蔣有讓，刁慶春，史丙俊，王櫻霖，徐可佳，馮　林

(重慶市中醫(yī)院/重慶市第一人民醫(yī)院皮膚科　400011)

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特應(yīng)性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究*

蔣有讓，刁慶春△，史丙俊▲，王櫻霖，徐可佳，馮林

(重慶市中醫(yī)院/重慶市第一人民醫(yī)院皮膚科400011)

[摘要]目的探討特應(yīng)性皮炎(AD)外周血清Th1/Th2/Th17平衡的變化規(guī)律及相關(guān)細(xì)胞因子的變化規(guī)律，以進(jìn)一步探討AD發(fā)病的免疫機(jī)制。方法采用流式熒光技術(shù)測定47例AD患者(AD組)和40例健康自愿者(對(duì)照組)外周血清中的γ-干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-17、IL-21、IL-23水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，從而分析Th1/Th2/Th17/Treg平衡在AD中變化規(guī)律。結(jié)果在AD患者血清中，IL-4水平較對(duì)照組升高(P<0.05)，IL-17、IL-23的水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-17較對(duì)照組明顯降低(P<0.01)；IL-17與AD嚴(yán)重程度(SCORAD)評(píng)分呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論在AD病程中Th1/Th2、Th1/Th17降低，Th1/Th2/Th17平衡的漂移可能是AD發(fā)病的重要機(jī)制。

[關(guān)鍵詞]特應(yīng)性皮炎；細(xì)胞因子類；Th1細(xì)胞；Th2細(xì)胞；Th17細(xì)胞；流式熒光技術(shù)

特應(yīng)性皮炎(Atopic dermatitis，AD)被認(rèn)為是一種復(fù)發(fā)性、瘙癢性、慢性炎癥性皮膚疾病，其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，特別是如何活化、維持活化功能紊亂的反應(yīng)性T細(xì)胞的機(jī)制尚不明確。當(dāng)抗原刺激的信號(hào)刺激初始CD4+T淋巴細(xì)胞后，相繼發(fā)現(xiàn)并且認(rèn)知了Th1、Th2、Th17等不同的CD4+T細(xì)胞亞群，不同的細(xì)胞亞群在體內(nèi)主要功能是在通過分泌不同的細(xì)胞因子來相互促進(jìn)、相互制約，進(jìn)而形成了一個(gè)CD4+T細(xì)胞為主的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，在各種炎癥性及自身免疫性疾病中扮演了重要作用。本課題使用流式熒光技術(shù)檢測AD外周血清中Th1、Th2、Th17特異性細(xì)胞因子來探索它們在AD的變化規(guī)律，以進(jìn)一步探討AD發(fā)病的免疫機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料選擇本院2012年10月至2013年3月在皮膚科門診就診并診斷為AD的患者47例(AD組)，其中男25例，女22例；年齡4～20歲，平均(9.09±4.53)歲，AD嚴(yán)重程度(SCORAD)評(píng)分24.1～91.1分，平均(54.61±16.32)分。選擇同期本院健康自愿者40例作為對(duì)照組，其中男21例，女19例；平均年齡(10.25±4.67)歲。兩組對(duì)象性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要試劑Human Th17 Magnetic Kit由美國Luminex公司生產(chǎn)。

1.2.2檢測方法(1)血清標(biāo)本的收集：兩組對(duì)象均抽取外周靜脈血5 mL留取血清，分裝凍存(凍存時(shí)間不超過6個(gè)月)，統(tǒng)一檢測；(2)操作步驟：按試劑說明書操作步驟在流式熒光儀上進(jìn)行細(xì)胞因子的檢測。

2結(jié)果

2.1兩組對(duì)象血清IL-4、IL-17、IL-23等水平比較AD組患者血清中IL-4水平較對(duì)照組升高(P<0.05)，IL-17、IL-23水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，AD組IL-21、IFN-γ的水平較對(duì)照組無明顯差異(P>0.05)，AD組IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-17水平明顯低于對(duì)照組(P<0.01)，見表1。

2.2AD組患者T細(xì)胞亞群相關(guān)細(xì)胞因子與SCORAD評(píng)分嚴(yán)重程度的相關(guān)性IL-17與AD呈正相關(guān)(P<0.01 )，IFN-γ、IL-4、IL-21、IL-23與SCORAD評(píng)分嚴(yán)重程度無明顯相關(guān)性(P>0.05)，見表2。

表1　　兩組對(duì)象各細(xì)胞因子水平比較

表2　　AD組患者各細(xì)胞因子與SCORAD評(píng)分的相關(guān)性

3討論

IFN-γ、IL-4分別是Th1、Th2細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子[1]，Th17最主要的效應(yīng)分子為IL-17A(即IL-17)，其次有IL-21和IL-23[2]。本實(shí)驗(yàn)檢測出IFN-γ無明顯變化，IL-4升高，且IFN-γ/IL-4明顯變化，提示Th1/Th2平衡的改變參與AD的病程。有學(xué)者在1986年首次提出了CD4+T細(xì)胞可分為Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞兩種獨(dú)立的各具有不同的特殊的細(xì)胞因子譜和生物學(xué)功能的細(xì)胞亞群，并且用之解釋獲得性免疫相關(guān)現(xiàn)象[3]。而AD就被認(rèn)為是經(jīng)典的Th1/Th2失衡類型的皮膚疾病，Th1、Th2細(xì)胞參與免疫主要是通過分泌不同的細(xì)胞因子，細(xì)胞因子間相互交叉調(diào)節(jié)、相互抑制，從而形成動(dòng)態(tài)平衡。一旦此動(dòng)態(tài)平衡被打破，機(jī)體便會(huì)因?yàn)門h1占優(yōu)勢或Th2占優(yōu)勢形成Th1/Th2“漂移”狀態(tài)而發(fā)病。

