熊　鳴，　王立新

(中國人民解放軍海軍總醫(yī)院 1基礎(chǔ)醫(yī)學研究中心， 2血液科，北京 100048)

地西他濱對K562/A02細胞阿霉素耐藥性的影響*

熊鳴1，王立新2△

(中國人民解放軍海軍總醫(yī)院1基礎(chǔ)醫(yī)學研究中心， 2血液科，北京 100048)

[摘要]目的： 觀察地西他濱(DAC)對人慢性粒細胞白血病耐藥細胞株K562/A02阿霉素(ADR)耐藥性的影響，探討其作用的可能機制。方法: 分別或聯(lián)合應(yīng)用不同濃度ADR和DAC作用于K562/A02細胞和其親本細胞株K562，采用CCK-8法檢測藥物細胞毒性，Sequenom MassARRAY系統(tǒng)結(jié)合比色法評價DNA甲基化程度，流式細胞術(shù)檢測K562/A02細胞細胞周期分布和細胞凋亡率。結(jié)果: K562/A02細胞較K562細胞具有顯著ADR耐藥性，前者ADR作用24 h的IC50約為后者的50倍。而對DAC，在0.5～8 μmol/L作用濃度范圍內(nèi)，K562/A02細胞則較K562細胞更敏感。在相同ADR作用濃度(4.31和17.24 μmol/L)下，聯(lián)合1 μmol/L DAC處理24 h能顯著提高K562/A02細胞對ADR的敏感性，細胞存活率下降(P<0.05)。DAC和ADR均能影響K562/A02細胞的細胞周期進程和細胞凋亡率。1 μmol/L DAC的影響與作用時間相關(guān)，在作用24 h時以S期阻滯與細胞早期凋亡率升高為主，48 h時以G2/M期阻滯與細胞晚期凋亡和壞死率升高為主。ADR則主要表現(xiàn)為濃度依賴性G2/M期阻滯并誘導細胞晚期凋亡和壞死。兩者聯(lián)用使ADR對細胞周期分布的作用進一步加強，即表現(xiàn)為G2/M期阻滯更加明顯，但對細胞凋亡率的影響并無顯著差異。而在基因組甲基化程度上，2種細胞沒有顯著差異，DAC作用前后也沒有顯著改變。結(jié)論: DAC能增強K562/A02細胞對ADR的敏感性，具有逆轉(zhuǎn)耐藥作用，其機制可能與調(diào)節(jié)K562/A02細胞細胞周期進程、促進細胞凋亡和壞死有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]地西他濱； 阿霉素； K562/A02細胞； 耐藥性

白血病是一種嚴重危害人類健康的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，腫瘤細胞耐藥性的產(chǎn)生是其治療失敗和復(fù)發(fā)的重要原因。DNA甲基化在白血病中廣泛存在，啟動子CpG島超甲基化導致的抑癌基因失活與白血病的發(fā)生和腫瘤細胞化療藥物抵抗密切相關(guān)[1]。地西他濱(decitabine，DAC)是目前研究較多的甲基化抑制劑，已被證實能使一些耐藥腫瘤細胞株(包括實體瘤細胞株)重新對化療藥物恢復(fù)敏感[2-5]。本研究以人慢性粒細胞白血病耐藥細胞株K562/A02為研究對象，觀察地西他濱對K562/A02細胞阿霉素(adramycin，ADR)耐藥性的影響，并探討其作用的可能機制，為建立新的臨床治療模式提供理論依據(jù)。

材料和方法

1細胞

K562細胞和K562/A02細胞由中國醫(yī)學科學院血液學研究所提供。細胞接種于含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每1～3 d傳代 1 次。K562/A02細胞培養(yǎng)體系中另加入終濃度為0.86 μmol/L的ADR以維持其耐藥性，實驗前2周更換為無ADR培養(yǎng)液培養(yǎng)。取對數(shù)生長期細胞用于實驗，并且每次實驗使用的K562/A02細胞ADR作用24 h的半數(shù)抑制濃度(half maximal inhibitory concentration，IC50)維持在(90.91±8.66) μmol/L，約為K562細胞的50倍。

