劉晶晶　武　懿　王衛(wèi)正

(武警北京市總隊(duì)第二醫(yī)院麻醉科，北京　100037)

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右美托咪定對膿毒血癥大鼠急性腎損傷的作用

劉晶晶武懿1王衛(wèi)正

(武警北京市總隊(duì)第二醫(yī)院麻醉科，北京100037)

〔摘要〕目的探討右美托咪定(DEX)對膿毒血癥大鼠急性腎損傷(AKI)的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法選擇40只SPF級成年雄性SD大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、DEX組和育亨賓組，每組10只。其中，模型組通過尾靜脈注射5 mg/kg的脂多糖建立膿毒血癥AKI模型，假手術(shù)組尾靜脈注射等量的生理鹽水，DEX組于造模前10 min尾靜脈注射10 μg/kg DEX，育亨賓組在DEX組基礎(chǔ)上前30 min腹腔注射1 mg/kg育亨賓。光鏡下對各組大鼠的腎組織病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察，并分別采用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)、黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥美法檢測血清和腎組織中的白細(xì)胞介素(IL)-1β、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。結(jié)果模型組腎組織呈現(xiàn)明顯的炎癥性損傷，DEX預(yù)處理組損傷較模型組顯著減輕，而育亨賓組較DEX預(yù)處理組進(jìn)一步加重；模型組較假手術(shù)組IL-1β和MDA水平明顯升高、SOD水平明顯降低；而DEX預(yù)處理可明顯降低AKI大鼠的IL-1β和MDA水平，提高SOD水平(P<0.05)。結(jié)論DEX預(yù)處理可減輕膿毒血癥AKI大鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激損傷，從而發(fā)揮腎臟保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與α2受體有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕膿毒血癥；急性腎損傷；右美托咪定；炎癥反應(yīng)；氧化應(yīng)激；α2受體

膿毒血癥往往累及多種器官和系統(tǒng)，調(diào)查統(tǒng)計(jì)，重癥監(jiān)護(hù)的膿毒血癥患者中急性腎損傷(AKI)的發(fā)生率高達(dá)35%～65%〔1〕。右美托咪定(DEX)是一種高選擇性的α受體激動劑，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等功效。本研究旨在研究DEX對膿毒血癥AKI的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物選擇40只成年雄性SD大鼠(SPF級)，體質(zhì)量220～250 g(購自北京實(shí)驗(yàn)動物研究中心)。于動物實(shí)驗(yàn)室自由飲食喂養(yǎng)，室溫為(22.0±3.0)℃，自然光照。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑脂多糖(10 mg，美國Sigma公司)，鹽酸DEX注射液(200 μg/ml，江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司)，育亨賓(100 mg，上海樊克生物科技有限公司)，白細(xì)胞介素(IL)-1β試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1動物分組與模型制備將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、DEX組和育亨賓組各10只。除假手術(shù)組外，其他三組大鼠均建立大鼠膿毒血癥AKI模型。具體造模方法：禁食12 h后(自由飲水)，10%的水合氯醛麻醉大鼠，仰臥固定于變溫毯上，保持體溫(36.0±0.2)℃，由尾靜脈注射劑量為5 mg/kg的脂多糖溶液。

1.3.2處理方法假手術(shù)組大鼠于麻醉后尾靜脈注射與模型組等體積的生理鹽水，DEX預(yù)處理組大鼠于造模前10 min尾靜脈注射10 μg/kg DEX，育亨賓組大鼠在DEX的基礎(chǔ)上前30 min腹腔注射1 mg/kg育亨賓。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1腎臟組織病理學(xué)觀察4 h后解剖大鼠腹腔，摘除雙側(cè)腎臟組織，將右側(cè)腎臟置于-80℃凍存，手術(shù)剪分離部分左腎組織制作病理切片。方法為：以磷酸鹽緩沖液(PBS)緩沖液沖洗干凈后，經(jīng)10%的甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋和切片(厚度約4 μm)，采用蘇木素-伊紅(HE)染色，并于光鏡下觀察腎臟組織的病理形態(tài)學(xué)變化。

1.4.2血清和腎組織中IL-1β的檢測心臟采血5 ml，4℃ 3 000 r/min離心10 min，取上清，儲存于-80℃冰箱中；取右側(cè)腎組織加預(yù)冷的生理鹽水制成10%的組織勻漿，4℃ 4 000 r/min離心15 min后，取上清液。利用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)試劑盒進(jìn)行檢測，操作嚴(yán)格遵照說明書要求。

