王再紅，高兆芳，李海剛，李鴻波，張　靜，楊燕君

(1.河北省秦皇島市海港醫(yī)院呼吸科，河北 秦皇島 066000；2.北京市第二醫(yī)院綜合內(nèi)科，北京 100031)

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長期吸煙對肺癌組織B7-H4、P53表達的影響及臨床意義

王再紅1，高兆芳1，李海剛1，李鴻波1，張靜1，楊燕君2

(1.河北省秦皇島市海港醫(yī)院呼吸科，河北 秦皇島 066000；2.北京市第二醫(yī)院綜合內(nèi)科，北京 100031)

[摘要]目的 比較長期吸煙和非長期吸煙肺癌患者癌組織、癌旁組織及周邊組織含V-Set域的T細胞激活抑制因子(V-Set domain-containing t-cell activation inhibitor 1，B7-H4)、P53表達的差異,探討長期吸煙對B7-H4、P53在肺癌及周邊組織表達的影響及其臨床意義。方法選擇肺癌患者115例,其中吸煙組65例,非吸煙組50例。采用免疫組織化學方法檢測2組中肺癌組織、癌旁組織及周邊組織B7-H4和P53蛋白的表達。結果2組癌組織中B7-H4、P53陽性表達均高于癌旁組織及周邊組織(P<0.05)；吸煙組癌旁組織和周邊組織B7-H4、P53陽性表達均高于非吸煙組(P<0.05)。B7-H4、P53在吸煙組和非吸煙組肺癌組織中的表達均呈正相關。結論吸煙可使肺組織B7-H4、P53蛋白高表達，二者具有協(xié)同作用,促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

[關鍵詞]肺腫瘤；吸煙；基因表達

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2016.05.022

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一。全球每年新發(fā)肺癌120萬例，平均每30 s就有1人死于肺癌。其中，中國每年有60多萬人死于肺癌[1]。大量的流行病學調(diào)查顯示肺癌與吸煙的關系最為密切。吸煙者除了吸入煙草中含有的多種化學致癌物，還可導致基因的改變[2]。共刺激分子B7家族中的重要成員含V-Set域的T細胞激活抑制因子(V-Set domain-containing t-cell activation inhibitor 1，B7-H4)[3]，可介導腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[4-5]，其在正常上皮中不表達或低表達，在多種腫瘤高表達。野生型P53是有代表性的抑癌基因，但突變的P53失去了抑癌作用，具有了致癌作用。本研究檢測B7-H4、P53在長期吸煙與非吸煙肺癌患者術后癌組織、癌旁組織及周邊組織中表達的差異，旨在探討吸煙對肺癌的作用。現(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2011年1月—2013年3月在河北省秦皇島市海港醫(yī)院行根治手術并經(jīng)病理確診為肺癌的患者115例。其中高分化58例，中分化41例，低分化16例。排除標準：術前接受放療、化療或其他針對腫瘤治療的患者及被動吸煙的患者。所有納入研究的肺癌患者吸煙史明確，并且臨床資料完整。按1984年世界衛(wèi)生組織關于吸煙調(diào)查方法的標準建議：如果每天吸煙1支以上，時間長于1年者為吸煙，吸煙量1～9支/d為輕度，10～19支/d為中度，20支以上為重度。由于部分病例中僅有吸煙年限的記錄，而吸煙年限也能夠在一定程度上反映出其吸煙量的多少，故將其吸煙年限<10年者定位輕度，11～19年為中度，20年以上為重度。本研究中所指的長期吸煙為吸煙支數(shù)20支/d以上、吸煙年限20年以上。據(jù)此分為吸煙組65例，男性 43例，女性22例，年齡34～71 歲，平均(56.17±4.28)歲。非吸煙組50例，男性36例，女性14例，年齡36～74歲，平均(58.12±4.56)歲。2組性別、年齡差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2B7-H4、P53蛋白的檢測方法本研究B7-H4和P53蛋白濃縮液購自武漢博士德生物工程有限公司，按不同比例稀釋后進行預實驗，選取最理想表達的濃度進行正式實驗。2種蛋白的實驗檢測均應用免疫組織化學二步法。嚴格按實驗步驟操作，努力減少誤差。