2主要試劑

DAC為Pharmachemie B.V.產(chǎn)品，用滅菌注射用水配制成1 mmol/L的終濃度，分裝后儲存于-80 ℃冰箱中，2個月內(nèi)有效；ADR為浙江海正藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，用滅菌注射用水配制成1.724 μmol/L終濃度，分裝后儲存于-20 ℃冰箱中；RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清為Gibco產(chǎn)品；細胞增殖/毒性檢測試劑CCK-8為Dojindo產(chǎn)品；細胞凋亡檢測試劑Annexin Ⅴ-FITC Kit和細胞周期檢測試劑Cycletest Plus DNA Reagent Kit為BD產(chǎn)品。DNA甲基化定量檢測試劑MethylFlash Methylated DNA Quantification Kit為Colorimetric產(chǎn)品。

3主要方法

3.1實驗分組根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，實驗分為ADR單獨處理組(ADR作用終濃度分別為0、2.16、4.31、8.62、17.24和34.48 μmol/L)、DAC單獨處理組(DAC作用終濃度分別為0、0.12、0.25、0.50、1.00和2.00 μmol/L)和1 μmol/L DAC+ADR聯(lián)合處理組(ADR作用終濃度分別為0、2.16、4.31、8.62、17.24和34.48 μmol/L)，作用24 h，藥物細胞毒性分析檢測細胞存活率，驗證K562/A02的耐藥性，觀察DAC對其ADR耐藥性的影響；1 μmol/L DAC+4.31 μmol/L ADR和1 μmol/L DAC+17.24 μmol/L ADR聯(lián)合處理組，分別作用24 h和48 h，流式細胞術(shù)檢測K562/A02細胞的凋亡率和細胞周期，觀察兩藥不同時相聯(lián)合效應(yīng)。同時，設(shè)置不同濃度藥物對照(含藥物的培養(yǎng)基，無細胞)和空白對照組(僅含培養(yǎng)基)。

3.2CCK-8法檢測藥物細胞毒性取對數(shù)生長期K562細胞和K562/A02細胞，調(diào)整密度為1×108/L，接種于96孔板中(每孔100 μL)。根據(jù)實驗分組加入不同作用終濃度的藥物，每組設(shè)4個平行復(fù)孔，于37 ℃、5% CO2條件下孵育24 h，加入CCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，酶標儀測定450 nm吸光度(A)。按公式計算細胞存活率，并繪制劑量效應(yīng)曲線。細胞存活率(%)=(A實驗孔-A空白孔)/(A對照孔-A空白孔)×100%

3.3細胞DNA甲基化檢測取正常培養(yǎng)的對數(shù)生長期K562細胞和K562/A02細胞，由上海歐易生物醫(yī)學科技有限公司采用Sequenom MassARRAY系統(tǒng)檢測DNA甲基化通用標志物LINE-1的甲基化程度。每組2個樣本。LINE-1是一種廣泛分布于人類基因組中的重復(fù)序列核元件，占人類基因組的17%。正常情況下LINE-1是高度甲基化的。定量檢測LINE-1的甲基化程度可作為全基因組甲基化程度的參考指標。同時，采用DNA甲基化定量檢測試劑盒(比色法)對上述結(jié)果進行驗證，并進一步對比檢測1 μmol/L DAC處理24 h前后K562/A02細胞DNA甲基化程度的改變。實驗操作按照說明書進行，包含DNA提取、DNA鍵合、甲基化DNA捕獲、信號檢測和數(shù)據(jù)分析4個主要步驟。由于這種檢測方法只對5-甲基化胞嘧啶(5-mC)具有高度特異性，對未甲基化和羥甲基化的胞嘧啶無特異性。因此，可通過檢測基因組5-mC 的含量(5-mC%)判斷DNA甲基化程度。

3.4流式細胞術(shù)檢測細胞周期取對數(shù)生長期的K562/A02細胞，調(diào)整細胞密度為2×108/L，按每孔4 mL接種于6孔板，根據(jù)實驗分組加入不同濃度的藥物(對照組加入等量1×PBS)分別培養(yǎng)24 h和48 h后，按照Cycletest Plus DNA Reagent Kit說明書操作，簡述如下：收集各組細胞，離心去上清液，加入250 μL A液，室溫靜置10 min，加入200 μL B液，室溫靜置10 min，加入200 μL C液，4 ℃避光靜置10 min，50 μmol/L尼龍網(wǎng)膜過濾，輕輕混勻后上機檢測。實驗重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。