1.4.3血清和腎組織中MDA、SOD的檢測分別采用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥美法檢測血清和腎臟組織中SOD和MDA的含量，操作過程嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1腎臟組織病理學(xué)觀察顯微鏡下顯示，假手術(shù)組腎組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小管、腎間質(zhì)未見水腫及炎癥細(xì)胞浸潤；模型組大鼠腎組織呈現(xiàn)顯著的炎癥性病理改變，腎小球體積增大，間質(zhì)內(nèi)見大量炎癥細(xì)胞浸潤和散在出血點(diǎn)，腎小管管腔狹窄、上皮細(xì)胞腫脹變性；DEX組病理性損傷有所改善，上皮細(xì)胞水腫及間質(zhì)內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤較模型組明顯減輕；育亨賓組大鼠病理損傷較DEX組加重。

2.2四組大鼠血清和腎組織中IL-1β、MDA、SOD水平比較模型組血清和腎組織中的IL-1β水平顯著高于假手術(shù)組，DEX組較模型組顯著降低，而育亨賓組較DEX組顯著升高(P<0.05)。模型組與假手術(shù)組相比MDA水平明顯升高、SOD水平明顯降低；而DEX組與模型組相比MDA顯著降低、SOD水平顯著升高；育亨賓組與DEX組相比MDA水平顯著升高、SOD水平顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1　四組大鼠血清和腎組織中IL-1、MDA、SOD水平比較

與假手術(shù)組相比：1)P<0.05；與模型組相比：2)P<0.05；與DEX組相比：3)P<0.05

3討論

膿毒血癥是重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)患者致死的首要疾病之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年膿毒血癥患者高達(dá)1 800多萬，且以1.5%的速度年增長；在我國膿毒血癥的發(fā)病率約為8.68%，且呈逐漸上升趨勢〔2〕。其發(fā)病機(jī)制尚未闡明，且往往引起多器官功能障礙，其中AKI就是膿毒血癥的主要并發(fā)癥之一，也是臨床常見的危急重癥。其發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜，主要涉及腎臟血流動力學(xué)改變、內(nèi)毒素和炎癥介質(zhì)損傷、缺血再灌注損傷、凝血和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、細(xì)胞凋亡等學(xué)說〔3〕。盡管臨床AKI的治療手段多樣，但其治療效果仍不理想，病死率居高不下。DEX是臨床常用的鎮(zhèn)靜類藥物，其可通過與α2腎上腺素能受體結(jié)合，達(dá)到抑制交感興奮、免疫調(diào)節(jié)、抗感染等作用，并通過這些途徑實(shí)現(xiàn)對各重要器官的保護(hù)作用〔4〕。本研究說明DEX預(yù)處理可對AKI產(chǎn)生保護(hù)作用，而這一保護(hù)作用可被特異性DEX受體拮抗劑育亨賓所抵消，提示DEX的保護(hù)作用可能與α2受體有關(guān)。IL-1β是由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種炎癥性細(xì)胞因子，其在體內(nèi)的抗感染作用中發(fā)揮重要作用，可間接反映機(jī)體內(nèi)炎癥的嚴(yán)重程度〔5〕； MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，是系統(tǒng)受氧化應(yīng)激損傷的重要標(biāo)志物之一，可間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度；SOD是動植物體內(nèi)的一種抗氧化酶，在清除自由基等氧化產(chǎn)物中發(fā)揮重要作用〔6〕。本研究結(jié)果說明AKI大鼠體內(nèi)炎性反應(yīng)和氧化損傷加重，從而導(dǎo)致了腎臟結(jié)構(gòu)和功能的損傷；而DEX預(yù)處理可明顯降低AKI的炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激損傷，增強(qiáng)其抗氧化能力，從而發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。此外研究還發(fā)現(xiàn)，育亨賓抵消了DEX預(yù)處理的保護(hù)作用，說明α2受體拮抗劑可對DEX的腎臟保護(hù)功能產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)，提示DEX可能通過與α2受體結(jié)合產(chǎn)生抗感染、抗氧化而發(fā)揮保護(hù)作用。對于其具體作用機(jī)制，有研究認(rèn)為與α2受體對JAK/STAT、TLR-4/NF-κB/MAPKs等多種信號通路的抑制作用有關(guān)〔7〕，仍有待進(jìn)一步探索。

4參考文獻(xiàn)

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〔2015-12-21修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：武懿(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事臨床麻醉及藥理學(xué)研究。

〔中圖分類號〕R5

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)13-3147-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.13.023

1河北大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科

第一作者：劉晶晶(1981-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事臨床麻醉及藥理學(xué)研究。