陳　超，姚莉敏

(1.信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000；2.信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院，河南信陽(yáng) 464000)

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胃癌中β-catenin、ki-67和Her-2/Neu表達(dá)及對(duì)胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的影響

陳超1，姚莉敏2

(1.信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000；2.信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院，河南信陽(yáng) 464000)

[摘要]目的探討β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、增殖細(xì)胞核抗原ki-67和人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)/Neu在不同胃癌病理特征中的表達(dá)差異及在胃癌發(fā)生、發(fā)展和侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用。方法分別采用免疫組化檢測(cè)150份胃癌組織(觀察組)和70份正常胃黏膜(經(jīng)病理檢測(cè)無(wú)癌變作為對(duì)照組)中β-catenin、ki-67及Her-2/Neu的表達(dá)，分析β-catenin、ki-67及Her-2/Neu與胃癌病理特征的關(guān)系。結(jié)果觀察組患者β-catenin、ki-67、Her-2/Neu陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(χ2=30.51、63.74、11.38，P<0.01)；分化程度影響β-catenin、ki-67、Her-2/Neu表達(dá)(χ2=15.82、8.61、8.11，P<0.01)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響β-catenin、ki-67表達(dá)(χ2=6.26，P<0.05；χ2=7.36，P<0.01)；侵潤(rùn)深度影響β-catenin、ki-67表達(dá)(均χ2=11.34，P<0.01)； TMN影響ki-67、Her-2/Neu表達(dá)(χ2=10.85、14.24，P<0.01)；β-catenin和ki-67表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論β-catenin、ki-67和Her-2/Neu可反映腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的情況，有助于對(duì)患者預(yù)后的判斷。

[關(guān)鍵詞]β-連環(huán)蛋白；ki-67抗原；基因，erbB-2；胃腫瘤

胃癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，全球每年新增病例約100萬(wàn)，將近40%病例發(fā)生在中國(guó)。侵襲和轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的主要因素，是導(dǎo)致患者死亡重要原因。多種胃癌的標(biāo)志物與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。ki-67是一種與細(xì)胞增殖特異相關(guān)的核抗原，主要用于判斷癌細(xì)胞增殖活性。人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)/Neu是一個(gè)跨膜受體，其表達(dá)和活性與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[1]。本研究采用免疫組化檢測(cè)β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、增殖細(xì)胞核抗原ki-67和Her-2/Neu在正常胃黏膜與胃癌組織中的表達(dá)，分析β-catenin、ki-67和Her-2/Neu與胃癌病理特征的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料選取本院2011～2013年實(shí)施手術(shù)切除并有完整隨訪資料的150例胃癌患者的存檔石蠟塊作為觀察組，另取胃鏡檢查經(jīng)病理證實(shí)無(wú)癌變的新鮮正常胃黏膜組織70份作為對(duì)照組。觀察組：男101例，女49例；年齡35～75歲，平均(58.22±11.35)歲；黏液腺癌60例，管狀腺癌42例，印戒細(xì)胞癌48例。對(duì)照組：男55例，女15例；年齡36～77歲，平均(57.34±10.86)歲。兩組患者在性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要儀器和試劑LEICA RM2135切片機(jī)購(gòu)自德國(guó)徠卡儀器有限公司；生物醫(yī)學(xué)微波爐購(gòu)自上海醫(yī)療器械廠；顯微鏡CX-40購(gòu)自日本Olympus公司；4 ℃冰箱購(gòu)自海爾冰箱廠；JD801形態(tài)學(xué)圖像分析儀購(gòu)自江蘇省捷達(dá)科技發(fā)展有限公司；Nikon eclipse E800光學(xué)顯微鏡、酶標(biāo)儀購(gòu)自日本Nikon公司；鼠抗人β-catenin單克隆抗體、兔抗人ki-67多克隆抗體、兔抗人Her-2/Neu多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；SP免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2免疫組化方法石蠟塊連續(xù)切片，每片2.5 μm，60 ℃烤片過(guò)夜，二甲苯脫蠟2次，梯度乙醇復(fù)水，3%的過(guò)氧化氫溶液浸泡切20 min，檸檬酸鹽修復(fù)液高壓抗原修復(fù)，血清封閉組織45 min，ki-67(1∶100)、β-catenin(1∶50)和Her-2/Neu(1∶100)一抗孵育過(guò)夜，二抗孵育30 min，滴加有辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素液體孵育30 min，DAB顯色，蘇木素染液復(fù)染，封片觀察。β-catenin、ki-67和Her-2/Neu免疫組化染色陽(yáng)性表達(dá)，見(jiàn)圖1。