3.5流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率取對數(shù)生長期的K562/A02細胞，調(diào)整細胞密度為2×108/L，按每孔4 mL接種于6孔板，根據(jù)實驗分組加入不同濃度的藥物(對照組加入等量1×PBS)分別培養(yǎng)24 h和48 h后，按照Annexin Ⅴ-FITC Kit說明書操作，簡述如下：收集各組細胞，離心去上清液，4 ℃預(yù)冷的PBS洗滌2次，加入500 μL結(jié)合緩沖液重懸，加入Annexin Ⅴ-FITC 5 μL混勻，室溫避光孵育15 min后，加入5 μL 碘化丙錠(propidium iodide，PI)，輕輕混勻后上機檢測。實驗重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。

4統(tǒng)計學處理

用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析。數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，各組均數(shù)間兩兩比較采用Bonferroni校正的t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

1K562和K562/A02細胞對ADR和DAC的敏感性

2種細胞分別經(jīng)不同濃度ADR和DAC單獨作用24 h，CCK-8法檢測細胞存活率，繪制劑量效應(yīng)曲線如圖1所示。結(jié)果顯示K562細胞對ADR較敏感，在2.16～34.48 μmol/L ADR作用濃度范圍內(nèi)，其細胞存活率呈劑量依賴性降低，由(57.69±3.81)%下降到(2.17±1.63)%。與之相比，K562/A02細胞則顯示出對ADR較強的耐藥性，即使ADR達到最高作用濃度34.48 μmol/L，其存活率仍有(74.33±3.71)%。計算ADR作用24 h的IC50，K562細胞為(2.07±0.13) μmol/L，K562/A02細胞為(90.91±8.66)μmol/L，后者約為前者的50倍，證明與K562細胞相比，K562/A02細胞確實具有顯著ADR耐藥性(P<0.01)，見圖1A。

而對DAC，在0.5～8 μmol/L作用濃度范圍內(nèi)，K562/A02細胞則較K562細胞更敏感。DAC作用濃度為1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L時，K562細胞存活率分別為(97.89±2.74)%、(96.10±3.57)%、(93.76±4.47)%和(85.95±4.56)%，K562/A02細胞存活率則分別為(87.15±3.41)%、(82.13±4.36)%、(80.45±5.86)%和(70.31±4.73)%，各DAC作用濃度下兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖1B。

Figure 1.Dose response curves of K562 cells and K562/A02 cells treated with ADR (A) or DAC (B) alone for 24 h.Mean±SD.n=3.*P<0.05，**P<0.01vsK562.

圖1K562和K562/A02細胞經(jīng)ADR或DAC單獨作用24 h的藥物劑量效應(yīng)曲線

2DAC對K562/A02細胞ADR耐藥性的影響

根據(jù)前述結(jié)果和DAC臨床用藥劑量原則[6-7]，實驗選取1 μmol/L作為DAC作用濃度。K562/A02細胞經(jīng)不同濃度ADR單獨或聯(lián)合1 μmol/L DAC處理24 h，CCK-8法檢測細胞存活率，繪制劑量效應(yīng)曲線如圖2所示。結(jié)果顯示在相同ADR作用濃度下，聯(lián)合1 μmol/L DAC處理使K562/A02細胞存活率明顯降低。其中，ADR作用濃度為4.31 μmol/L和17.24 μmol/L時，聯(lián)合1 μmol/L DAC處理分別使K562/A02細胞存活率下降，兩者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明1 μmol/L DAC能提高K562/A02細胞對ADR的敏感性，具有逆轉(zhuǎn)耐藥作用。

3DAC對K562/A02細胞DNA甲基化程度的影響

采用Sequenom MassArray系統(tǒng)檢測正常培養(yǎng)的K562/A02細胞LINE-1甲基化程度，并與其親本細胞株K562進行對比，結(jié)果如圖3所示。2種細胞LINE-1甲基化程度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。進一步通過DNA甲基化定量檢測，結(jié)果顯示，K562/A02細胞DNA甲基化程度為(2.29±0.40)%，K562細胞的為(2.65±0.40)%，兩者差異無統(tǒng)計學顯著性(P>0.05)，見圖4。2種檢測方法結(jié)果一致，說明2種細胞在基因組整體甲基化程度上無顯著差異。同時，通過DNA甲基化定量檢測對比了K562/A02細胞在1 μmol/L DAC處理24 h前后基因組甲基化程度的變化，結(jié)果亦未發(fā)現(xiàn)顯著差異。

Figure 2.Dose response curves of K562/A02 cells treated with ADR alone or DAC+ADR for 24 h. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsADR group.

