熊　燚，王　健，魏　笛，馮　亞

(1.貴州省遵義市第二人民醫(yī)院急診科 563000；2.貴州省遵義市紅花崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃科 563000)

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血清神經(jīng)特異性烯醇化酶與C反應(yīng)蛋白對(duì)手足口病并發(fā)腦炎患兒的早期診斷價(jià)值*

熊燚1，王健1，魏笛1，馮亞2

(1.貴州省遵義市第二人民醫(yī)院急診科 563000；2.貴州省遵義市紅花崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃科 563000)

目的分析手足口病(HFMD)患兒血清神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)與C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的變化，探討其在HFMD并發(fā)腦炎中的早期診斷價(jià)值。方法以120例HFMD患兒及50例健康兒童(健康對(duì)照組)為研究對(duì)象，并按臨床表現(xiàn)將HFMD患兒分為普通HFMD組(70例)與HFMD并發(fā)腦炎組(50例)，采用定量PCR法檢測(cè)咽拭子腸道病毒71型(EV71)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)NSE及CRP水平，同時(shí)檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)，并分析NSE與CRP的診斷價(jià)值。結(jié)果HFMD并發(fā)腦炎組患兒血清NSE、CRP水平高于HFMD普通組及健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；EV71陽(yáng)性患兒NSE及CRP水平均高于EV71陰性患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但WBC計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血清NSE與CRP水平呈正相關(guān)(r=0.43，P<0.01)。NSE、CRP的受試者工作特征(ROC)曲線下面積(AUC)及其95%置信區(qū)間(CI)分別為0.893(0.833～0.952)、0.867(0.799～0.934)，最佳工作點(diǎn)(OOP)分別為11.6 ng/mL、14.15 mg/L，此時(shí)NSE、CRP診斷HFMD并發(fā)腦炎的靈敏度分別為80.0%、86.0%，特異度分別為81.4%、78.6%；二者串聯(lián)檢測(cè)的診斷靈敏度與特異度分別為88.0%和85.7%，AUC及其95%CI為0.927(0.845～0.969)。結(jié)論HFMD并發(fā)腦炎患兒早期NSE及CRP水平明顯升高，EV71陽(yáng)性者更為顯著，聯(lián)合檢測(cè)血清NSE及CRP水平可作為診斷HFMD并發(fā)腦炎的早期敏感指標(biāo)。

手足口病；C反應(yīng)蛋白；腸道病毒71型；神經(jīng)元特異性烯醇化酶

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是一種常見(jiàn)的傳染病，主要好發(fā)于5歲以下兒童，常由多種腸道病毒感染所致，其表現(xiàn)為手、足及口腔部位的皮疹，嚴(yán)重者可累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，即并發(fā)腦炎，嚴(yán)重威脅患兒的生命[1]。研究證實(shí)，腸道病毒71型(enterovirus 71，EV71)是HFMD感染的主要病原體之一，該型腸道病毒常可累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致病情發(fā)展迅速，病死率高[2]。因此，早期診斷危重病例，特別是HFMD并發(fā)腦炎患兒，對(duì)于其治療具有重要的臨床意義。目前，臨床上，常采用血白細(xì)胞(white blood cell，WBC)計(jì)數(shù)、血糖及心肌酶譜來(lái)診斷HFMD，但不能特異地反映早期HFMD并發(fā)腦炎患兒的感染情況。本研究對(duì)120例HFMD患兒血清C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)及神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)水平進(jìn)行了分析，以期找到一個(gè)早期診斷重癥病例即HFMD并發(fā)腦炎的生化指標(biāo)。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年6月至2014年12月在貴州省遵義市第二人民醫(yī)院兒科住院治療的HFMD患兒120例作為研究對(duì)象，其中男65例，女55例，平均年齡(1.65±0.85)歲。所有病例診斷均依據(jù)2010年原衛(wèi)生部制訂的《手足口病診療指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。排除近3個(gè)月內(nèi)有呼吸道感染者；有神經(jīng)系統(tǒng)疾病史者；有腦外傷史者等。其中普通HFMD組患兒70例，男37例，女33例，平均年齡(1.73±0.68)歲；HFMD并發(fā)腦炎組患兒50例，男28例，女22例，平均年齡(1.61±0.72)歲，均在入院前已出現(xiàn)不同程度的中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累表現(xiàn)，包括精神差、嗜睡、不規(guī)則發(fā)熱、惡心、嘔吐、腦膜刺激征及抽搐昏迷等臨床表現(xiàn)，腦脊液、腦電圖及頭顱CT異常。所有患兒均于入院后，行咽拭子定量PCR檢測(cè)EV71。同時(shí)，健康對(duì)照組50例，男30例，女20例，平均年齡(1.85±0.91)歲，均選自該院體檢中心體檢的健康兒童。

