徐方方，曾慧梅，李寶，廖康生，陳燕芬，劉博

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院/廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院，廣東廣州　510006）

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扶正抑瘤口服液和養(yǎng)血止癢片的薄層色譜鑒別

徐方方，曾慧梅，李寶，廖康生，陳燕芬，劉博

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院/廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院，廣東廣州510006）

摘要：【目的】建立扶正抑瘤口服液和養(yǎng)血止癢片的薄層色譜（TLC）鑒別方法?！痉椒ā坎捎肨LC法對(duì)扶正抑瘤口服液中的人參、黃芪，養(yǎng)血止癢片中的熟地黃、當(dāng)歸分別進(jìn)行定性鑒別?！窘Y(jié)果】各藥材的薄層色譜特征明顯，專屬性強(qiáng)，且無(wú)陰性干擾。【結(jié)論】該方法可用在展開(kāi)劑條件下同時(shí)定性鑒別處方中的2種藥材，有效控制扶正抑瘤口服液和養(yǎng)血止癢片的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：扶正抑瘤口服液；養(yǎng)血止癢片；TLC法；質(zhì)量控制

扶正抑瘤口服液和養(yǎng)血止癢片是廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑。其中扶正抑瘤口服液由黃芪、人參、鱉甲等8味中藥組成，具有扶正解毒、散結(jié)抑瘤之功效［1］。臨床上用于治療中晚期消化道癌、乳腺癌及肺癌等；有研究表明：扶正抑瘤口服液能夠提高惡性腫瘤放療后引起的白細(xì)胞減少，且無(wú)毒副作用［2］；扶正抑瘤口服液聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）療法能有效治療晚期大腸癌，延長(zhǎng)患者的生存期［3］。養(yǎng)血止癢片是由熟地黃、當(dāng)歸、白芍等6味中藥組成，具有養(yǎng)血止癢的功效，用于陰血不足引起的瘙癢性皮膚病，研究還表明養(yǎng)血止癢片可明顯抑制2，4-二硝基氟苯（DNFB）引起的小鼠Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)，對(duì)治療濕疹具有良好的前景［4-6］。

薄層色譜法（TLC）常用于快速分離和定性分析，這種技術(shù)所使用的設(shè)備和操作比較簡(jiǎn)便，可行性較高，應(yīng)用廣泛［7］。為有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，本研究采用薄層色譜法對(duì)扶正抑瘤口服液處方中黃芪、人參，養(yǎng)血止癢片處方中熟地黃、當(dāng)歸進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器Linomat 5型薄層點(diǎn)樣展開(kāi)及成像系統(tǒng)（瑞士Camag公司）；微量定容毛細(xì)管（美國(guó)Drummond公司）；TG-328A（S）型分析天平（上海精密儀器廠）；硅膠G（薄層層析用，青島海洋化工有限公司）；Delta 320型pH計(jì)（瑞士Mettler Toledo公司）；R10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）。

1.2試藥黃芪甲苷（批號(hào)：110781-200613）、黃芪標(biāo)準(zhǔn)藥材（批號(hào)：120974-201311）、人參標(biāo)準(zhǔn)藥材（批號(hào)：120917-201110），熟地黃標(biāo)準(zhǔn)藥材（批號(hào)：121196-201105）、當(dāng)歸標(biāo)準(zhǔn)藥材（批號(hào)：120927-201315）的標(biāo)準(zhǔn)品均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；扶正抑瘤口服液（本院制劑室提供，批號(hào)：20130815、20121109、20130316）；養(yǎng)血止癢片（本院制劑室提供，批號(hào)：20130121、20130902、20120822）；陰性對(duì)照品（不含黃芪或者人參的扶正抑瘤口服液，不含熟地黃或者當(dāng)歸的養(yǎng)血止癢片）按照制劑的制備方法同法制成。所有試劑均為分析純，水為純化水。

2　方法與結(jié)果

2.1扶正抑瘤口服液鑒定方法

2.1.1扶正抑瘤口服液樣品的制備取扶正抑瘤口服液30 mL，加于已預(yù)處理好的D101大孔樹(shù)脂柱（內(nèi)徑15 mm，柱高15 cm），依次用水、20%乙醇（體積分?jǐn)?shù)，下同）、60%乙醇各100 mL洗脫，收集60%乙醇洗脫液，水浴揮去乙醇，加水至20 mL，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20 mL，棄去氨試液。水浴蒸干正丁醇，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2陰性溶液的制備取陰性對(duì)照30 mL（缺黃芪，自制），陰性對(duì)照30 mL（缺人參，自制）按照2.1.1項(xiàng)方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.1.3黃芪的鑒別取黃芪對(duì)照藥材3 g，按2.1.1項(xiàng)方法制成對(duì)照藥材溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成1.0 mg/mL的黃芪甲苷溶液，作為對(duì)照品溶液。按薄層色譜法（《中國(guó)藥典》［8］一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液10 μL，對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇—乙酸乙酯—稀氨（1→10）（體積比4∶1∶5，下同）放置的上層液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積分?jǐn)?shù)為1%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.4人參的鑒別取人參對(duì)照藥材3 g，按照2.1.1項(xiàng)方法制成對(duì)照藥材溶液。按薄層色譜法（《中國(guó)藥典》［8］一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液10 μL，對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇—乙酸乙酯—稀氨（1→10）（4∶1∶5）放置的上層液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積分?jǐn)?shù)為1%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1　黃芪層鑒別色譜圖Figure 1 TLC chromatograms of Radix Astragali

