李 芳，姚建華，段哲萍，閆永龍，鄭桂敏，曹京旌，張風肖

?

·論著·

·中醫(yī)·中西醫(yī)結(jié)合研究·

不同證型膝骨關(guān)節(jié)炎患者紅細胞免疫功能變化及痹祺膠囊的干預效果研究

李 芳，姚建華，段哲萍，閆永龍，鄭桂敏，曹京旌，張風肖

目的探討膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)不同中醫(yī)辨證分型患者紅細胞免疫功能差異,并觀察痹祺膠囊對不同證型KOA患者紅細胞免疫功能的影響。方法選取2013年3—6月于河北省人民醫(yī)院風濕免疫科就診的KOA患者60例，參照《中藥新藥臨床研究指導原則》將KOA患者分為Ⅰ型組(肝腎不足、筋脈瘀滯型)27例、Ⅱ型組(脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型)11例及Ⅲ型組(肝腎虧虛、痰瘀交阻型)22例。另選取同期于本院體檢健康者30例為對照組。KOA患者口服痹祺膠囊4片/次，3次/d，持續(xù)12周。對照組于體檢時，KOA患者分別于治療前及治療后取靜脈血2 ml,檢測紅細胞C3b受體花環(huán)(RBC-C3bRR)和紅細胞免疫復合物花環(huán)(RBC-ICR)。結(jié)果各組RBC-C3bRR、RBC-ICR比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中，Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于對照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅱ型組(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于對照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-ICR低于Ⅱ型組(P<0.05)。Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-C3bRR高于治療前(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-ICR低于治療前(P<0.05)。結(jié)論不同中醫(yī)證型KOA患者RBC-C3bRR、RBC-ICR存在差異,可作為中醫(yī)臨床辨證分型的參考指標。痹棋膠囊在一定程度上可提高KOA患者紅細胞免疫功能。

骨關(guān)節(jié)炎，膝；紅細胞；免疫調(diào)節(jié)；痹祺膠囊

李芳，姚建華，段哲萍，等.不同證型膝骨關(guān)節(jié)炎患者紅細胞免疫功能變化及痹祺膠囊的干預效果研究[J].中國全科醫(yī)學，2016，19(24)：2939-2942.[www.chinagp.net]

LI F，YAO J H,DUAN Z P，et al.Changes of red-cell immune function and Biqi capsule intervention in patients with knee osteoarthritis of different TCM syndromes[J].Chinese General Practice，2016，19(24)：2939-2942.

膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)是一種多發(fā)于中老年的慢性膝關(guān)節(jié)疾病，以關(guān)節(jié)軟骨進行性退變、滑膜炎、關(guān)節(jié)邊緣骨贅形成為主要病理特征，最終致關(guān)節(jié)疼痛、畸形和功能障礙[1-2]。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學認為，KOA屬于“骨痹”范疇，為本虛標實之證，以肝腎不足、正氣虧虛為發(fā)病基礎，慢性勞損與外邪侵襲為發(fā)病誘因，其傳統(tǒng)辨證分型的客觀化一直是臨床研究重點[3-4]。有研究證實，紅細胞免疫功能在人體免疫復合物清除過程中發(fā)揮主導作用，其能力的強弱與中醫(yī)“正氣”的盛衰密切相關(guān)[5]。本研究通過檢測60例KOA患者的紅細胞免疫功能，并對其中醫(yī)各證型間進行比較研究，旨在研究二者之間的關(guān)系,為KOA的中醫(yī)辨證分型提供客觀依據(jù)；同時采用以益氣養(yǎng)血、祛風除濕、活血通絡為治則的傳統(tǒng)抗風濕藥物痹祺膠囊治療KOA，觀察對紅細胞免疫功能的影響，為KOA的臨床治療提供參考。