1.2方法

1.2.1血清CRP及WBC水平的測(cè)定所有HFMD患兒入院后均給予抗感染及對(duì)癥治療。在入院時(shí)，抽取空腹靜脈血2 mL，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定WBC計(jì)數(shù)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清CRP水平。

1.2.2血清NSE的測(cè)定入院時(shí)清晨抽取所有患兒空腹靜脈血2 mL，3 000 r/min離心15 min后，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)患兒血清NSE水平。整個(gè)操作過(guò)程嚴(yán)格按瑞士羅氏公司提供的試劑盒操作方法進(jìn)行。

2　結(jié)　　果

2.13組血清CRP、WBC及NSE水平比較3組CRP及NSE水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而3組WBC計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與健康對(duì)照組比較，入院后普通HFMD組及HFMD并發(fā)腦炎組患兒血清CRP、WBC及NSE水平均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同時(shí)HFMD并發(fā)腦炎組患兒血清CRP及NSE水平均高于普通HFMD組(P<0.01)，但兩組WBC計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2EV71陽(yáng)性與陰性患兒血清CRP、WBC及NSE水平比較定量PCR檢測(cè)患兒EV71，其中EV71陽(yáng)性72例，陰性48例，HFMD并發(fā)腦炎組陽(yáng)性檢出率為90.0%(45/50)，普通HFMD組陽(yáng)性檢出率為38.0%(27/70)。EV71陽(yáng)性患兒血清CRP及NSE水平均高于EV71陰性患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；而EV71陽(yáng)性與陰性患兒WBC計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1　　3組CRP、WBC及NSE水平比較

*：P<0.05，與健康對(duì)照組比較；#：P<0.05，與普通HFMD組比較。

表2　　EV71陽(yáng)性與陰性患兒血清CRP、WBC及NSE水平比較

2.3血清CRP與NSE水平的相關(guān)性分析對(duì)HFMD并發(fā)腦炎患兒血清CRP與NSE水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示二者呈正相關(guān)(r=0.43，P<0.01)，即血清CRP水平越高，腦炎程度越重，NSE水平也相應(yīng)升高。見(jiàn)圖1。

圖1　　血清CRP與NSE水平的相關(guān)性分析

檢測(cè)項(xiàng)目確診患兒例數(shù)(n)未確診患兒例數(shù)(n)靈敏度(%)特異度(%)陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(%)陰性預(yù)測(cè)值(%)CRP(>14.15mg/L)431586.078.674.188.7CRP(≤14.15mg/L)755NSE(>11.6ng/mL)401380.081.475.585.1NSE(≤11.6ng/mL)1057CRP(>14.15mg/L)聯(lián)合NSE(>11.6ng/mL)441088.085.781.590.9CRP(≤14.15mg/L)聯(lián)合NSE(≤11.6ng/mL)660

2.4血清CRP、NSE及二者聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值以CRP 14.15 mg/L為截?cái)帱c(diǎn)，診斷HFMD并發(fā)腦炎的靈敏度和特異度分別為86.0%和78.6%，AUC及其95%CI為0.867(0.799～0.934)。以NSE 11.6 ng/mL為截?cái)帱c(diǎn)，診斷HFMD并發(fā)腦炎的靈敏度和特異度分別為80.0%和81.4%，AUC及其95%CI為0.893(0.833～0.952)。二者串聯(lián)診斷HFMD并發(fā)腦炎的靈敏度和特異度分別為88.0%和85.7%，AUC及其95%CI為0.927(0.845～0.969)。見(jiàn)表4、圖2。