圖2K562/A02細胞經(jīng)ADR單獨作用或DAC與ADR聯(lián)用24 h的藥物劑量效應(yīng)曲線

Figure 3.Methylation degree of LINE-1 in the 2 cell lines.

圖32種細胞中LINE-1甲基化程度

Figure 4.The effect of DAC on DNA methylation degree of the 2 cell lines.

圖4DAC對2種細胞DNA甲基化程度的影響

4DAC聯(lián)合ADR作用對K562/A02細胞細胞周期分布的影響

以17.24 μmol/L作為ADR作用的高濃度(ADR-H)和4.31 μmol/L作為ADR作用的低濃度(ADR-L)，分別單獨或聯(lián)合1 μmol/L DAC處理K562/A02細胞24和48 h，流式細胞術(shù)檢測細胞周期，結(jié)果如圖5、表1所示。DAC和ADR均能影響K562/A02細胞的細胞周期進程。與正常對照組相比，1 μmol/L DAC作用后，24 h時主要表現(xiàn)為處于S期的細胞顯著增多(P<0.01)，顯示S期阻滯；48 h時主要表現(xiàn)為處于G2/M期的細胞顯著增多(P<0.01)，顯示G2/M期阻滯，同時伴隨處于G0/G1期的細胞隨作用時間進行性降低。ADR作用后，細胞周期中處于G0/G1期的細胞顯著降低(P<0.01)，處于G2/M期的細胞顯著增高(P<0.01)，顯示G2/M期阻滯，且呈ADR濃度依賴性。與1 μmol/L DAC聯(lián)用，使ADR對細胞周期分布的上述作用進一步加強，即與相應(yīng)濃度ADR單獨作用組相比，聯(lián)用組的G2/M期阻滯更加明顯(P<0.05)。

Figure 5.The effect of DAC combined with ADR on cell cycle distribution in K562/A02 cells.

圖5DAC聯(lián)合ADR作用對K562/A02細胞細胞周期分布的影響

表1　DAC聯(lián)合ADR作用對K562/A02細胞細胞周期分布的影響

**P<0.01vscontrol group;▲P<0.05,▲▲P<0.01vsADR-L group;#P<0.05,##P<0.01vsADR-H.

5DAC聯(lián)合ADR作用對K562/A02細胞凋亡的影響

以17.24 μmol/L作為ADR作用的高濃度(ADR-H)和4.31 μmol/L作為ADR作用的低濃度(ADR-L)，分別單獨或聯(lián)合1 μmol/L DAC處理K562/A02細胞24 h、48 h，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡，結(jié)果如圖6、表2所示。DAC和ADR均可引起K562/A02細胞凋亡和壞死的比率升高，但ADR作用更強。與正常對照組相比，1 μmol/L DAC作用組在24 h時主要以細胞早期凋亡率升高(P<0.05)為主，作用48 h則主要表現(xiàn)為細胞晚期凋亡和壞死率顯著升高(P<0.01)。ADR作用組在低濃度作用24 h時即能引起95%以上細胞發(fā)生晚期凋亡和壞死，在高濃度和作用48 h時晚期凋亡和壞死率幾乎均達到100%。與相應(yīng)濃度ADR單獨作用組相比，DAC+ADR聯(lián)用組雖然在作用24 h時細胞晚期凋亡和壞死率略有升高，但兩組差異并無統(tǒng)計學顯著性(P>0.05)。

Figure 6.The effect of DAC combined with ADR on the apoptosis of K562/A02 cells.

