林 竹（天津科技大學(xué)，天津郁美凈集團(tuán)有限公司，天津，300110）

兒童洗類(lèi)產(chǎn)品防腐劑抑菌效果及應(yīng)用

林 竹
（天津科技大學(xué)，天津郁美凈集團(tuán)有限公司，天津，300110）

利用微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)對(duì)幾種防腐體系在兒童洗類(lèi)產(chǎn)品中的抑菌效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并綜合安全性等方面考慮，最后篩選出防腐效果好、安全性高的防腐體系。

兒童化妝品；防腐劑；微生物挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)

兒童的皮膚和頭發(fā)普遍屬于干性，需要一些富油脂、潤(rùn)膚、無(wú)刺激的專(zhuān)用化妝品。他們的皮膚屏障功能很薄弱，水分很容易流失，這就需要一些富含天然成分、具有高保濕配方的清潔、滋潤(rùn)產(chǎn)品。然而這些高水分、高營(yíng)養(yǎng)的化妝品特別適合微生物的生長(zhǎng)。那么如何有效地構(gòu)建兒童化妝品里防腐體系［1-2］，使其有足夠的防腐效力，又能避免其因使用防腐劑而造成皮膚接觸性過(guò)敏是要解決的一道難題。在評(píng)價(jià)防腐劑的實(shí)際效果中， 應(yīng)用最為廣泛和經(jīng)典的研究手段是微生物挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)（microb ialchallenge testing）［3-6］。近年來(lái)，以微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)作為測(cè)試和評(píng)價(jià)化妝品的防腐效能也已逐步被國(guó)內(nèi)外化妝品生產(chǎn)企業(yè)接受和推行［7］。本文主要是利用微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)對(duì)4種防腐體系進(jìn)行抑菌功效測(cè)試和評(píng)價(jià)，篩選出防腐效果好、安全性高的防腐體系。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 樣品材料與培養(yǎng)基

防腐劑：PE10，PE202，乙基己基甘油均由北京桑普生物化學(xué)技術(shù)有限公司提供。

兒童沐浴液：研發(fā)實(shí)驗(yàn)室自制，不含其他防腐劑。

霉菌培養(yǎng)基：察氏培養(yǎng)基，115℃高壓滅菌30min后制成斜面?zhèn)溆谩?/p>

細(xì)菌培養(yǎng)基：卵磷脂吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌20min后制成斜面?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)菌種

1.2.1 細(xì)菌

金黃色葡萄球菌：（Staphylococcus aureus）ATCC 6538；大腸埃希氏菌：（Escherichia coli）ATCC 8739；銅綠假單胞菌：（Pseudomonas. aeruginosa）ATCC 9027；

1.2.2 霉菌與酵母菌

黑曲霉：（Aspergillus niger）ATCC 16404；白假絲酵母（Candida albicans）ATCC 10231。

設(shè)備維修保養(yǎng)工作的好壞，對(duì)設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)有著重要的影響，如透平油的處理，潤(rùn)滑油的加注，設(shè)備輪換運(yùn)行，甚至設(shè)備吹灰等清潔工作，每一項(xiàng)都不應(yīng)該忽視。我廠(chǎng)的調(diào)速器為進(jìn)口產(chǎn)品，對(duì)油質(zhì)要求相當(dāng)高，因此采取現(xiàn)場(chǎng)循環(huán)濾油，故障率比以前明顯減少，大大提高了設(shè)備的可靠性，延長(zhǎng)了設(shè)備的壽命周期。對(duì)設(shè)備存在的缺陷應(yīng)及時(shí)消除處理，做到大缺陷不過(guò)天，小缺陷不過(guò)班，確保設(shè)備處于健康運(yùn)行狀態(tài)。對(duì)設(shè)備進(jìn)行較全面的狀態(tài)監(jiān)督和技術(shù)分析，掌握設(shè)備的實(shí)際運(yùn)行情況，廢除一些不必要的檢修項(xiàng)目，從而可以節(jié)省大量的檢修工期。

上述菌株均由中科院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)微生物菌種庫(kù)提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)用菌液的配制

實(shí)驗(yàn)前將各個(gè)菌株分別接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基斜面，細(xì)菌（金黃色葡萄球菌，大腸埃希氏菌，銅綠假單胞菌）均于（36±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36～48h。分別挑取適量菌落于無(wú)菌生理鹽水中混勻，制成一定濃度的混合菌懸液?；旌霞?xì)菌懸液總濃度約為1.0×108cfu/mL。置于4℃貯存?zhèn)溆?。霉菌于?7±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)120h。酵母菌（27±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，挑取適量霉菌和酵母菌菌落于無(wú)菌生理鹽水中混合均勻，制成一定濃度的混合菌懸液?；旌厦咕徒湍妇咦討乙嚎倽舛燃s為1.0×107cfu/mL，置于4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

采用一次加菌的28天微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，該方法參照美國(guó)藥典上微生物挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)防腐劑效果的方法。稱(chēng)取測(cè)試樣品（化妝品）100g，裝入適量塑料瓶?jī)?nèi)，分別加入適量的混合菌懸液，使每克受檢膏霜最終含細(xì)菌量為1.0×106～5.0×106CFU/g，霉菌酵母菌量為1.0×105～5.0×105CFU/g充分混勻，分別置于（36±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在接種0 、3、7、14、21和28天分別取樣進(jìn)行菌量分析。