圖2　　血清CRP、NSE及二者聯(lián)合診斷的ROC曲線

3　討　　論

HFMD是兒童常見(jiàn)傳染病，主要表現(xiàn)出發(fā)熱，手、足及口腔出現(xiàn)皮疹等特點(diǎn)。目前，我國(guó)HFMD的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，特別是重癥患兒如HFMD并發(fā)腦炎者明顯增多，因其早期特異性診斷的缺乏及臨床表現(xiàn)的復(fù)雜多變，常導(dǎo)致病情進(jìn)展迅速，病死率顯著增高[4]。因此，針對(duì)HFMD并發(fā)腦炎患兒的早期診斷對(duì)其臨床治療及預(yù)后具有重要的意義。

HFMD的發(fā)病主要與腸道病毒感染有關(guān)，其中，有研究表明，HFMD并發(fā)腦炎與EV71感染密切相關(guān)[2]。EV71具有嗜神經(jīng)毒性，可逆行進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，感染下丘腦、腦干及海馬等部位，引起神經(jīng)細(xì)胞的變性或壞死，導(dǎo)致一系列神經(jīng)功能紊亂的癥狀[5]。NSE是神經(jīng)細(xì)胞特異性分泌的可溶性蛋白，穩(wěn)定存在于神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞受到外界各種刺激因素?fù)p傷時(shí)，NSE可從細(xì)胞內(nèi)釋放入血或腦脊液，引起血液或腦脊液中NSE水平明顯升高。因此，檢測(cè)血清或腦脊液NSE水平可作為神經(jīng)元損傷的生化標(biāo)志物之一。已有相關(guān)研究表明，在病毒性腦炎、腦出血及腦梗死等疾病中，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死導(dǎo)致患者血清及腦脊液NSE水平明顯升高，并且NSE水平與神經(jīng)元的損傷程度及疾病的預(yù)后呈正相關(guān)[6-8]。本研究顯示，HFMD患兒血清NSE水平較健康對(duì)照組有一定的升高，通過(guò)進(jìn)一步比較HFMD普通組與HFMD并發(fā)腦炎組發(fā)現(xiàn)，HFMD并發(fā)腦炎組患兒血清NSE水平明顯升高，說(shuō)明HFMD并發(fā)腦炎患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到損傷，并且造成損傷的原因與EV71感染密切相關(guān)。

有研究顯示，HFMD患兒早期血清CRP水平呈明顯升高趨勢(shì)，表明其機(jī)體處于全身炎性反應(yīng)的狀態(tài)[9]。檢測(cè)HFMD患兒血清CRP水平可作為早期診斷及判斷病情的有效指標(biāo)之一[10]。為了進(jìn)一步判斷HFMD并發(fā)腦炎患兒全身炎性反應(yīng)情況，排除可能出現(xiàn)的假陽(yáng)性結(jié)果即單純性的NSE水平增加，通過(guò)檢測(cè)其血清CRP水平顯示，HFMD患兒血清CRP水平較健康對(duì)照組明顯升高，但HFMD并發(fā)腦炎患兒血清CRP水平較普通HFMD組更高，并且血清CRP與NSE水平呈正相關(guān)，而WBC無(wú)明顯差異。上述結(jié)果提示，血清CRP水平對(duì)HFMD并發(fā)腦炎患兒的早期診斷比WBC更具有特異性。通過(guò)進(jìn)一步做NSE及CRP指標(biāo)的ROC曲線分析，其AUC均較大(>0.85)，可作為HFMD并發(fā)腦炎患兒早期診斷的有效指標(biāo)，其中，NSE>11.6 ng/mL和CRP>14.15 mg/L時(shí)對(duì)HFMD并發(fā)腦炎患兒的診斷準(zhǔn)確率較高。通過(guò)將NSE與CRP進(jìn)行串聯(lián)檢測(cè)，診斷的靈敏度和特異度分別為88.0%和85.7%，AUC為0.927，其診斷的真實(shí)性及價(jià)值更高。有研究表明，腦炎時(shí)血清NSE水平與腦脊液NSE水平呈正相關(guān)[11]。在臨床工作中由于不便提取患者的腦脊液，常采用靜脈血作為檢測(cè)標(biāo)本，血清NSE水平升高，提示存在顱內(nèi)感染。因此，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)血清CRP及NSE水平，可更加特異地對(duì)HFMD并發(fā)腦炎患兒進(jìn)行早期診斷。