1　對象與方法

1.1研究對象選取2013年3—6月于河北省人民醫(yī)院風濕免疫科就診的KOA患者60例，其中男13例，女47例；年齡42～69歲；病程0.5～10.0年。患者均符合美國風濕病協(xié)會關(guān)節(jié)炎診斷標準[6]。排除其他感染性關(guān)節(jié)炎、心肝腎疾病、結(jié)締組織病、內(nèi)分泌疾病、嚴重胃腸道疾病及腫瘤；1個月內(nèi)服用過其他中成藥或湯藥、西藥(非甾體抗炎藥物、皮質(zhì)激素類藥物)或免疫調(diào)節(jié)劑、免疫增強劑及免疫抑制劑或進行過理療。另選取同期于本院體檢健康者30例為對照組，其中男6例，女24例；年齡40～68歲。受試者對本研究知情同意，本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1中醫(yī)辨證分型參照《中藥新藥臨床研究指導原則》[7]對KOA患者進行分型：(1)Ⅰ型組(肝腎不足、筋脈瘀滯型)27例：主癥為關(guān)節(jié)疼痛，脛軟膝酸；次癥為活動不利，運作牽強，舌質(zhì)偏紅，苔薄或薄白，脈滑或弦。(2)Ⅱ型組(脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型)11例：主癥為關(guān)節(jié)疼痛，腫脹積液；次癥為活動受限，舌質(zhì)偏紅，或舌胖質(zhì)淡，苔薄或薄膩，脈滑或弦。(3)Ⅲ型組(肝腎虧虛、痰瘀交阻型)22例：主癥為關(guān)節(jié)疼痛，腫脹肥厚感，痿弱少力；次癥為骨節(jié)肥大，活動受限，舌質(zhì)偏紅，或舌胖質(zhì)淡，苔薄或薄膩，脈滑或弦細。

1.2.2治療方法KOA患者口服痹祺膠囊(天津達仁堂京萬紅藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號301721，成分：馬錢子、茯苓、白術(shù)、黨參、丹參、地龍、牛膝、川芎、三七、甘草)4片/次，3次/d，持續(xù)12周。

1.2.3紅細胞免疫功能檢測對照組于體檢時，KOA患者分別于治療前及治療后取靜脈血2 ml,肝素抗凝，加0.9%氯化鈉溶液以2 000 r/min洗滌離心3次，3～5 min/次，離心半徑為13.5 cm。分離血漿和紅細胞，調(diào)至紅細胞濃度為1.25×107/ml備用。參考文獻[1]檢測紅細胞C3b受體花環(huán)(RBC-C3bRR)和紅細胞免疫復合物花環(huán)(RBC-ICR)。

2　結(jié)果

2.1紅細胞免疫功能比較各組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P<0.05)。各組RBC-C3bRR、RBC-ICR比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中，Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于對照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-C3bRR低于Ⅱ型組(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于對照組，Ⅱ型組、Ⅲ型組RBC-ICR高于Ⅰ型組，Ⅲ型組RBC-ICR低于Ⅱ型組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2各證型組治療前后紅細胞免疫功能指標的比較Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-C3bRR高于治療前，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Ⅰ型組、Ⅱ型組、Ⅲ型組治療后RBC-ICR低于治療前，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表2)。

表2　各證型組治療前后紅細胞免疫功能指標比較±s，%)

表1各組基線資料與紅細胞免疫功能指標比較

Table 1Comparison of baseline characteristics and RBC immune function among each group

組別例數(shù)性別(男/女)年齡(歲)RBC-C3bRR(%)RBC-ICR(%)對照組306/2453.7±8.416.2±1.56.8±1.6Ⅰ型組276/2152.6±9.812.3±1.8a9.7±1.2aⅡ型組112/951.7±9.211.6±2.1ab13.5±2.4abⅢ型組225/1754.2±8.410.4±2.5abc11.2±1.7abcF(χ2)值0.102d0.32918.37517.538P值>0.05>0.05<0.001<0.001

注：RBC-C3bRR=紅細胞C3b受體花環(huán)，RBC-ICR=紅細胞免疫復合物花環(huán)；與對照組比較，aP<0.05；與Ⅰ型組比較，bP<0.05；與Ⅱ型組比較，cP<0.05；d為χ2值

