王玉樓　張英艷　孫玉琢　溫秋婷

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外科，黑龍江　齊齊哈爾　161041)

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乳腺癌患者組織中EphA4和Ki67的表達(dá)及其臨床意義

王玉樓張英艷1孫玉琢溫秋婷2

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外科，黑龍江齊齊哈爾161041)

〔摘要〕目的探討乳腺癌患者組織中受體酪氨酸激酶肝細(xì)胞(Eph)A4和細(xì)胞增殖抗原Ki67的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法選取該院2012年1月至2015年6收治的乳腺癌患者108例，應(yīng)用免疫組化法檢測乳腺癌組織中EphA4和Ki67水平，并分析其與臨床病理的關(guān)系，應(yīng)用Pearson相關(guān)性分析EphA4和Ki67的相關(guān)性。結(jié)果乳腺癌組織中EphA4總陽性表達(dá)率、Ki67總陽性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織(P<0.05)；EphA4和Ki67均與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期有關(guān)(P<0.05)，Pearson相關(guān)性分析顯示：EphA4與Ki67呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論乳腺癌患者組織中會出現(xiàn)EphA4和Ki67高表達(dá)，且EphA4和Ki67與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期有關(guān)，兩者之間也存在正相關(guān)關(guān)系。

〔關(guān)鍵詞〕乳腺癌；受體酪氨酸激酶EphA4；細(xì)胞增殖抗原Ki67；病理特征

乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，有研究顯示，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與異常細(xì)胞增殖存在較大關(guān)系，細(xì)胞增殖抗原Ki67與細(xì)胞增殖存在較大關(guān)系，已經(jīng)被用來評估多種腫瘤細(xì)胞的增長情況〔1〕。受體酪氨酸激酶肝細(xì)胞(Eph)A4是促紅細(xì)胞生成素Eph的受體之一，可以用來評估神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育情況，近年來EphA4也用來評估腫瘤的發(fā)生和發(fā)展情況〔2〕。本研究探討乳腺癌患者組織中EphA4和Ki67的表達(dá)情況及其與臨床病理的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料選取我院2012年1月至2015年6收治的乳腺癌患者108例，均經(jīng)手術(shù)治療，且經(jīng)病理確診為乳腺癌，入選前均未經(jīng)任何治療；排除繼發(fā)性乳腺癌、術(shù)前均未應(yīng)用放療、內(nèi)分泌及化療等治療、不接受手術(shù)治療者，年齡39～80〔平均(68.3±4.3)〕歲。根據(jù)TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期71例，Ⅲ～Ⅳ期37例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例。研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2方法選取入選者的乳腺癌病理及其癌旁正常組織，將其放置于10%的甲醛中固定，以常規(guī)的石蠟包埋，將其切成4 μm厚度切片待用。將切片常規(guī)脫蠟，然后以檸檬鹽高壓修復(fù)，0.3%雙氧水-甲醇封閉，以1∶400倍的EphA4和Ki67多克隆抗體于4℃環(huán)境中孵育一夜。以二抗在室溫環(huán)境下孵育0.5 h，然后進(jìn)行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色、核復(fù)染，應(yīng)用中性樹膠進(jìn)行封閉。所用試劑均由北京中杉生物技術(shù)公司提供，均根據(jù)操作說明由統(tǒng)一檢驗(yàn)師操作。

1.3結(jié)果評價(jià)分別于顯微鏡下選取5個(gè)高倍鏡視野，然后分別計(jì)約100個(gè)細(xì)胞，棕黃色表示陽性細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞占有的比例判斷結(jié)果。陰性：陽性細(xì)胞數(shù)<10%；弱陽性：陽性細(xì)胞數(shù)10%～25%；陽性：陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%；強(qiáng)陽性：陽性細(xì)胞數(shù)>50%〔3，4〕，總陽性=弱陽性+陽性+強(qiáng)陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)性分析。

2結(jié)果

2.1乳腺癌組織中EphA4和Ki67表達(dá)情況乳腺癌組織中EphA4弱陽性25例(23.15%)，陽性32例(29.63%)，強(qiáng)陽性27例(25.00%)，總陽性表達(dá)率77.78%；癌旁正常組織弱陽性5例(4.63%)，陽性2例(1.85%)，強(qiáng)陽性1例(0.93%)，總陽性表達(dá)率為7.41%，比較差異顯著(P<0.05)。乳腺癌組織中Ki67弱陽性10例(9.26%)，陽性29例(26.85%)，強(qiáng)陽性18例(16.67%)，總陽性表達(dá)率52.78%；癌旁組織弱陽性9例(8.33%)，無陽性和強(qiáng)陽性表達(dá)，總陽性表達(dá)率8.33%，比較差異顯著(P<0.05)。

2.2EphA4和Ki67表達(dá)與臨床病理關(guān)系EphA4和Ki67與年齡無關(guān)(P>0.05)；但EphA4和Ki67均與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期有關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1　EphA4和Ki67陽性表達(dá)與臨床病理關(guān)系〔n(%)〕