1.5 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［7］

初始接種量細(xì)菌106～107cfu/g （mL），霉菌105～106cfu/g（mL）：①第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌＞103cfu/g（mL），該樣品不能通過(guò)微生物攻擊的挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，表明樣品的防腐體系不能起到有效抑制微生物的作用，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用中很容易受到微生物的污染。②第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌在102～103cfu/g（mL），該樣品有條件地通過(guò)挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，即當(dāng)產(chǎn)品中蛋白質(zhì)或其他動(dòng)植物材料成分不是特別高，同時(shí)生產(chǎn)的衛(wèi)生環(huán)境符合要求，包裝物不易發(fā)生二次污染時(shí)，該防霉體系可以使用，否則不能。③第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌在10～102cfu/g（mL），表明該樣品的防腐體系對(duì)微生物有較強(qiáng)的抑殺效果，通過(guò)挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)不容易受到微生物污染。④從第7天起，樣品中的細(xì)菌或霉菌＜10 cfu/g （mL），說(shuō)明該樣品的防腐體系對(duì)微生物有特強(qiáng)的抑殺作用，通過(guò)挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)很不容易被微生物污染。

2 防腐劑體系

1#為桑普PE202產(chǎn)品，其主要組分為苯氧乙醇、羥苯甲酯、羥苯丙酯、甲基異噻唑啉酮。其性質(zhì)溫和，安全性好，廣譜抑菌，正常使用濃度下對(duì)皮膚、眼睛、粘膜無(wú)刺激、無(wú)過(guò)敏。但其中含有羥苯甲酯、羥苯丙酯、甲基異噻唑啉酮等成分，不符合化妝品發(fā)展趨勢(shì)，故選擇PE10和乙基己基甘油復(fù)配的組合方式進(jìn)行防腐功效測(cè)試。PE10主要成分為苯氧乙醇，與乙基己基甘油，二者復(fù)配除具有PE202的優(yōu)點(diǎn)外，更安全，更溫和，并不含尼泊、MIT，是兒童護(hù)膚品的理想選擇。各防腐劑組合見(jiàn)表1。

2.2 配方中選用防腐劑的毒理數(shù)據(jù)

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)：苯氧乙醇 LD50＞2000 mg/kg（大鼠）；羥苯甲酯LD50=5000mg/kg（小鼠）；羥苯丙酯 LD50=8000mg/kg（小鼠）；甲基異噻唑啉酮 LD50=183mg/kg（雌），235mg/kg（雄）（大鼠）。

急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)：苯氧乙醇 LD50=14422 mg/kg（家兔）；在正常使用濃度下，對(duì)皮膚及眼睛無(wú)刺激、無(wú)過(guò)敏。

3 結(jié)果與討論

3.1 微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4個(gè)防腐體系微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)見(jiàn)表2。

3.2 結(jié)果分析

表1 所用防腐體系

表2 微生物挑戰(zhàn)

（1）第28天時(shí)，各個(gè)樣品中細(xì)菌、霉菌和酵母菌的含量均＜10cfu/g（mL），表明這4種防腐體系對(duì)微生物均有較強(qiáng)的抑殺效果，通過(guò)挑戰(zhàn)試驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)不容易受到微生物污染。

（2）2#樣品通過(guò)挑戰(zhàn)試驗(yàn)。同時(shí)，2#跟1#相比，在第14天時(shí)細(xì)菌菌落總數(shù)更低， 說(shuō)明2#樣品的防腐體系與1#樣品對(duì)細(xì)菌的抑制力相當(dāng)，但抑制霉菌酵母菌的能力稍差。

（3）當(dāng)不斷增加PE10即苯氧乙醇的量時(shí)，3#、4#樣品對(duì)細(xì)菌的抑制力不斷增強(qiáng)，對(duì)霉菌和酵母菌的抑制效果增加得更明顯，尤其是4#樣品對(duì)霉菌酵母菌抑制效力均與1#樣品相當(dāng)，對(duì)細(xì)菌的抑制更好一些。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)選取苯氧乙醇與乙基己基甘油的復(fù)配來(lái)代替含尼泊金酯類(lèi)、MIT的防腐體系，更符合化妝品防腐劑發(fā)展的方向，順應(yīng)市場(chǎng)的要求。產(chǎn)品無(wú)論在安全性還是防腐效果上都有提高，更加適合在兒童洗類(lèi)產(chǎn)品中應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)證明，PE10（0.3）+乙基己基甘油（0.06）、PE10（0.5）+乙基己基甘油（0.06）、PE10（0.7）+乙基己基甘油（0.06）防腐體系均通過(guò)挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用此種防腐體系的兒童洗類(lèi)產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)不容易受到微生物污染。綜合考慮其防腐效力及防腐劑盡可能量少的情況，認(rèn)為PE10（0.5）與乙基己基甘油（0.06）復(fù)配防腐體系為最佳。

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Preservative bacteriostasis effect and application of children cleaning products

Lin Zhu
（Tianjin University of Science & Technology Tianjin Yumeijing Group Company Limited， Tianjin， 300110）

This paper studied microbial challenge test and bacteriostatic effect evaluation of several anti-corrosion system in children wash products，and comprehensive security into consideration，finally select anti-corrosion effect is better，safety higher anti-corrosion system.

children cosmetics；preservative；microbial challenge testing

TQ658.8；TQ658.2

A

1672-2701（2016）06-81-04

林竹女士，工程師，項(xiàng)目經(jīng)理，主要從事化妝品配方研制及評(píng)價(jià)工作；E-mail：linzhuwork@126.com。