梁　萍　彭建彪　龍　凱

云南省紅河州食品藥品檢驗(yàn)所，云南　蒙自　661199

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HPLC法測(cè)定逍遙散中芍藥苷的含量

梁萍彭建彪龍凱

云南省紅河州食品藥品檢驗(yàn)所，云南蒙自661199

【摘要】目的：建立逍遙散中芍藥苷的測(cè)定方法。方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Durashell C18柱；250×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(16∶84)；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流速:1.0ml/min；柱溫：30℃。結(jié)果：芍藥苷在0.0423～0.4234μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r=0.9996,平均回收率為99.95%(RSD=1.73%，n=6)。結(jié)論：本方法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性良好，可用于逍遙散的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】逍遙散；含量測(cè)定；芍藥苷；HPLC

逍遙散為云南省個(gè)舊市中醫(yī)院制劑，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為滇ZJGF/2005-721.逍遙散由柴胡、當(dāng)歸、白芍、薄荷等七味藥制備而成，具有疏肝解郁、健脾和胃的功效。處方中白芍為方中主藥，白芍的主要活性成分為芍藥苷，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未測(cè)定芍藥苷不夠全面，為保證該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，研究采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)處方中白芍主要活性成分芍藥苷進(jìn)行定量研究。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1260型高效液相色譜儀；Sartorius BP211D電子天平，奧豪斯AR224CN電子天平。

1.2試藥芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736-201438，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；逍遙散(批號(hào)：20150814、20151013、20151108、20151215，云南省個(gè)舊市中醫(yī)院)。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純；

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Durashell C18 (4.6×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(16∶84)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)[1]：230nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加甲醇制成每1ml含芍藥苷40μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備[1]取本品約0.3g，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml,超聲處理(功率240W，頻率45KHz)30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性樣品溶液的制備取缺白芍的陰性樣品0.3g，按“2.3”項(xiàng)供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.5專屬性試驗(yàn)分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果供試品色譜中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性樣品在與芍藥苷對(duì)照品相同的保留時(shí)間處未顯色譜峰，可見其他原輔料對(duì)主成分無(wú)干擾。(見圖1)。

2.6線性關(guān)系考察分別精密吸取2.2中對(duì)照品溶液(每1ml含芍藥苷42.3389μg)1、2、4、8、10μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以芍藥苷峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)作線性回歸，結(jié)果峰面積Y與其進(jìn)樣量X(μg)之間呈良好的線性關(guān)系，芍藥苷的線性范圍為：0.0423～0.4234μg，回歸方程為：Y=1265.48236X-8.172520，r=9996。2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一逍遙散供試品溶液按上述色譜條件分別在0、1、2、4、8、12h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得芍藥苷峰面積分別為472.49792、476.46701、476.68494、476.56143、475.38214、477.20706，RSD為0.37%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。2.8精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)得芍藥苷峰面積分別為：537.34906、537.89551、538.09821、538.14862、538.51733、527.16009，RSD為0.83%，結(jié)果表明精密度良好。

2.9重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)20150814)樣品，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定，芍藥苷的平均含量為6.2130mg/g，RSD為0.76%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.10回收率試驗(yàn)精密稱取6份供試品(批號(hào)：20150814，已測(cè)芍藥苷含量為6.2130mg/g)，每份約0.15g，按1∶1比例加入芍藥苷對(duì)照品，即加入芍藥苷對(duì)照品溶液(芍藥苷濃度0.2117mg/ml)4.5ml，揮去溶劑。然后按供試品溶液處理方法同法處理，將處理好的供試品溶液按含量測(cè)定方法同法測(cè)定，計(jì)算回收率，芍藥苷的平均回收率為99.95%，RSD為1.73%。結(jié)果見表1。

2.11樣品含量測(cè)定取4批逍遙散樣品，按供試品溶液的制備方法操作，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表1　芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果　(n=6)

表2　芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果　(n=4)

3討論

3.1芍藥苷[2]具有擴(kuò)張血管、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、抗炎抗?jié)儭⒔鉄峤獐d、利尿的作用。芍藥苷是處方中主藥白芍的主要活性成分，且其含量也相對(duì)較高，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未測(cè)定芍藥苷不夠全面，通過試驗(yàn)用HPLC法測(cè)定逍遙散中芍藥苷的含量。

3.2方中白芍直接粉碎入藥，參照2015年版《中國(guó)藥典》一部白芍含量測(cè)定項(xiàng) 下的提取方法，用稀乙醇超聲30min提取白芍中芍藥苷較為完全 。

3.3經(jīng)試驗(yàn)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液(16∶84)，流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm，測(cè)得結(jié)果比較理想。本法專屬性強(qiáng)，操作方便，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性良好，可以用于逍遙散的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：105.

[2]吳春福.芍藥及其化學(xué)成分的藥理學(xué)研究概況[J].中藥通報(bào)，1985,10(6)：43-46.

【中圖分類號(hào)】R286.0

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)11-0017-02

(收稿日期：2016.04.08)

Content Determination of Paeoniflorin in Xiaoyao Powder by HPLC

LIING PingPENG Jian BiaoLONG Kai

HongHe Prefeture institute for food and drug control, Yunnan Mengzi 661199,China

Abstract:Objective To establish a method for determination of paeoniflorin in Xiaoyao Powder. Method Eighteen using C18 column chromatography (Durashell C18 column；250×4.6mm，5μm)；The mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric acid solution (16∶84)；Detection wavelength: 230nm；Flow rate: 1.0ml/min；column temperature：30℃.Result Paeoniflorin in 0.0423μg ～ 0.4234μg range showed a good linear relationship(r=0.9996)，The average recovery was 99.95% (RSD=1.73%, n=6).Conclusion The method has strong specificity and high accuracy,Good reproducibility, can be used for the quality control of Xiaoyao Powder.

Key words:Xiaoyao Powder;Determination; Paeoniflorin; HPLC