林 竹（天津科技大學(xué)，天津郁美凈集團(tuán)有限公司，天津，300110）

兒童洗類產(chǎn)品防腐劑抑菌效果及應(yīng)用

林 竹
（天津科技大學(xué)，天津郁美凈集團(tuán)有限公司，天津，300110）

利用微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)對(duì)幾種防腐體系在兒童洗類產(chǎn)品中的抑菌效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并綜合安全性等方面考慮，最后篩選出防腐效果好、安全性高的防腐體系。

兒童化妝品；防腐劑；微生物挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)

兒童的皮膚和頭發(fā)普遍屬于干性，需要一些富油脂、潤膚、無刺激的專用化妝品。他們的皮膚屏障功能很薄弱，水分很容易流失，這就需要一些富含天然成分、具有高保濕配方的清潔、滋潤產(chǎn)品。然而這些高水分、高營養(yǎng)的化妝品特別適合微生物的生長。那么如何有效地構(gòu)建兒童化妝品里防腐體系［1-2］，使其有足夠的防腐效力，又能避免其因使用防腐劑而造成皮膚接觸性過敏是要解決的一道難題。在評(píng)價(jià)防腐劑的實(shí)際效果中， 應(yīng)用最為廣泛和經(jīng)典的研究手段是微生物挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)（microb ialchallenge testing）［3-6］。近年來，以微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)作為測試和評(píng)價(jià)化妝品的防腐效能也已逐步被國內(nèi)外化妝品生產(chǎn)企業(yè)接受和推行［7］。本文主要是利用微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)對(duì)4種防腐體系進(jìn)行抑菌功效測試和評(píng)價(jià)，篩選出防腐效果好、安全性高的防腐體系。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 樣品材料與培養(yǎng)基

防腐劑：PE10，PE202，乙基己基甘油均由北京桑普生物化學(xué)技術(shù)有限公司提供。

兒童沐浴液：研發(fā)實(shí)驗(yàn)室自制，不含其他防腐劑。

霉菌培養(yǎng)基：察氏培養(yǎng)基，115℃高壓滅菌30min后制成斜面?zhèn)溆谩?/p>

細(xì)菌培養(yǎng)基：卵磷脂吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌20min后制成斜面?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)菌種

1.2.1 細(xì)菌

金黃色葡萄球菌：（Staphylococcus aureus）ATCC 6538；大腸埃希氏菌：（Escherichia coli）ATCC 8739；銅綠假單胞菌：（Pseudomonas. aeruginosa）ATCC 9027；

1.2.2 霉菌與酵母菌

黑曲霉：（Aspergillus niger）ATCC 16404；白假絲酵母（Candida albicans）ATCC 10231。

設(shè)備維修保養(yǎng)工作的好壞，對(duì)設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)有著重要的影響，如透平油的處理，潤滑油的加注，設(shè)備輪換運(yùn)行，甚至設(shè)備吹灰等清潔工作，每一項(xiàng)都不應(yīng)該忽視。我廠的調(diào)速器為進(jìn)口產(chǎn)品，對(duì)油質(zhì)要求相當(dāng)高，因此采取現(xiàn)場循環(huán)濾油，故障率比以前明顯減少，大大提高了設(shè)備的可靠性，延長了設(shè)備的壽命周期。對(duì)設(shè)備存在的缺陷應(yīng)及時(shí)消除處理，做到大缺陷不過天，小缺陷不過班，確保設(shè)備處于健康運(yùn)行狀態(tài)。對(duì)設(shè)備進(jìn)行較全面的狀態(tài)監(jiān)督和技術(shù)分析，掌握設(shè)備的實(shí)際運(yùn)行情況，廢除一些不必要的檢修項(xiàng)目，從而可以節(jié)省大量的檢修工期。

上述菌株均由中科院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)微生物菌種庫提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)用菌液的配制

實(shí)驗(yàn)前將各個(gè)菌株分別接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基斜面，細(xì)菌（金黃色葡萄球菌，大腸埃希氏菌，銅綠假單胞菌）均于（36±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36～48h。分別挑取適量菌落于無菌生理鹽水中混勻，制成一定濃度的混合菌懸液?；旌霞?xì)菌懸液總濃度約為1.0×108cfu/mL。置于4℃貯存?zhèn)溆?。霉菌于?7±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)120h。酵母菌（27±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，挑取適量霉菌和酵母菌菌落于無菌生理鹽水中混合均勻，制成一定濃度的混合菌懸液。混合霉菌和酵母菌孢子懸液總濃度約為1.0×107cfu/mL，置于4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

采用一次加菌的28天微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，該方法參照美國藥典上微生物挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)檢測防腐劑效果的方法。稱取測試樣品（化妝品）100g，裝入適量塑料瓶內(nèi)，分別加入適量的混合菌懸液，使每克受檢膏霜最終含細(xì)菌量為1.0×106～5.0×106CFU/g，霉菌酵母菌量為1.0×105～5.0×105CFU/g充分混勻，分別置于（36±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在接種0 、3、7、14、21和28天分別取樣進(jìn)行菌量分析。