綜上所述，HFMD并發(fā)腦炎患兒，大部分伴有EV71感染，且病情發(fā)展迅速，病死率高。通過(guò)本研究顯示，早期聯(lián)合檢測(cè)血清CRP及NSE水平，對(duì)HFMD并發(fā)腦炎患兒的早期診斷具有較高的靈敏度和特異度。因此，根據(jù)早期血清CRP及NSE水平，有助于提高臨床HFMD并發(fā)腦炎的早期診斷率，從而促進(jìn)其早期干預(yù)，減少HFMD并發(fā)腦炎患兒的病死率。

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Early diagnosis value of serum neuron-specific enolase and CRP in hand-foot-mouth disease complicating encephalitis*

XiongYi1，WangJian1，WeiDi1，F(xiàn)engYa2

(1.DepartmentofEmergency,ZunyiMunicipalSecondPeople′sHospital,Zunyi,Guizhou563000,China；2.DepartmentofImmunization,HonghuagangDistrictCenterforDiseaseControlandPrevention,Zunyi,Guizhou563000,China)

ObjectiveTo analyze the change of serum levels of neuron-specific enolase (NSE) and C reactive protein(CRP) and their early diagnostic value in hand-foot-mouth disease (HFMD) complicating encephalitis.MethodsOne hundred and twenty cases of HFMD and 50 healthy children(healthy control group) served as the research subjects and the HFMD cases were divided into the common HFMD group (n=70) and HFMD complicating encephalitis group (n=50) according to the clinical manifestations.The enterovirus 71 (EV71) in throat swab was detected by quantitative PCR.The NSE and CRP levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and white blood cell (WBC) count was measured by hematology analyzer.The NSE and CRP levels were compared and their diagnostic values were analyzed.ResultsThe serum NSE and CRP levels in the HFMD complicating encephalitis group were higher than those in the HFMD common group and control group,the differences were statistically significant (P<0.05),and which in the EV71 positive group were significantly higher than those in the EV71 negative group,the differences were statistically significant (P<0.05),but WBC count had no statistically significant difference (P>0.05).The serum NSE level was positively correlated with the CRP level (r=0.43，P<0.01).The area under ROC curves (AUC) and 95%CIof NSE and CRP were 0.893(95%CI: 0.833-0.952) and 0.867(95%CI:0.799-0.934),the optimal operating points(OOP) were 11.6 ng/mL and 14.15 mg/L respectively,the sensitivity and specificity of NSE and CRP for diagnosing HFMD complicating encephalitis were 80.0%,86.00% and 81.4%,78.6% respectively,while which of their combined detection were 88.0% and 85.7%,AUC and 95%CIwas 0.927(95%CI:0.845-0.969).ConclusionThe NSE and CRP levels in children patients with early HFMD complicating encephalitis are significantly increased,especially which in the patients with EV71 positive is more significant.The combined detection of serum NSE and CRP levels can be used as the early sensitive indicators for diagnosing HFMD complicating encephalitis.

hand-foot-mouth disease；C reactive protein；enterovirus 71；neuron-specific enolase

遵義市科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目[遵義市科合社字(2013)37號(hào)]；貴州省衛(wèi)生廳科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目(gzwkj2013-1-060)。作者簡(jiǎn)介：熊燚(1978-)，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事小兒危重疾病的臨床診治研究。

R725.1

A

1671-8348(2016)21-2926-03

2016-01-17

2016-04-04)

論著·臨床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.21.014