A:β-catenin；B:ki-67;C:Her-2/Neu。

圖1β-catenin、ki-67和Her-2/Neu 免疫組化(SP×400)

1.2.3評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[2]的標(biāo)準(zhǔn)，β-catenin陽(yáng)性染色為細(xì)胞膜呈現(xiàn)棕褐色細(xì)小顆粒狀著色，ki-67陽(yáng)性染色為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，Her-2/Neu陽(yáng)性染色為細(xì)胞膜棕黃色染色。判斷標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性細(xì)胞打分+染色強(qiáng)度打分，0分為“-”，1～2分為“+”，3～4分為“++”，5～6分為“+++”。光鏡下計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，0～10%為0分，>10%～<50%為1分，50%～<75%為2分，75%～100%為3分；染色強(qiáng)度，無(wú)染色0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)分析指標(biāo)之間的相關(guān)性。以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組患者β-catenin、ki-67 和Her-2/Neu陽(yáng)性率比較觀察組β-catenin、ki-67、Her-2/Neu陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(χ2=30.51、63.74、11.38，P<0.01)。兩組患者β-catenin、ki-67等陽(yáng)性率比較見(jiàn)表1；觀察組患者中β-catenin、ki-67、Her-2/Neu陽(yáng)性率分布見(jiàn)表2。

2.2觀察組患者β-catenin、ki-67及Her-2/Neu與胃癌病理特征的關(guān)系不同性別、年齡和瘤體大小患者的β-catenin、ki-67及Her-2/Neu比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；不同分化程度患者β-catenin、ki-67、Her-2/Neu比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.82、8.61、8.11，P<0.01)；有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者β-catenin和ki-67比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.26、P<0.05，χ2=7.36，P<0.01)；不同侵潤(rùn)深度患者β-catenin和ki-67比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.34，P<0.01)；不同TMN分期患者ki-67和Her-2/Neu比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.85、14.24，P<0.01)，見(jiàn)表3。

表1　　兩組患者β-catenin,ki-67等陽(yáng)性細(xì)胞比較[n(%)]

表2　　觀察組患者β-catenin、ki-67等陽(yáng)性細(xì)胞分布[n(%),n=150]

表3　　觀察組患者β-catenin、ki-67及Her-2/Neu與胃癌病理特征的關(guān)系[n(%),n=150]

2.3β-catenin、ki-67和Her-2/Ne相關(guān)性分析β-catenin和ki-67同時(shí)陽(yáng)性患者為105例(70.00%)，同時(shí)陰性患者20例(13.33%)；通過(guò)2×2配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析，發(fā)現(xiàn)Pearson列聯(lián)系數(shù)r=0.501(P<0.01)，Pearsonχ2=40.511(P<0.01)；β-catenin和ki-67呈正相關(guān)，具有良好的一致性。β-catenin和Her-2/Neu同時(shí)陽(yáng)性患者為3例，同時(shí)陰性患者3例；通過(guò)2×2配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析，發(fā)現(xiàn)Pearson列聯(lián)系數(shù)r=0.211(P>0.05)，Pearsonχ2=3.21(P>0.05)；β-catenin和Her-2/Neu無(wú)相關(guān)性，見(jiàn)表4、5。

表4　　觀察組β-catenin和ki-67關(guān)聯(lián)分析

表5　　觀察組β-catenin和Her-2/Neu關(guān)聯(lián)分析

3討論

胃癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，在所有惡性腫瘤的病死率中高居第一或第二位，中國(guó)每年死于胃癌的人數(shù)約16萬(wàn)人。胃癌是一種具有高度侵襲特性的惡性腫瘤，其轉(zhuǎn)移過(guò)程主要包括：腫瘤部位血管生成、黏附內(nèi)皮細(xì)胞和基膜、細(xì)胞外基質(zhì)和基膜、定位于繼發(fā)器官、腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成[3]。腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制一直是困擾醫(yī)學(xué)界的難題，尋找提示轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)記物、并建立行之有效的檢測(cè)方法和顯得尤為重要。如果僅僅依靠某些傳統(tǒng)的病理指標(biāo)來(lái)評(píng)估患者的預(yù)后，并不能充分滿足臨床的需要，因此篩選和胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)腫瘤因子具有重要的意義。

ki-67主要表達(dá)在增殖細(xì)胞的細(xì)胞核中，它能夠識(shí)別細(xì)胞周期中核抗原上的一個(gè)抗原決定簇，與細(xì)胞的合成代謝有關(guān)，能較客觀地反映腫瘤的性質(zhì)。ki-67與胃癌的相關(guān)性研究報(bào)道并不一致，有研究證實(shí)ki-67與腫瘤的分化程度、Lauren分型、淋巴轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)[4]，但另一項(xiàng)研究中認(rèn)為ki-67表達(dá)與腫瘤患者的年齡、性別、分期和預(yù)后等都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[5]。而在本研究中，不同分化程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度和TMN分期患者ki-67的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