1.3免疫組織化學結果的判定B7-H4以細胞膜和(或)細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒為陽性反應細胞，P53以細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應細胞。計數(shù)5個400倍的高倍視野，取其平均值作為最終的陽性表達率，以陽性細胞≥5%定為陽性，<5%定為陰性。

1.4統(tǒng)計學方法應用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；相關性采用Spearman相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結　　果

2.1免疫組織化學檢測B7-H4、P53表達B7-H4、P53在吸煙組和非吸煙組肺癌組織中均高表達，均明顯高于癌旁組織和周邊組織(P<0.05)；吸煙組癌旁組織和周邊組織B7-H4和P53的表達均高于非吸煙組的癌旁組織和周邊組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；但吸煙組與非吸煙組癌組織B7-H4、P53表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　2組肺癌組織、癌旁組織及周邊組織中B7-H4、P53表達比較　(例數(shù)，%)

*P<0.05與同組癌組織比較#P<0.05與同組癌旁組織比較(χ2檢驗)

2.2相關性分析在2組肺癌組織中B7-H4的表達與P53的表達呈正相關(吸煙組rs=0.339、P=0.006，非吸煙組rs=0.477、P=0.000)。提示兩者在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有協(xié)調(diào)作用。

3　討　　論

肺癌的發(fā)生發(fā)展是多階段、多基因、多因素共同作用的結果。吸煙是導致肺癌的首位危險因素，90%肺癌的發(fā)病與吸煙有關，并且肺癌中吸煙者的病死率亦高于不吸煙者。Meta分析表明吸煙初始年齡越早，吸煙時間越長，吸煙總量和每日吸煙量越大，吸煙深度越深，戒煙時間越短，發(fā)生肺癌的危險性就越大。吸煙導致肺癌發(fā)生的機制包括自由基氧化損傷、癌基因與抑癌基因的突變、肺部炎癥損傷等。研究表明，煙草煙霧中含有多種致癌物可經(jīng)體內(nèi)代謝酶的作用激活，形成親電子產(chǎn)物，損傷DNA并使基因突變，從而導致肺癌的發(fā)生[2]。B7-H4、P53在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中均起了重要的作用。本研究通過檢測B7-H4、P53在長期吸煙和非長期吸煙肺癌患者癌組織、癌旁組織及周邊組織表達的差異,探討長期吸煙對B7-H4、P53在肺癌及周邊組織表達的影響及其臨床意義。

B7-H4分子含有282個氨基酸[6-7]，屬于B7-CD28共同刺激分子超家族，主要表達于抗原提呈細胞等多種細胞的表面，與其他B7成員不同，B7-H4并沒有明顯的跨膜區(qū)，在腫瘤發(fā)生的免疫應答過程中起到重要作用。人B7-H4蛋白能通過降低細胞因子產(chǎn)生即減少機體IL-2和IL-4的分泌，抑制CD4+和CD8+的T細胞活化，阻滯T細胞周期進展，使T細胞停留在G0/G1期，從而抑制T細胞增殖進展[7-10]。正常生理狀況下，協(xié)同共刺激分子B7-H4通過抑制T淋巴細胞增殖，發(fā)揮負性調(diào)節(jié)T細胞介導的免疫應答作用，以維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，但B7-H4異常高表達可使機體由對腫瘤的免疫監(jiān)視發(fā)展為對腫瘤的免疫耐受，從而實現(xiàn)腫瘤免疫逃逸，最終導致腫瘤的發(fā)生[10]。本研究結果顯示，吸煙組及非吸煙組肺癌組織中B7-H4均高表達，從而推斷肺癌組織中B7-H4的高表達，使得肺癌組織具備了逃逸機體免疫監(jiān)視的能力，促進了肺癌的惡化和轉(zhuǎn)移；吸煙組癌旁組織和周邊組織B7-H4陽性表達均高于非吸煙組(P<0.05)，推斷吸煙暴露促進了B7-H4蛋白的高表達，從而揭示吸煙通過對B7-H4表達的影響而促進肺癌的發(fā)生。