2.3EphA4與Ki67相關(guān)性分析EphA4水平隨著Ki67水平的增加而增加，且Pearson相關(guān)性分析顯示：EphA4與Ki67呈正相關(guān)(r=0.793，P=0.011)。

3討論

乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展與多種因素有關(guān)，其中多基因病變發(fā)揮重大作用〔5〕?；虺霈F(xiàn)異常會導(dǎo)致細(xì)胞增殖和分化異常，細(xì)胞凋亡會明顯降低，而凋亡又是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵，凋亡能夠抑制腫瘤細(xì)胞明顯增長，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖〔6〕。Ki67是可以識別增殖細(xì)胞核基質(zhì)上的核蛋白，該基因定位在10號染色體，主要作用是與細(xì)胞有絲分裂周期有關(guān)。Ki67抗原的半衰期非常短，當(dāng)有絲分裂晚期該抗原會較快消失，因此可以較好反映細(xì)胞增殖情況，判斷腫瘤細(xì)胞的生長活性〔7〕。

EphA4是Eph的一種，而Eph基因是現(xiàn)階段被人類發(fā)現(xiàn)最大的受體酪氨酸激酶，與神經(jīng)、血管以及多種組織的形成存在較大關(guān)系。據(jù)研究，該基因可以于多種腦組織中表達(dá)，且對神經(jīng)系統(tǒng)的多樣性具有維持作用〔8〕。也有研究顯示，EphA4可以與多種腫瘤發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，其中EphA4高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)等有關(guān)〔9〕。但是，Ki67和EphA4表達(dá)異常是否與乳腺癌有關(guān)研究較少。本研究結(jié)果與其他研究結(jié)果相似〔10〕，說明乳腺癌組織中確實(shí)存在Ki67和EphA4表達(dá)異常。且EphA4和Ki67表達(dá)異常會影響乳腺癌腫瘤發(fā)展，與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期均有關(guān)系。分析其原因可能為：Ki67對維持DNA結(jié)構(gòu)具有重要作用，在細(xì)胞有絲分裂中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)高低可以在一定程度上反映細(xì)胞的增殖情況，當(dāng)Ki67高表達(dá)時(shí)說明腫瘤細(xì)胞處于活躍增殖狀態(tài)，腫瘤細(xì)胞增生活躍期轉(zhuǎn)移能力也會明顯增加，臨床分期也會因此受到影響。EphA4會在腫瘤組織中高表達(dá)，基因啟動子會出現(xiàn)改變，進(jìn)而導(dǎo)致基因突變，染色體的片段出現(xiàn)缺失。當(dāng)EphA4表達(dá)較高，基因突變明顯，腫瘤細(xì)胞增殖不受控制，也會出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，引起臨床分期改變。研究還說明在乳腺癌組織中EphA4與Ki67相互間存在一定影響，但是具體原因尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

4參考文獻(xiàn)

1魏昕，楊舉倫.乳腺癌組織中ERCC1、Ki67、PCNA表達(dá)與蒽環(huán)類化療藥物敏感性的關(guān)系〔J〕.中國免疫學(xué)雜志，2015；31(2)：169-72.

2張彥，陸偉.Ki67在HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌病理組織中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.天津醫(yī)藥，2015；43(8)：929-31.

3孫宇，孫寧，楊紹時(shí)，等.MMP-9和Ki67在胰腺癌中表達(dá)的意義〔J〕.天津醫(yī)藥，2014；42(1)：44-6.

4何建明，黃偉，黃湛，等.ABCG2表達(dá)與浸潤性乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2015；35(12)：3244-6.

5劉輝，呂麗瓊，莫小勤，等.MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015；15(16)：3046-8，3200.

6Hameetman L，van der Fits L，Zoutman WH，etal.EPHA4 is overexpressed but not functionally active in Sézary syndrome〔J〕.Oncotarget，2015；6(31)：31868-76.

7王斌，熊健，只向成，等.CD44+/CD24-細(xì)胞在乳腺癌組織中比例與乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移關(guān)系〔J〕.中國腫瘤臨床，2015；42(11)：555-8.

8李思琦，董穎，畢蕙，等.年輕婦女宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ～Ⅱ級組織中p16InK4a和Ki67的表達(dá)及意義〔J〕.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2014；30(4)：263-5.

9沈三弟，陳卓榮，肖高芳，等.Ki67、Her-2在Luminal型乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性研究〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2013；42(16)：1820-1，1823.

10黃華俊，王玲，韓芳，等.ER、PR及Ki67在乳腺癌新輔助化療中的意義及預(yù)后相關(guān)因素分析〔J〕.河北醫(yī)藥，2015；37(12)：1782-4.

〔2015-12-10修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

基金項(xiàng)目：黑龍江省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目(No.12541935)

通訊作者：溫秋婷(1978-)，女，碩士，講師，主要從事女性生殖系統(tǒng)和乳腺疾病病理方面的研究。

〔中圖分類號〕R73

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)13-3197-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.13.049

1齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院2齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理學(xué)院

第一作者：王玉樓(1973-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事肝膽、乳腺疾病方面的研究。