Her-2/Neu是目前已知的60余種腫瘤基因之一，Her-2/Neu在正常情況下處于非激活狀態(tài)，Her-2/Neu受各種因素激活后，導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)序生長(zhǎng)，運(yùn)動(dòng)、浸潤(rùn)，轉(zhuǎn)移，可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤新生血管生成，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力[6]。一般只在胎兒時(shí)期表達(dá)，成年后只能在極少數(shù)組織中發(fā)現(xiàn)其低水平表達(dá)。胃癌中Her-2/Neu陽(yáng)性率各文獻(xiàn)報(bào)道為6%～43%[7]，在本研究中為16.67%。在乳腺癌和胃癌的細(xì)胞中雖然高表達(dá)了Her-2/Neu蛋白，但未見(jiàn)Her-2/Neu基因的擴(kuò)增，為此本文并未檢測(cè)Her-2/Neu基因的表達(dá)水平。本研究中TMN分期患Her-2/Neu的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

β-catenin是在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中的一種單鏈多肽，具有介導(dǎo)細(xì)胞黏附及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)雙重活性，參與Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及酪氨酸蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化和增生及癌癥的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要的功能[8-9]。有研究報(bào)道，在結(jié)腸癌中高表達(dá)β-catenin的癌細(xì)胞多集中于腫瘤邊緣浸潤(rùn)性較強(qiáng)部分[10-11]，這樣的表達(dá)模式有利于β-catenin參與癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的傳導(dǎo)，從而增加癌細(xì)胞的侵襲能力。本研究中分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和侵潤(rùn)深度均可影響β-catenin的表達(dá)，說(shuō)明β-catenin的異?？芍甘疚赴┘?xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

綜上所述，β-catenin、ki-67及Her-2/Neu可反映腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的情況，胃癌術(shù)后檢測(cè)β-catenin、ki-67及Her-2/Neu表達(dá)水平，可一定程度反映胃癌的生物學(xué)特征，為臨床治療提供指導(dǎo)。

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Expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neuin in gastric carcinoma and their influence on infiltration and metastasis of gastrie carcinoma

ChenChao1,YaoLimin2

(1.MedicalCollege,XinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang,Henan464000,China;2.AffiliatedHospitalofXinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang,Henan464000,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression differences of β-catenin,Her-2/Neu and ki-67 in different pathological features of gastric cancer and their role in the occurrence,progression,invasion and metastasis of gastric cancer invasion and metastasis.MethodsThe expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu in 150 gastric cancer tissue samples(observation group) and 70 normal gastric mucosal samples were detected by adopting the immunohistochemistry method,and the relationship between the expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu with the pathological features of gastric cancer was analyzed.ResultsThe β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu positive rate in the observation group was significantly higher than that in the control group (χ2=30.51,63.74,11.38,P<0.01);the differentiation degree affected the expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu expression (χ2=15.82,8.61,8.11,P<0.01)；the lymph node metastasis affected the expression of ki-67 and β-catenin (χ2=6.26,P<0.05;χ2=7.36,P<0.01);the invasion depth affected the expression of β-catenin and ki-67(χ2=11.34，P<0.01)；TMN affected the expression of ki-67 and Her-2/Neu(χ2=10.85,14.24,P<0.01)；the β-catenin and ki-67 expression showed positive correlation.Conclusionβ-catenin,ki-67 and Her-2/Neu may reflect the proliferation,invasion and metastasis situation of tumor cells and their detection conduces to the judgment of prognosis.

[Key words]β-catenin;ki-67 antigen;genes,erbB-2;stomach neoplasms

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.18.017

作者簡(jiǎn)介：陳超(1980-)，講師，在職碩士研究生，主要從事病理學(xué)研究。

[中圖分類號(hào)]R735.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)18-2504-03

(收稿日期：2015-12-01修回日期：2016-03-16)