圖6DAC聯(lián)合ADR作用對K562/A02細胞凋亡的影響

表2　DAC聯(lián)合ADR作用對K562/A02細胞凋亡的影響

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

討論

化療是白血病最重要和最基本的治療手段，提高化療藥物敏感性、克服腫瘤細胞耐藥的產(chǎn)生一直是白血病研究關(guān)注的重點[8]。DNA甲基化修飾與白血病的發(fā)生和腫瘤細胞化療藥物抵抗密切相關(guān)，且具有潛在的可逆性，因此是藥物治療的良好靶點[1]。

DAC作為特異性DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferases，DNMT)抑制劑，經(jīng)磷酸化后，可降低DNMT的生物活性，從而在DNA復(fù)制過程中抑制DNA的甲基化；同時，能夠重新激活因異常超甲基化沉默的多種抑癌基因、修復(fù)基因、細胞周期調(diào)控基因的表達，抑制惡性腫瘤細胞增殖、促進細胞分化或誘導其凋亡[5, 9]。已有研究報道，DAC對多種白血病細胞株具有誘導凋亡的作用，并能使一些耐藥腫瘤細胞株(包括實體瘤細胞株)重新對化療藥物敏感[8-9]。

K562/A02細胞是以藥物濃度遞增方式對人慢粒急性紅白血病變細胞株K562通過長期ADR誘導和克隆篩選而建立的耐藥細胞株，其ADR耐藥倍數(shù)至少為K562細胞的30倍[10-11]。實驗中藥物細胞毒性分析結(jié)果顯示，K562/A02細胞對ADR的耐藥倍數(shù)約為K562細胞的50倍。而更為值得注意的是，對于DAC，在0.5～8 μmol/L作用濃度范圍內(nèi)，K562/A02細胞則較K562細胞更敏感，為其發(fā)揮逆轉(zhuǎn)耐藥作用提供了有利基礎(chǔ)。Charlet等[2]在DAC增加神經(jīng)母細胞瘤(neuroblastoma，NBL)細胞對化療藥物敏感性的研究中也有類似發(fā)現(xiàn)，即耐藥性最強的NBL細胞株對DAC最敏感。

根據(jù)前述結(jié)果和DAC臨床用藥劑量原則，本實驗選取1 μmol/L作為DAC作用濃度。K562/A02細胞經(jīng)不同濃度ADR單獨或聯(lián)合1 μmol/L DAC處理24 h，觀察DAC對K562/A02細胞ADR敏感性的影響。結(jié)果顯示，在相同ADR作用濃度下，聯(lián)合1 μmol/L DAC處理使K562/A02細胞存活率明顯降低，說明1 μmol/L DAC能提高K562/A02細胞對ADR的敏感性，具有逆轉(zhuǎn)耐藥的作用。

為初步探討DAC逆轉(zhuǎn)耐藥作用的可能機制，本實驗首先對比檢測了K562細胞及其耐藥細胞株K562/A02的DNA甲基化程度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者并無顯著性差異。同時，通過DNA甲基化定量檢測發(fā)現(xiàn)K562/A02細胞在1 μmol/L DAC處理前后DNA甲基化程度亦無顯著改變,說明DAC對K562/A02細胞基因組甲基化程度并無顯著影響。而DAC作為去甲基化藥物，甲基化調(diào)控通常是其發(fā)揮作用的主要方式。由于基因組甲基化程度反映的是細胞整體甲基化水平，因此，我們推測，DAC是否是作用于特定的甲基化位點從而影響耐藥細胞藥物敏感性？

進一步，實驗觀察了1 μmol/L DAC聯(lián)合高濃度(17.24 μmol/L)和低濃度(4.31 μmol/L)ADR作用對K562/A02細胞的細胞周期分布和細胞凋亡的影響。結(jié)果顯示DAC和ADR均能影響K562/A02細胞的細胞周期分布。1 μmol/L DAC的影響與作用時間相關(guān)，在作用24 h時以S期阻滯為主，48 h時以G2/M期阻滯為主。ADR則主要表現(xiàn)為濃度依賴性G2/M期阻滯作用。兩者聯(lián)用使ADR對細胞周期分布的作用進一步加強，即表現(xiàn)為G2/M期阻滯更加明顯。而腫瘤細胞長時間阻滯于G2/M期，一方面能夠抑制腫瘤細胞增殖，另一方面使腫瘤細胞累積DNA損傷而觸發(fā)凋亡或直接導致壞死[12-14]，這就部分解釋了DAC能夠增強K562/A02細胞ADR敏感性、發(fā)揮逆轉(zhuǎn)耐藥作用的原因。該結(jié)論在隨后的細胞凋亡結(jié)果中也得到了證實。流式細胞術(shù)凋亡分析結(jié)果顯示，1 μmol/L DAC作用組在24 h時主要以細胞早期凋亡率升高為主，作用48 h則主要表現(xiàn)為細胞晚期凋亡和壞死率顯著升高。ADR作用組在低濃度作用24 h時即能引起95%以上細胞發(fā)生晚期凋亡和壞死，在高濃度和作用48 h時晚期凋亡和壞死率幾乎均達到100%。因此，兩者聯(lián)用組雖然在作用24 h時細胞晚期凋亡和壞死率略有升高，但與相應(yīng)濃度ADR單獨作用組相比，差異并無顯著性。