3　討論

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為，正虛、外邪是影響KOA發(fā)生發(fā)展的重要因素[8]。隨著人老體衰，肝脾腎虧虛，筋骨失養(yǎng)，腠理空虛，加之風寒濕邪乘虛侵襲留注關(guān)節(jié)，痹阻經(jīng)絡、血行不暢而發(fā)病，屬“本虛標實”之證，正氣虛弱是KOA發(fā)生的根本原因[9]。外來病原微生物或炎性遞質(zhì)等邪氣侵襲機體后，若正氣充足,免疫功能正常，則正勝邪退，疾病趨于好轉(zhuǎn)；若正氣虛弱，免疫功能低下,則邪勝正衰，疾病趨于惡化。故中醫(yī)認為，“正氣存內(nèi),邪不可干”“邪之所湊,其氣必虛”[10]。研究表明，紅細胞具有免疫黏附和免疫調(diào)控功能，是人體天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在機體對免疫復合物的清除中發(fā)揮主導作用。因此,紅細胞免疫黏附能力可作為反映“正氣”的客觀指標之一[11]。

脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型KOA患者多有關(guān)節(jié)腫脹積液，活動受限，提示此型KOA患者多處于急性期。肝腎不足、筋脈瘀滯型與肝腎虧虛、痰瘀交阻型患者臨床癥狀多表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、脛膝酸軟、骨節(jié)肥厚、痿弱無力，提示其病程多纏綿，以慢性炎癥過程為主?！端貑枴ば魑鍤狻吩?“肝主筋、脾主肉、腎主骨”，腎精虧虛，骨失所養(yǎng)，肝血不足，血不養(yǎng)筋，脾失健運，氣血生化乏源,水濕疏布失常而流注關(guān)節(jié)，則筋脈拘急，腰膝酸痛，關(guān)節(jié)屈伸不利[10]；故《張氏醫(yī)通》指出“膝痛”“無有不因肝腎虛者，虛則風寒濕氣襲之”[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，各證型KOA患者RBC-C3bRR均低于對照組，而RBC-ICR均高于對照組,提示KOA患者存在紅細胞免疫黏附活性減弱。RBC-C3bRR在肝腎虧虛、痰瘀交阻型最低，脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型次之，肝腎不足、筋脈瘀滯型最高；分析其原因可能為，肝腎不足、筋脈瘀滯型患者氣血虛弱程度較輕，紅細胞膜C3b受體數(shù)目減少程度、紅細胞對免疫復合物黏附及釋放障礙等異常較輕，而肝腎虧虛、痰瘀交阻型氣血虧虛較重，紅細胞免疫功能衰退更為嚴重，與《金匱要略》所強調(diào)痹證多“營衛(wèi)氣虛，運行不暢”[13]，以虛立論相吻合。RBC-ICR在脾腎兩虛、濕注骨節(jié)型最高，肝腎虧虛、痰瘀交阻型次之，肝腎不足、筋脈瘀滯型最低，可能與KOA急性期滑膜炎性反應明顯，自身免疫反應使免疫復合物增加，紅細胞黏附免疫復合物過多,大量紅細胞C3b被覆蓋，致使紅細胞C3b空位及活性下降有關(guān)。免疫復合物及自由基等其他炎性產(chǎn)物蓄積增加，損害膜結(jié)構(gòu)和功能，改變紅細胞膜表面的抗原性，使紅細胞與C3b黏附功能障礙加重，又可引發(fā)機體紅細胞的免疫功能進一步減低。RBC-ICR可能與關(guān)節(jié)急性炎癥活動程度有關(guān)?！毒霸廊珪吩疲骸吧w痹者閉也，以血氣為邪所閉，不得通行而病也[14]?！北狙芯拷Y(jié)果顯示，KOA患者存在紅細胞免疫功能障礙，證實痹癥乃“因虛致病”，且痹癥日久亦能“耗氣傷血”“因病致虛”的疾病過程。故紅細胞免疫功能下降程度與氣血虧虛程度密切相關(guān)，在一定程度上能夠反映KOA中醫(yī)證候的特征，可作為證候分型的客觀指標。

