王福男（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070）

郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響

王福男
（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070）

目的：探討不同劑量的郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法：將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、自愈組（C組）、高劑量治療組（D組）、中劑量治療組（E組）、低劑量治療組（F組），每組10只，實(shí)驗(yàn)采用“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素造模，造模后給予不同劑量的郁金散進(jìn)行治療，觀察治療前后大鼠的一般行為學(xué)并測(cè)定血液流變學(xué)和血常規(guī)的相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果：（1）造模后大鼠表現(xiàn)大便溏或有粘液，被毛泛黃，體溫升高，食欲減退等，符合大腸濕熱證所表現(xiàn)的癥狀；（2）與A組比較，B組的全血高、低切黏度極顯著高于A組（P＜0.01）；與B組相比，C、E、F組的的全血高、低切黏度顯著低于B組（P＜0.05），D組的全血高、低切黏度極顯著低于B組（P＜0.01）；（3）與A組比較，B組的紅細(xì)胞數(shù)目、白細(xì)胞數(shù)目、中性粒細(xì)胞數(shù)目、紅細(xì)胞壓積以及血紅蛋白濃度和A組的差異極顯著（P＜0.01）；與B組比較，C、E、F組的這些指標(biāo)均顯著低于B組（P＜0.05），但D組的這些指標(biāo)極顯著低于B組（P＜0.01）。結(jié)論：各劑量的郁金散對(duì)大鼠大腸濕熱證均有治療效果，其中高劑量效果最好。

郁金散；大腸濕熱證；血流變；血常規(guī)

郁金散出自《元亨療馬集》，是治療馬的濕熱泄瀉的著名方劑，其主要功能為清熱解毒，澀腸止瀉。方中郁金清熱涼血，行氣散瘀，為主藥；黃連、黃芩、黃柏、梔子清三焦郁火兼化濕熱，為輔藥；白芍、訶子斂陰澀腸而止瀉，更以大黃清血熱、下積滯，共為佐藥［1］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，郁金散方劑中的郁金能降低紅細(xì)胞的聚集性，提高紅細(xì)胞的變形能力以及減少自由基對(duì)紅細(xì)胞膜的損傷，延長(zhǎng)其壽命，維持正常的血液黏度［2］。本文就郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠的作用進(jìn)行研究，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

中醫(yī)濕熱證以脾胃濕熱證為主，因?yàn)槠⑽肝挥谥薪梗闈衽K，胃為燥腑，容易滋生濕熱之邪。薛生白云：“中氣實(shí)則病在陽(yáng)明，中氣虛則病在太陰，太陰內(nèi)傷，濕飲停聚，客邪再至，內(nèi)外相引，故病濕熱，此皆先有內(nèi)傷，再感客邪［3］”。脾胃濕熱下注大腸則成為大腸濕熱證。《內(nèi)經(jīng)》云：“暴注下迫，皆屬于熱”。濕熱蘊(yùn)結(jié)，困擾脾土，脾失健運(yùn)，運(yùn)化失常，則清濁不分，水谷混雜而下，并走大腸則成大腸濕熱證泄瀉。大腸濕熱證的病機(jī)有外感暑濕邪氣，或因飲食不節(jié)［4］。大腸濕熱證以發(fā)熱、大便溏而不爽或有粘液等為必備主要臨床癥狀。

王新華［5］在模擬長(zhǎng)夏氣候因素，飲食不節(jié)、過(guò)食肥甘基礎(chǔ)上再施以大腸桿菌內(nèi)毒素，復(fù)制成溫病濕熱模型。本次試驗(yàn)以“高糖高脂飲食加高溫高濕環(huán)境加大腸桿菌刺激”建立大腸濕熱證大鼠模型，用高糖高脂飲食使得大鼠飲食不節(jié)，過(guò)食肥甘，損傷脾胃，脾傷則運(yùn)化水濕功能失常和脾失健運(yùn)；再人工創(chuàng)造濕熱環(huán)境，模擬外感濕熱病邪而形成濕熱證［6］。造模完成后給予郁金散水煎劑進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)檢測(cè)大鼠血常規(guī)以及血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)來(lái)為探討郁金散對(duì)大腸濕熱證的作用機(jī)理作鋪墊。

1　材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重180～220 g，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（甘）2013-0002。適應(yīng)環(huán)境3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室溫度為22～25 ℃，相對(duì)濕度45 %～65 %，晝夜12/12 h明暗交替。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