1.5 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［7］

初始接種量細(xì)菌106～107cfu/g （mL），霉菌105～106cfu/g（mL）：①第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌＞103cfu/g（mL），該樣品不能通過微生物攻擊的挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，表明樣品的防腐體系不能起到有效抑制微生物的作用，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用中很容易受到微生物的污染。②第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌在102～103cfu/g（mL），該樣品有條件地通過挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，即當(dāng)產(chǎn)品中蛋白質(zhì)或其他動(dòng)植物材料成分不是特別高，同時(shí)生產(chǎn)的衛(wèi)生環(huán)境符合要求，包裝物不易發(fā)生二次污染時(shí)，該防霉體系可以使用，否則不能。③第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌在10～102cfu/g（mL），表明該樣品的防腐體系對(duì)微生物有較強(qiáng)的抑殺效果，通過挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)不容易受到微生物污染。④從第7天起，樣品中的細(xì)菌或霉菌＜10 cfu/g （mL），說明該樣品的防腐體系對(duì)微生物有特強(qiáng)的抑殺作用，通過挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)很不容易被微生物污染。

2 防腐劑體系

1#為桑普PE202產(chǎn)品，其主要組分為苯氧乙醇、羥苯甲酯、羥苯丙酯、甲基異噻唑啉酮。其性質(zhì)溫和，安全性好，廣譜抑菌，正常使用濃度下對(duì)皮膚、眼睛、粘膜無刺激、無過敏。但其中含有羥苯甲酯、羥苯丙酯、甲基異噻唑啉酮等成分，不符合化妝品發(fā)展趨勢(shì)，故選擇PE10和乙基己基甘油復(fù)配的組合方式進(jìn)行防腐功效測試。PE10主要成分為苯氧乙醇，與乙基己基甘油，二者復(fù)配除具有PE202的優(yōu)點(diǎn)外，更安全，更溫和，并不含尼泊、MIT，是兒童護(hù)膚品的理想選擇。各防腐劑組合見表1。

2.2 配方中選用防腐劑的毒理數(shù)據(jù)

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)：苯氧乙醇 LD50＞2000 mg/kg（大鼠）；羥苯甲酯LD50=5000mg/kg（小鼠）；羥苯丙酯 LD50=8000mg/kg（小鼠）；甲基異噻唑啉酮 LD50=183mg/kg（雌），235mg/kg（雄）（大鼠）。

急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)：苯氧乙醇 LD50=14422 mg/kg（家兔）；在正常使用濃度下，對(duì)皮膚及眼睛無刺激、無過敏。

3 結(jié)果與討論

3.1 微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4個(gè)防腐體系微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)見表2。

3.2 結(jié)果分析

表1 所用防腐體系

表2 微生物挑戰(zhàn)

（1）第28天時(shí)，各個(gè)樣品中細(xì)菌、霉菌和酵母菌的含量均＜10cfu/g（mL），表明這4種防腐體系對(duì)微生物均有較強(qiáng)的抑殺效果，通過挑戰(zhàn)試驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)不容易受到微生物污染。

（2）2#樣品通過挑戰(zhàn)試驗(yàn)。同時(shí)，2#跟1#相比，在第14天時(shí)細(xì)菌菌落總數(shù)更低， 說明2#樣品的防腐體系與1#樣品對(duì)細(xì)菌的抑制力相當(dāng)，但抑制霉菌酵母菌的能力稍差。

（3）當(dāng)不斷增加PE10即苯氧乙醇的量時(shí)，3#、4#樣品對(duì)細(xì)菌的抑制力不斷增強(qiáng)，對(duì)霉菌和酵母菌的抑制效果增加得更明顯，尤其是4#樣品對(duì)霉菌酵母菌抑制效力均與1#樣品相當(dāng)，對(duì)細(xì)菌的抑制更好一些。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)選取苯氧乙醇與乙基己基甘油的復(fù)配來代替含尼泊金酯類、MIT的防腐體系，更符合化妝品防腐劑發(fā)展的方向，順應(yīng)市場的要求。產(chǎn)品無論在安全性還是防腐效果上都有提高，更加適合在兒童洗類產(chǎn)品中應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)證明，PE10（0.3）+乙基己基甘油（0.06）、PE10（0.5）+乙基己基甘油（0.06）、PE10（0.7）+乙基己基甘油（0.06）防腐體系均通過挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用此種防腐體系的兒童洗類產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)不容易受到微生物污染。綜合考慮其防腐效力及防腐劑盡可能量少的情況，認(rèn)為PE10（0.5）與乙基己基甘油（0.06）復(fù)配防腐體系為最佳。

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Preservative bacteriostasis effect and application of children cleaning products

Lin Zhu
（Tianjin University of Science & Technology Tianjin Yumeijing Group Company Limited， Tianjin， 300110）

This paper studied microbial challenge test and bacteriostatic effect evaluation of several anti-corrosion system in children wash products，and comprehensive security into consideration，finally select anti-corrosion effect is better，safety higher anti-corrosion system.

children cosmetics；preservative；microbial challenge testing

TQ658.8；TQ658.2

A

1672-2701（2016）06-81-04

林竹女士，工程師，項(xiàng)目經(jīng)理，主要從事化妝品配方研制及評(píng)價(jià)工作；E-mail：linzhuwork@126.com。