本研究應用痹祺膠囊治療KOA，方中君藥為馬錢子(調(diào)制粉)，具有散寒消腫、通絡止痛作用；臣藥由茯苓、白術(shù)、黨參、丹參構(gòu)成，可健脾益氣，養(yǎng)血和血；佐藥為地龍、牛膝、川芎、三七，可活血化瘀,通絡止痛，甘草調(diào)和諸藥為使藥。諸藥配伍,共奏益氣養(yǎng)血、祛風除濕、散寒通絡、活血止痛之效。痹祺膠囊中白術(shù)、黨參、茯苓以及甘草是著名的具有健脾養(yǎng)胃、益氣補中功效的古方四君子湯的組分，其源自我國宋代時期的《太平惠民和劑局方》[15]。研究表明，四君子湯主要含有黃酮類、多糖類及有機酸類等成分，能有效調(diào)節(jié)胃腸功能，提高機體免疫力[16-17]，改善脾虛證大鼠模型紅細胞膜三磷酸腺苷酶的活性，增加組織器官和肌肉的能量供應[18]。川芎的主要成分川芎嗪，可提高人體血紅蛋白水平、紅細胞膜超氧化物歧化酶(SOD)活性及總抗氧化能力(T-AOC)，降低紅細胞膜丙二醛(MDA)水平，從而減少對紅細胞的破壞,延長紅細胞壽命[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，該藥可提高不同證型KOA患者RBC-C3bRR，降低RBC-ICR，改善紅細胞免疫功能。因此，改善紅細胞免疫功能，影響紅細胞膜代謝可能是痹祺膠囊益氣養(yǎng)血健脾的作用機制之一。

綜上所述，本研究通過分析不同證型KOA患者紅細胞免疫功能水平的差異，探討KOA中醫(yī)證型的微觀本質(zhì)，并觀察對紅細胞免疫功能的影響，揭示痹祺膠囊治療KOA的機制，為KOA的中醫(yī)診斷和治療的客觀化、標準化提供理論依據(jù)。然而，本研究采用自身對照反映痹祺膠囊對KOA的治療效果，在下一步研究中，以臨床常規(guī)治療方法為對照，進一步探討痹祺膠囊對KOA的治療效果。

作者貢獻：李芳進行課題設計與實施、資料收集整理、成文并對文章負責；姚建華進行課題設計與實施、資料收集整理；段哲萍進行資料數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析；閆永龍、鄭桂敏、曹京旌負責患者隨診及資料整理，張風肖進行質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

[1]郭峰,錢寶華,張樂之.現(xiàn)代紅細胞免疫學[M].上海:第二軍醫(yī)大學出版社,2002:262-264.

[2]HEIJINK A,GOMOLL A H,MADRY H,et al.Biomechanical considerations in the pathogenesis of osteoarthritis of the knee[J].Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc,2012,20(3):423-435.

[3]劉健,張金山,汪四海,等.膝骨關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證候分布規(guī)律及相關(guān)因素回顧性分析[J].中醫(yī)藥臨床雜志,2011,23(6):524-527.

[4]劉峻承,魯麗.膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證候研究進展[J].光明中醫(yī),2010,25(10):1950-1951.

[5]郎曉東.不同年齡健康人紅細胞免疫功能的變化分析[J].中國當代醫(yī)藥,2014,21(7):161-163.

LANG X D.Change analysis of erythrocyte immune function in the healthy people with different age[J].China Modern Medicine，2014,21(7):161-163.

[6]中華醫(yī)學會.臨床診療指南-風濕病分冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:18.

[7]鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導原則(試行)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2002：349.

[8]李西海，劉獻祥.骨關(guān)節(jié)炎的核心病機-本痿標痹[J].中醫(yī)雜志,2014,55(14):1248-1252.

[9]李西海，陳文列，劉獻祥.補腎柔肝法防治骨性關(guān)節(jié)炎作用機制探討[J].福建中醫(yī)藥大學學報，2011，21(2):66-69.

[10]傅景華,陳心智,點校.黃帝內(nèi)經(jīng)素問[M].北京:中醫(yī)古籍出版社,1997.

[11]朱立平,陳學清.免疫學常用實驗方法[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2000:187.

[12]楊玲，宋益東.《張氏醫(yī)通》的學術(shù)特色[J].中醫(yī)研究,2012,25(7):71-72.

[13]王占奎,孫桂荷,張云松，等.《金匱要略》痹證病因病機探析[J].山東中醫(yī)藥大學學報,2000,24(3):186-187.

[14]張介賓.景岳全書[M].上海:第二軍醫(yī)大學出版社,2006.

[15]黃佩，宋洋.四君子湯藥理作用和質(zhì)量控制研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2014，41(7):1395-1397.

[16]張國鳳.四君子湯的化學成分鑒定[J].中醫(yī)臨床研究,2013,5(23):26-27.