2.2養(yǎng)血止癢片鑒定方法

2.2.1熟地黃的鑒別取本品5 g，研細(xì)，加水30 mL，回流提取30 min，過(guò)濾，濾液以乙酸乙酯萃取3次，每次30 mL，合并乙酸乙酯溶液，回收溶劑，殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為供試樣品。另取熟地黃對(duì)照藥材1 g，按以上方法制成對(duì)照藥材溶液。按薄層色譜法（《中國(guó)藥典》［8］一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積分?jǐn)?shù)為10%二硝基苯肼試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.2.2當(dāng)歸的鑒別取本品粉末5 g，加10 g/L碳酸氫鈉溶液50 mL，超聲處理10 min，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材1 g，按照以上方法制成對(duì)照藥材溶液。按照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》［8］一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖2　人參薄層鑒別色譜圖Figure 2 TLC chromatograms of Radix Ginseng

圖3　熟地黃薄層鑒別色譜圖Figure 3 TLC chromatograms of Radix Rehmanniae Praeparata

圖4　當(dāng)歸薄層鑒別色譜圖Figure 4 TLC chromatograms of Radix Angekicae Sinensis

2.2.3陰性溶液的制備同時(shí)取陰性對(duì)照5 g（缺熟地黃，自制）按照2.2.1項(xiàng)方法，陰性對(duì)照5 g（缺當(dāng)歸，自制）按照2.2.2項(xiàng)方法分別制備陰性對(duì)照溶液。

3　討論

3.1人參、黃芪的鑒別人參、黃芪的指標(biāo)性成分分別為達(dá)瑪烷型三萜皂苷和環(huán)阿屯型三萜皂苷，均屬于四環(huán)三萜，其結(jié)構(gòu)類似度高［9-11］，對(duì)TLC鑒別提出了較高要求。選用多種展開(kāi)劑，如氯仿—乙酸乙酯—甲醇—水（15∶44∶22∶10）的下層溶液、二氯甲烷—丙酮（15∶1）、氯仿—甲醇（10∶1）、氯仿—甲醇—水（13∶7∶2）、氯正丁醇—乙酸乙酯—稀氨（1→10）（4∶1∶5）放置的上層液等［8］，發(fā)現(xiàn)以正丁醇—乙酸乙酯—稀氨（1→10）（4∶1∶5）放置的上層液作為展開(kāi)劑可以同時(shí)鑒別人參、黃芪中不同類型的皂苷，且特征點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

3.2熟地黃、當(dāng)歸的鑒別選用多種的展開(kāi)劑，如乙酸乙酯—甲醇—甲酸（16∶0.5∶2），正己烷—乙酸乙酯（4∶1），環(huán)己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）［8］，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以中國(guó)藥典（2010版）中當(dāng)歸的鑒別條件環(huán)己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）作為展開(kāi)劑，能夠同時(shí)將熟地黃、當(dāng)歸鑒別，且特征點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

3.3環(huán)境因素的影響本研究同時(shí)考察了溫度（4℃和常溫）、濕度（32%和88%）和手鋪板及硅膠G板對(duì)薄層鑒別的影響，結(jié)果顯示：溫度、濕度和硅膠板類型的影響較小，能滿足鑒別的要求。

本研究成功建立TLC法用于鑒別扶正抑瘤口服液中的黃芪和人參，以及養(yǎng)血止癢片中的熟地黃和當(dāng)歸。該方法在1種展開(kāi)劑條件下用于2種不同藥材的鑒別，能夠簡(jiǎn)化鑒別工作，縮短鑒別時(shí)間，提高鑒別效率。黃芪、人參、熟地黃和當(dāng)歸屬于常用中藥材，本研究工作也為其他中藥制劑的TLC檢測(cè)提供了參考條件。

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【責(zé)任編輯：黃玲】

Identification of Fuzheng Yiliu Oral Solution and Yangxue Zhiyang Tablets with Thin-layer Chromatography

XU Fangfang，ZENG Huimei，LI Bao，LIAO Kangsheng，CHEN Yanfen，LIU Bo
（The Second Affiliated Hospital，Guangzhou University of Chinese Medicine/Guangdong Provincial Academy of Chinese Medical Sciences，Guangzhou 510006 Guangdong，China）

Abstract：objective To establish a thin-layer chromatography（TLC）method for the identification of Fuzheng Yiliu Oral Solution and Yangxue Zhiyang Tablets.Methods Qualitative identification with TLC was carried out for Radix Ginseng and Radix Astragali from Fuzheng Yiliu Oral Solution，and for Radix Rehmanniae Praeparata and Radix Angekicae Sinensis from Yangxue Zhiyang Tablets.Results The chromatograms of the samples had specific characteristics，having no negative interference.Conclusion The established method can be applied for the quality control of Fuzheng Yiliu Oral Solution and Yangxue Zhiyang Tablets.

Key words：Fuzheng Yiliu Oral Solution；Yangxue Zhiyang Tablets；thin-layer chromatography；quality control

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-3213（2016）03 - 0377 - 04

DOI：10．13359/j．cnki．gzxbtcm．2016．03．022

收稿日期：2015-07-13

作者簡(jiǎn)介：徐方方（1986-），女，研究實(shí)習(xí)員，在讀博士研究生；E-mail：xudubfang@163.com

通訊作者：劉博（1979-），男，研究員；E-mail：doctliu@263.net

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)：81202398）；廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)藥轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究專項(xiàng)（編號(hào)：YN2014ZHR209）；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：2013B010102006）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局國(guó)家中醫(yī)臨床研究基地業(yè)務(wù)建設(shè)科研專項(xiàng)（編號(hào)：JDZX2012010）