P53基因是于1979年發(fā)現(xiàn)的一種可以編碼蛋白的基因。開始認為它是一種癌基因，但隨著進一步研究發(fā)現(xiàn)P53基因是一種重要的抑癌基因，近年來一直受到廣泛的關注[11]。其編碼的P53蛋白能夠通過調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄來應對DNA損傷、癌基因信號激活及基因毒性應激等不利因素。P53蛋白是一種核內(nèi)磷酸化蛋白，它以四聚體形式與DNA結合，分布于細胞核中。近年來有研究提示P53基因是人類惡性腫瘤中突變頻率最高的基因之一[12]。突變的P53基因在多種腫瘤中高表達，獲得了致癌功能，是細胞凋亡的調(diào)控因子[13]，可促進細胞轉(zhuǎn)化和增殖，促進腫瘤進展[14]。有研究表明，P53基因在肺癌組織中基因突變的檢出率可以高達60%～80%。野生型P53蛋白在細胞中的含量很低，且半衰期極短，所以很難檢測出來。本研究檢測的亦為突變型P53蛋白，顯示吸煙組及非吸煙組肺癌組織中P53蛋白高表達，且明顯高于癌旁組織及周邊組織。這與卞安春等[15]研究一致，他們發(fā)現(xiàn)突變型P53蛋白在肺腺癌組織中的表達率為63.7%，并且與肺癌大小及病理分期有關，通過多因素生存分析顯示P53基因突變的肺腺癌患者預后較差。本研究結果還顯示，吸煙組癌旁組織和周邊組織P53陽性表達均高于非吸煙組(P<0.05)。說明P53基因與肺組織癌變過程密切相關，而有煙草暴露的情況下P53基因容易發(fā)生突變，提示吸煙與P53基因突變之間存在相關，并且存在P53基因突變時患者預后較差。

煙草煙霧中含有4 000多種化學物質(zhì)，其中大多數(shù)為致癌物質(zhì)，包括一氧化碳、尼古丁和煙焦油，分為氣相和顆粒相兩部分。大部分化學致癌物在酶的作用下產(chǎn)生自由基而引起DNA突變[1]。本研究中B7-H4、P53在吸煙組及非吸煙組肺癌組織中均呈現(xiàn)高表達，且明顯高于癌旁組織和周邊組織；B7-H4、P53在2組肺癌組織中的表達呈正相關。提示B7-H4和P53的高表達，能促進腫瘤的發(fā)生，兩者具有協(xié)同作用，表明肺組織癌變過程與B7-H4、P53基因密切相關。B7-H4、P53在吸煙組癌旁組織和周邊組織的表達陽性率均高于非吸煙組癌旁組織和周邊組織， 從而推斷B7-H4、P53基因的突變?yōu)槲鼰煴┞端隆?/p>

總之，深入研究B7-H4、P53與腫瘤的關系，將有助于進一步揭開腫瘤的發(fā)病機制和對腫瘤進行早期的臨床診斷，并為腫瘤的免疫治療提供新的干預策略和治療靶點。

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(本文編輯：許卓文)

[收稿日期]2015-08-07；[修回日期]2015-11-13

[作者簡介]王再紅(1973-)，女， 河北昌黎人，河北省秦皇島市海港醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學學士，從事呼吸內(nèi)科疾病診治研究。

[中圖分類號]R734.2

[文獻標志碼]B

[文章編號]1007-3205(2016)04-0582-03