郁金散水煎劑：郁金36 g，訶子18 g，黃芩36 g，大黃72 g，黃連36 g，梔子36 g，白芍18 g（比例按照文獻(xiàn)［1］）。中藥經(jīng)三次水煎煮后合并三次濾液，低溫濃縮至1.04 g/mL，即濃縮成277 mL，郁金散高、中、低灌胃分別以200 %、100 %、50 %郁金散藥液。高劑量組給藥1.04 g/100 g，中劑量組給藥0.52 g/100 g，低劑量組給藥0.26 g/100 g。

1.3 大腸桿菌

大腸桿菌菌號(hào)為O101。

1.4 試劑

水合氯醛（上海展云化工有限公司，批號(hào)1402207）、氯化鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20150410）、牛肉膏（北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)20131018）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂（青島高科園海博生物技術(shù)有限公司，批號(hào)20140807）、蛋白胨（北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)20140318）

1.5 儀器

TDZ4-WS低速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-6000（上海亞榮生化儀器廠）；LBY-N6A型RHEOMETER全自動(dòng)血液流變儀（北京普利生公司）；

全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀BC-5300Vet（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）。

1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A組）、大腸濕熱證模型組（B組）、自愈組（C組）、郁金散高劑量治療組（D組）、郁金散中劑量治療組（E組）和低劑量治療組（F組）6組，每組10只。造模需18 d，實(shí)驗(yàn)共用23 d。造模過(guò)程如下：（1）A組自然環(huán)境下飼養(yǎng)。（2）B組：高糖高脂飼養(yǎng)10 d（隔天禁食，隔天給予充足飼料并灌胃豬油4 mL/200 g，30 %蜂蜜水自由飲水）。然后將大鼠置于高溫高濕環(huán)境中（溫度32～35 ℃，相對(duì)濕度85～95 %），持續(xù)9 h，灌酒1 mL/100 g（56度紅星二鍋頭），連續(xù)5 d。最后腹腔注射大腸桿菌（0.2 mL/100 g），24 h后再注射一次，自然環(huán)境下飼養(yǎng)1 d后處死，腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血，分別用EDTA-K2采血管和肝素鈉抗凝管采集血液。（3）高中低劑量的郁金散治療組造模結(jié)束后灌胃相應(yīng)劑量的郁金散，自愈組灌胃相應(yīng)體積的生理鹽水，5 d后處死，處死及采血方法同模型組。

1.7 觀測(cè)指標(biāo)及方法

1.7.1 一般行為學(xué)觀察

觀察大鼠的一般行為學(xué)，包括肛溫，精神活動(dòng)，飲水量，采食量，尿量以及糞便等。

1.7.2 血黏度檢測(cè)

取腹主動(dòng)脈血2 mL，肝素抗凝，用全自動(dòng)血液流變儀進(jìn)行血液流變學(xué)測(cè)定，主要包括全血低切黏度和高切黏度。

1.7.3 血常規(guī)檢查

用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)，主要包括紅細(xì)胞數(shù)目、白細(xì)胞數(shù)目、中性粒細(xì)胞數(shù)目、紅細(xì)胞壓積、血紅蛋白濃度。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

2　結(jié)果與分析

2.1 大鼠行為學(xué)觀察

A組：大鼠活躍，毛發(fā)有光澤，食欲良好，飲水量，尿量以及肛溫正常。

B組：高糖高脂時(shí)期大鼠活躍，體重增長(zhǎng)較快，飲食飲水量正常，糞便成形，較A組稍軟，高溫高濕時(shí)期大鼠精神不振，食欲減退，被毛泛黃，攻毒期間大鼠眼睛半閉并有分泌物，身體蜷縮，肛周紅腫肛門松弛，肛門周圍及尾部粘有黃色粘液稀便，大便味臭，肛溫較A組升高。

C組：造模前癥狀同B組，造模后肛溫繼續(xù)上升，高于A組，體重開(kāi)始下降后逐漸上升。尿量，飲水量減少，采食量開(kāi)始減少后逐漸增加，仍有大鼠拉稀。

D、E、F組：用藥前癥狀同B組，用藥后大鼠體重有所增加，但未達(dá)到高糖高脂時(shí)期體重，采食量，飲水量和尿量增加。D組大鼠肛溫開(kāi)始下降接近A組，糞便較A組稍軟，大鼠精神有所好轉(zhuǎn)。E組大鼠肛溫先繼續(xù)上升，用藥兩天后開(kāi)始下降接近A組，F(xiàn)組大鼠肛溫開(kāi)始上升，但用藥兩天后開(kāi)始下降，但高于A組。仍有大鼠拉稀軟糞便。

