明顯降低甚至缺失，并隨著癌組織臨床病理分期越差，PDCD4表達程度越低。這提示PDCD4可能與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展與惡性程度密切相關?？赡苁且驗镻DCD4的表達下調，失去對真核翻譯起始因子的抑制從而發(fā)揮類似癌基因的作用，同時低表達的PDCD4喪失其抑制癌細胞生長及抑制自噬發(fā)生的作用。有研究表明PDCD4可以作為結直腸癌新輔助化療療效及判斷預后的客觀指標［8］。對于腎癌、卵巢癌、乳腺癌患者，PDCD4缺失提示組織學分級較低，并且容易發(fā)生遠處和淋巴結轉移，可作為評估預后的一個指標［1，4，9］。結合本研究結果，PDCD4也可能成為甲狀腺乳頭狀癌惡性程度、淋巴結轉移及預后判斷的一個因子。隨著研究不斷深入，PDCD4靶基因治療或許也會成為甲狀腺乳頭狀癌患者一個新的治療途徑。

［1］LI X，XIN S，YANG D，et al.Down regulation of PDCD4 expression is an independent predictor of poor prognosis in human renal cell carcinoma patients［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（3）:529.

［2］CAO Z，YOON J H，NAM S W，et al.PDCD4 expression inversely correlated with miR-21 levels in gastric cancers［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（4）:611.

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［5］QIU X，DONG S，QIAO F，et al.HBx-mediated miR-21 upregulation represses tumor-suppressor function of PDCD4 in hepatocellular carcinoma［J］.Oncogene，2013，32:3296-3305.

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［7］WATERS L C，STRONG S L，F(xiàn)ERLEMANN E，et al.Structure of the tandem MA-3 region of Pdcd4 protein and characterization of its interactions with eIF4A and eIF4G:molecular mechanisms of a tumor suppressor［J］.J Biol Chem，2011，286（19）:270-280.

［8］XUE D，REN B W，XIANG J M，et al.PDCD4 as a predictor of sensitivity to neoad-juvant chemoradiotherapy in locally advanced rectal cancer patients［J］.Asian Pacific Journal of Cancer Prevention，2014，15（2）:825-830.

［9］唐煒，葉熹罡，高進，等.miR21及PDCD4在乳腺癌的表達及預后的關系［J］.廣州醫(yī)學院學報，2013，41（2）:33-37.

（張蕾編輯）

Expression and significance of PDCD4 in thyroid papillary cancer（TPC）*

Mao-yun Xie，Yao Huang，Jia-tao Peng，Xin-gen Wang，Li-wa Yu
（Affiliated Futian Hospital of Guangdong Medical College，Shenzhen Guangdong 518033，China）

Objective To investigate the expression and significance of PDCD4 in thyroid papillary cancer（TPC）. MethodsPDCD4 immunohistochemical expression was investigated in 62 cases of TPC，20 cases of paracarcinomatous normal tissue and 28 cases of benign thyroid tumor.Their relationship with clinical data was analyzed.Result The positive rate of PDCD4 protein was significantly lower in TPC than that in paracarcinomatous normal tissue and benign thyroid tumor（P＜0.05）.And with the decreasing of PDCD4 protein expression level，the malignant degree of TPC increased，which had statistically significant difference among groups（P＜0.05）.But the expression of PDCD4 protein had no relationship to lymph node metastasis（P＞0.05）.Conclusions The down-regulated expression of PDCD4 protein is correlated with the pathogenesis and development in TPC.

thyroid papillary cancer；PDCD4；immunohistochemistry

R736.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.16.010

1005-8982（2016）16-0049-03

2016-01-28

深圳福田區(qū)公益性科研項目（No：FTWS2014010）