ZHANG G F.Identification of the chemical constituents of the Sijunzi decoction[J].Clinical Journal of Chinese Medicine，2013,5(23):26-27.

[17]宋利斌,毛飛寅.加味四君子湯對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)研究[J].浙江中醫(yī)藥大學學報,2012,36(10):1112-1116.

SONG L B，MAO F Y.Experimental study on the immunomodulaffmg effects of warming the kidney and strengthening spleen on immudo deficiency and spleen deficiency mice[J].Journal of Zhejiang Chinese Traditional Medicine University,2012,36(10):1112-1116.

[18]曾益宏，劉友章，徐升.益氣健脾法對脾虛證大鼠紅細胞膜ATPase活性的影響[J].四川中醫(yī),2011,29(2):24-26.

[19]劉四喜,李長鋼,代冬伶,等.川芎嗪對血紅蛋白H病患者紅細胞膜MDA、SOD和T-AOC的影響[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2010,9(11):804-807.

(本文編輯：吳立波)

Changes of Red-cell Immune Function and Biqi Capsule Intervention in Patients With Knee Osteoarthritis of Different TCM Syndromes

LIFang，YAOJian-hua,DUANZhe-ping,YANYong-long,ZHENGGui-min,CAOJing-jing,ZHANGFeng-xiao.

DepartmentofRheumatismandImmunology,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China

LIFang,DepartmentofRheumatismandImmunology,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China;E-mail:yaoyaopangpang@sina.com

ObjectiveTo explore the differences of red-cell immune function among patients with knee osteoarthritis (KOA) of different TCM syndromes and to observe the effects of Biqi capsule on red-cell immune function of KOA patients.Methods60 KOA patients,who received treatment in Department of Rheumatism and Immunology of Hebei General Hospital from March and June 2013,were selected in the study.They were divided into three groups according to Guidance on the Clinical Research on New Traditional Chinese Medicine:Type Ⅰ group(marked by insufficiency of liver and kidney function with tendon stagnation,n=27),Type Ⅱ group(characterized by deficiency of spleen and kidney function with dampness infusion into bone and joints,n=11) and Type Ⅲ group(marked by insufficiency of liver and kidney function with obstruction due to phlegm and blood-stasis,n=22).30 subjects,who had been examined healthy during the same period,were enrolled as the control group.The KOA patients were given orally four Biqi capsules each time,three times a day for 12 weeks.The levels of RBC C3b receptor rosette (RBC-C3bRR) and RBC immune complex receptor (RBC-ICR) were tested individually in 2 ml venous blood from the control group during their physical examinations and from the KOA patients before and after treatment.ResultsThe levels of RBC-C3bRR and RBC-ICR in each group were significantly different(P<0.05);the RBC-C3bRR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly lower than those in the control group,while the levels of RBC-C3bRR of Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly lower than those of Type Ⅰ group,and the level of RBC-C3bRR of Type Ⅲ group was significantly lower than that of Type Ⅱ group(P<0.05);the RBC-ICR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly higher than those in the control group,while the levels of RBC-ICR of Type Ⅱ and Type Ⅲ groups were significantly higher than those of Type Ⅰ group,and the RBC-ICR level of Type Ⅲ group was significantly lower than that of Type Ⅱ group(P<0.05).The RBC-C3bRR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type Ⅲ groups after treatment were significantly higher than those before treatment (P<0.05);the RBC-ICR levels of Type Ⅰ,Type Ⅱ and Type sⅢ groups after treatment were significantly lower than those before treatment (P<0.05).ConclusionThe RBC-C3bRR and RBC-ICR levels in KOA patients of different TCM syndromes are different,which can be used as the reference indexes for clinical TCM syndrome differentiation.Biqi capsule can improve the red-cell immune function of KOA patients to a certain degree.

Osteoarthritis,knee;Erythrocytes;Immunomodulation;Biqi capsule

河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃項目(2015136)

050051河北省石家莊市，河北省人民醫(yī)院風濕免疫科(李芳，閆永龍，鄭桂敏，曹京旌，張風肖)，腫瘤科(段哲萍)；河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院老年病科(姚建華)

李芳，050051河北省石家莊市，河北省人民醫(yī)院風濕免疫科；E-mail：yaoyaopangpang@sina.com

R 684.3

ADOI：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.24.014

2015-12-10；

2016-06-24)