2.2 血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，與A組相比，B組的全血低切和高切黏度都極顯著高于A組（P＜0.01），表明大腸濕熱證模型組的血液粘稠度高于正常對(duì)照組，說(shuō)明模型復(fù)制成功。與B組相比，D組的全血低切和高切黏度極顯著低于B組（P＜0.01），C、E、F組的全血高、低切黏度顯著低于B組（P＜0.05），表明該模型有一定的自愈能力，且高劑量的郁金散治療效果最好。

表1 造模后各組大鼠血黏度的比較（±s，n=10）

表1 造模后各組大鼠血黏度的比較（±s，n=10）

注：與A組相比，bP ＜0.01；與B組相比，cP＜0.05，aP＜0.01

項(xiàng)目（m P a · s）　A組　B組　C組　D組　E組　F組全血低切黏度　1 0 . 7 2 ± 0 . 7 2a　1 5 . 3 4 ± 0 . 3 5b　1 3 . 4 7 ± 0 . 3 5c　1 0 . 9 2 ± 0 . 2 5a　1 2 . 2 1 ± 0 . 3 5c　1 3 . 4 7 ± 0 . 2 6c全血高切黏度 　3 . 5 9 ± 0 . 2 0a　4 . 6 5 ± 0 . 1 8b　4 . 1 6 ± 0 . 2 6c　3 . 3 5 ± 0 . 0 3a　4 . 0 7 ± 0 . 2 6c　4 . 1 0 ± 0 . 3 1c

2.3 血常規(guī)測(cè)定結(jié)果

由表2可知，與A組相比，B組的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積、中性粒細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白濃度極顯著高于A組（P＜0.01），與B組相比，C、E、F組的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積、中性粒細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白濃度顯著低于B組（P＜0.05），D組的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積、中性粒細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白濃度極顯著低于B組。結(jié)果表明了該模型具有一定的自愈能力，三種不同劑量的郁金散對(duì)該模型均有治療效果，其中經(jīng)高劑量治療后大鼠的恢復(fù)程度較好。

表2 造模后各組大鼠血常規(guī)的比較（±s，n=10）

表2 造模后各組大鼠血常規(guī)的比較（±s，n=10）

注：與A組相比，bP＜0.01；與B組相比，cP＜0.05，aP＜0.01

項(xiàng)目　A組　B組　C組　D組　E組　F組紅細(xì)胞數(shù)/ × 1 012· L-1　6 . 6 2 ± 0 . 2 8a　1 3 . 9 2 ± 0 . 3 9b　1 1 . 4 8 ± 0 . 3 5c　6 . 6 7 ± 0 . 6 3a　8 . 4 4 ± 0 . 3 4d　9 . 4 9 ± 0 . 3 5e白細(xì)胞數(shù)/ × 1 09· L-1　1 3 . 9 9 ± 0 . 5 5a　3 7 . 2 1 ± 3 . 7 7b　2 4 . 1 6 ± 2 . 1 5c　1 4 . 7 4 ± 0 . 8 8a　1 7 . 8 5 ± 1 . 1 4d　2 2 . 1 4 ± 2 . 2 6c紅細(xì)胞壓積/% 　3 8 . 5 5 ± 4 . 4 2a　7 1 . 3 1 ± 5 . 0 1b　5 5 . 1 4 ± 2 . 6 1c　4 0 . 5 1 ± 2 . 1 3a　4 4 . 0 0 ± 3 . 2 9d　5 1 . 0 6 ± 2 . 9 6e中性粒細(xì)胞數(shù)/ × 1 09· L-1　5 . 0 8 ± 0 . 4 4a　1 7 . 3 0 ± 1 . 9 1b　1 1 . 0 1 ± 0 . 5 6c　6 . 1 2 ± 0 . 4 6a　8 . 2 8 ± 0 . 4 9d　1 0 . 2 6 ± 1 . 4 7c血紅蛋白濃度/ g · L-1　1 3 8 . 6 3 ± 1 2 . 6 5a　2 5 9 . 8 8 ± 1 6 . 4 7b　1 7 8 . 7 5 ± 3 1 . 5 4c　1 4 9 . 1 3 ± 4 . 0 5a　1 6 4 . 5 0 ± 1 1 . 1 0cd　1 7 2 . 0 0 ± 1 4 . 9 7c