Th17細(xì)胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群，其在免疫應(yīng)答、自身免疫中均有重要的意義[4]。Th17細(xì)胞以分泌在IL-17和IL-21、IL-23等因子為主要特征， IL-17的生理作用主要表現(xiàn)在炎癥反應(yīng)的介導(dǎo)，中性粒細(xì)胞的動(dòng)員、募集和活化，以及參與自身免疫性、感染性疾病的病程等[5-6]。本研究得出IL-17、IL-23在AD中明顯升高，且IL-17的升高與AD嚴(yán)重程度(SCORAD評(píng)分)明顯相關(guān)，提示AD患者的發(fā)病免疫學(xué)機(jī)制不但有Th1/Th2細(xì)胞失衡的因素，同時(shí)有Th17細(xì)胞失衡的因素。馬蕾等[7]通過檢測外周血中Th17細(xì)胞，也發(fā)現(xiàn)并推測其高表達(dá)可能是AD發(fā)病中異常免疫反應(yīng)重要原因。在AD病程中，慢性期至急性期發(fā)展過程中Th1/Th2平衡的“漂移”可能與Th17細(xì)胞增多有關(guān)。IL-23也主要是Th17細(xì)胞所分泌，它的主要作用在于調(diào)節(jié)促進(jìn)Th17細(xì)胞的生長、促進(jìn)分泌IL-17等[8]。本研究檢測到IL-23明顯升高，從而使Th1/Th2/Th17平衡向Th17細(xì)胞方向，即炎癥加重方向“漂移”，促進(jìn)了AD的病程。IFN -γ、IL-4和IL-21是Th17細(xì)胞的負(fù)性調(diào)節(jié)因子[9]；在本研究中IFN-γ、IL-21無明顯變化，但I(xiàn)FN-γ/IL-17明顯降低，可見機(jī)體無法產(chǎn)生足夠的Th17細(xì)胞抑制因子，在整個(gè)免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中也使Th1/Th2/Th17平衡向炎癥加重方向“漂移”，免疫反饋調(diào)節(jié)已經(jīng)受到一定的破壞，無法改變機(jī)體過度免疫的狀態(tài)，炎癥的產(chǎn)生與加重在所難免。

本研究所采用新型生物學(xué)檢測方法-流式熒光技術(shù)，符合科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要。被國內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用于檢測血漿、淚液、痰等不同標(biāo)本中不同的細(xì)胞因子，其檢測結(jié)果與ELISA法比較，兩者相關(guān)性好，流式熒光技術(shù)動(dòng)力學(xué)線性范圍也比ELISA寬、靈敏度更高[10-13]。

綜上所述，AD患者外周血清細(xì)胞因子中，無論Th1/Th2、Th1/Th17均存在相應(yīng)的平衡的“漂移”，提示平衡的打破在AD的病程中起了相應(yīng)的重要的作用，其相應(yīng)的細(xì)胞因子相互作用、相互抑制，構(gòu)成了一個(gè)復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)。由此得出，Th1/Th2/Th17失平衡可能是AD發(fā)病的重要免疫學(xué)機(jī)制。而本試驗(yàn)不足在于沒有同時(shí)使用流式熒光技術(shù)檢測AD外周血中的Th1、Th2、Th17細(xì)胞的具體數(shù)量的變化，有待于進(jìn)一步檢測和擴(kuò)大樣本檢測。

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Study on Th1/Th2/Th17 balance in atopic dermatitis*

JiangYourang,DiaoQingchun△,ShiBingjun▲,WangYinglin,XuKejia,FengLin

(DepartmentofDermatology,ChongqingMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine/ChongqingMunicipalFirstPeople′sHospital,Chongqing400011,China)

[Abstract]ObjectiveTo research the change rule of peripheral serum Th1/Th2/Th17 balance and relevant cytokines in atopic dermatitis(AD) and to further study its immunologic mechanism.MethodsThe levels of peripheral serum IFN-γ,IL-4,IL-17,IL-21 and IL-23 in the patients with AD were detected by the flow immunofluorescence technology and the detection results were performed the statistical analysis,thus the change rule of Th1/Th2/Th17 balance in AD was analyzed.ResultsThe IL-4 level in peripheral serum of the patients with AD was increased compared with the healthy control group (P<0.05);the IFN-γ/IL-4 and IFN-γ/IL-17 in the AD group were significantly decreased compared with the control group(P<0.01);IL-17 was positively correlation with SCORAD scores of AD severity(P<0.05).ConclusionTh1/Th2 and Th1/Th17 are decreased in the AD course.Th1/Th2/Th17 balance drift may be the important mechanism of AD pathogenesis.

[Key words]atopic dermatitis;cytokines;Th1 cells;Th2 cells;Th17 cells;flow immunofluorescence technology

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.18.010

基金項(xiàng)目：重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)科研計(jì)劃立項(xiàng)目錄(2011-2-102，2012-2-182)；重慶市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(cstc 2012jjA 10141)。

作者簡介：蔣有讓(1987-)，住院醫(yī)師，碩士研究生，主要從事免疫性皮膚病、性病方向研究。△通訊作者，E-mail：qchdiao@vip.sina.com；▲通訊作者，E-mail：www.1806740182.qq.com。

[中圖分類號(hào)]R751.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)18-2482-02

(收稿日期：2015-11-29修回日期：2016-03-13)