綜上所述，本研究結(jié)果證實DAC能增強K562/A02細胞對ADR的敏感性，具有部分逆轉(zhuǎn)耐藥作用，其機制可能與調(diào)節(jié)K562/A02細胞細胞周期進程、促進細胞凋亡和壞死有關(guān)。Valdez等[14]也發(fā)現(xiàn)，DAC能通過去甲基化作用調(diào)節(jié)細胞周期(尤其是G2/M期)檢查點和凋亡相關(guān)基因表達，使白消安耐藥髓系白血病細胞重新致敏。因此，對于DAC作用的具體分子機理，我們推測是否也可通過類似的機制，改變耐藥K562/A02細胞甲基化模式和程度，使一些失活基因尤其是細胞周期和凋亡相關(guān)基因被重新激活，從而引起細胞耐藥性的改變，抑或還存在某些未知機制，有待在后續(xù)實驗中進一步探討。

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(責任編輯： 陳妙玲， 羅森)

Effect of decitabine on resistance of K562/A02 cells to adriamycin

XIONG Ming1, WANG Li-xin2

(1CenterofBasicMedicalScience,2DepartmentofHematology,NavyGeneralHospitalofChinesePLA,Beijing100048,China.E-mail:wanglixin1991@sohu.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the effect of decitabine (DAC) on the resistance of human chronic myeloid leukemia cell line K562/A02 to adriamycin (ADR), and to explore the possible mechanism. METHODS: The K562/A02 cell line and its parental cell line K562 were treated with different concentrations of ADR or DAC alone, or in combination. The cytotoxic effects of these 2 agents were determined by CCK-8 assay. The degree of DNA methylation was evaluated by Sequenom MassARRAY system and colorimetric method. The cell cycle distribution and the apoptotic rate were determined by flow cytometry. RESULTS: K562/A02 cells were more significantly resistant to ADR than K562 cells.The half maximal inhibitory concentration of ADR for 24 h of the K562/A02 cells was about 50 times higher than that of the K562 cells. To DAC, in the concentration range of 0.5～8 μmol/L, K562/A02 cells were more sensitive than K562 cells. As compared with the same concentrations (4.31 μmol/L and 17.24 μmol/L) of ADR alone, the combination with 1 μmol/L DAC significantly improved the sensitivity of K562/A02 cells to ADR. Both DAC and ADR affected the cell cycle progression and apoptotic rate of K562/A02 cells. DAC (1 μmol/L) treatment mainly showed S phase arrest and increased early apoptotic rate for 24 h, and G2/M phase arrest and increased late apoptosis and necrosis for 48 h in a time-related manner. ADR treatment showed G2/M phase arrest and increased late apoptosis and necrosis in a concentration-dependent manner. In combination with 1 μmol/L DAC, the effect of ADR on the cell cycle distribution was further enhanced, showing more obvious G2/M phase arrest, but no significant difference of the apoptotic rate was observed. The degree of methylation in the genome had no significant difference between the 2 cells, and it before and after DAC treatment had no significant change. CONCLUSION: DAC enhances the sensitivity of K562/A02 cells to ADR, showing drug resistance-reversing potential. The mechanism may be related to regulating cell cycle progression and promoting apoptosis and necrosis of K562/A02 cells.

[KEY WORDS]Decitabine; Adriamycin; K562/A02 cells; Drug resistance

[文章編號]1000- 4718(2016)01- 0069- 07

[收稿日期]2015- 07- 09[修回日期] 2015- 09- 29

*[基金項目]國家自然科學基金專項基金資助項目(No. 81350004)； 海軍總醫(yī)院創(chuàng)新培育基金資助項目(No. cxpy201302)

通訊作者△Tel: 010-66957676; E-mail: wanglixin1991@sohu.com

[中圖分類號]R730.23; R733.7

[文獻標志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.01.012