3　討論

3.1 大鼠大腸濕熱證模型的建立

本實(shí)驗(yàn)采用“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素造模，造模后大鼠都有不同程度的拉稀，精神沉郁，食欲減退，嗜臥，被毛泛黃粗亂，肛周紅腫，肛門周圍粘有稀便，味臭。大腸濕熱證以發(fā)熱，大便溏而不爽或有粘液，糞便色黃而臭等為必備主要臨床癥狀。因此一般癥狀符合大腸濕熱證的癥狀，造?；境晒?。對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠給予高糖高脂飲食，一方面可以使大鼠在短期內(nèi)增加體質(zhì)量，另一方面長(zhǎng)期給予高糖高脂飲食，可造成大鼠脾胃功能損傷，為脾胃濕熱提供了前提條件［7］。外部濕熱可以造成脾胃功能失調(diào)，張六通等［8］模擬自然發(fā)病環(huán)境，通過(guò)控制氣候箱的溫濕度來(lái)研究外濕致病機(jī)理，結(jié)果濕熱組出現(xiàn)納呆少飲，消瘦，大便不成形或稀便等癥狀。所以模擬濕熱環(huán)境是大腸濕熱證動(dòng)物模型的一個(gè)關(guān)鍵因素。

3.2 郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血流變的影響

郁金散方劑中郁金具有調(diào)節(jié)免疫功能，抑制中樞神經(jīng)，改善血液流變性，抗自由基損傷等作用［9］。黃連、黃柏和黃芩這三味藥都可以廣泛用于多種濕熱病，其中黃連主要作用在腸胃，尤其是大腸濕熱的濕性痢疾，所以黃連為中獸醫(yī)治療濕性痢疾的首選藥。梔子用于火毒熾盛，三焦俱熱配伍三黃。段文卓等［10］通過(guò)紅細(xì)胞的聚集性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)郁金可以提高紅細(xì)胞的變形能力及抗氧化、免疫粘附能力減少了自由基對(duì)紅細(xì)胞模的損傷，延長(zhǎng)其壽命，維持正常的血液黏度。

本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組的全血高低切粘度均高于正常對(duì)照組，血液黏滯性增加明顯，提示其紅細(xì)胞變形能力下降，紅細(xì)胞聚集性增加及血液粘稠度增大，這符合中醫(yī)“血淤”征候所體現(xiàn)的血液“濃、黏、聚”的特點(diǎn)。中醫(yī)理論認(rèn)為濕為陰邪，易阻礙氣機(jī)，氣機(jī)不利血運(yùn)不暢極易致瘀；熱為陽(yáng)邪，其性炎上，煎熬津液，阻塞經(jīng)脈也易致血瘀。大量研究表明濕熱證與血流變有密切的聯(lián)系［11］。經(jīng)治療后，各劑量的郁金散均有一定的治療效果，其中高劑量組的全血高低切粘度和正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異。說(shuō)明高劑量的郁金散對(duì)大腸濕熱證血液流變學(xué)指標(biāo)有明顯的調(diào)節(jié)作用。

3.3 郁金散對(duì)大腸濕熱證大鼠血常規(guī)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠的白細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)相比正常對(duì)照組數(shù)量極劇增多，劉光華等發(fā)現(xiàn)濕證動(dòng)物模型可表現(xiàn)為免疫功能的下降，炎癥與濕熱證本質(zhì)有關(guān)［12］。此外，模型組大鼠的紅細(xì)胞壓積和血紅蛋白濃度也明顯高于正常對(duì)照組，提示了造模后大鼠的紅細(xì)胞聚集性增加，郁金散方劑中郁金的作用機(jī)制是將紅細(xì)胞壓積明顯降低，發(fā)揮出解聚紅細(xì)胞聚集的作用［13］。與模型組相比，經(jīng)郁金散治療后，不同劑量組大鼠的血常規(guī)指標(biāo)均有所恢復(fù)，其中高劑量治療組的血常規(guī)這些指標(biāo)與正常對(duì)照組組差異不顯著，因此說(shuō)明高劑量的郁金散對(duì)大腸濕熱證血常規(guī)指標(biāo)有明顯的調(diào)節(jié)作用。

4　結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素復(fù)制大腸濕熱證模型，造模后并給予不同劑量郁金散進(jìn)行治療。通過(guò)郁金散對(duì)血流變學(xué)和血常規(guī)指標(biāo)的改善說(shuō)明了郁金散對(duì)大腸濕熱證可能具有一定的治療作用，其中高劑量的郁金散的治療效果較好。另外，該模型具有一定的恢復(fù)能力，但是恢復(fù)能力不如郁金散治療組。

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（編輯：晏兵兵）

S858

A

1006-799X（2016）13-0090-04