張娟，張鳳翔，許冬梅，畢靖紅

（興化市漁業(yè)技術(shù)指導(dǎo)站，江蘇　興化　225700）

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兩種致病菌對抗菌素類藥物的感受性試驗(yàn)

張娟，張鳳翔，許冬梅，畢靖紅

（興化市漁業(yè)技術(shù)指導(dǎo)站，江蘇興化225700）

資助項(xiàng)目：2015年泰州市高層次人才科研項(xiàng)目；江蘇省水生動物疫病監(jiān)控項(xiàng)目

抗菌素目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于水生動物細(xì)菌性疾病的治療，然而由于長期使用和使用方法不當(dāng)?shù)仍?，致病菌對抗菌素逐漸產(chǎn)生了耐藥性。為了幫助養(yǎng)殖戶科學(xué)地選擇和使用水產(chǎn)用抗菌素類藥物，避免漁用藥物濫用或者誤用，2015年4—10月，項(xiàng)目組從江蘇省興化市人工養(yǎng)殖的魚體內(nèi)分離了致病菌，測定其對常見水產(chǎn)用抗菌素類藥物的敏感性。

1　材料與方法

1.1供試藥物

供試藥物為目前比較常用的抗菌素：恩諾沙星、土霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、阿莫西林、多西環(huán)素、痢菌凈、磺胺二甲嘧啶和復(fù)方新諾明。

1.2供試菌株

草魚、鯽魚和鳊魚為興化市常規(guī)養(yǎng)殖品種，養(yǎng)殖面積一般為15×667 m2～40×667 m2，2015年4—10月在發(fā)病的成魚養(yǎng)殖池塘中隨機(jī)采樣，草魚規(guī)格為1～2 kg/尾，鯽魚為0.15～0.3 kg/尾，鳊魚為0.3～0.4 kg/尾，病魚一般表現(xiàn)為赤皮、爛鰓、腸炎等癥狀。采用無菌操作的方法，從魚體內(nèi)（肝臟、脾臟、腎臟）分離致病菌（菌株分離的時(shí)間、地點(diǎn)和水生動物種類等詳細(xì)情況見表1和表2），菌株保存于興化市漁業(yè)技術(shù)指導(dǎo)站，主要為嗜水氣單胞菌株和溫和氣單孢菌株。

1.3供試菌株最小抑菌濃度的測定將供試藥物采用適宜的溶媒溶解后，在無菌條件下用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基將藥物稀釋，制作成藥物濃度分別為64、32、16、8……0.25 mg/L的2倍稀釋藥物系列培養(yǎng)基，將系列培養(yǎng)基制成藥敏板。最后，定量吸取0.5麥?zhǔn)蠁挝坏募?xì)菌混懸液0.1 mL加入藥敏板中，搖勻。置于35℃條件下培養(yǎng)24 h，經(jīng)肉眼觀察，無細(xì)菌生長試管中的最低藥物濃度，即為藥物的最小抑菌濃度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）。

2　結(jié)果

2.1嗜水氣單胞菌對抗菌藥物的感受性

試驗(yàn)共分離了16株嗜水氣單胞菌，通過檢測供試藥物對菌株的最小抑菌濃度，得出16株嗜水氣單胞菌對各種抗菌藥物感受性，如表3所示。

2.2溫和氣單孢菌對抗菌藥物的感受性

試驗(yàn)共分離了5株溫和氣單孢菌，通過檢測供試藥物對菌株的最小抑菌濃度，得出5株溫和氣單孢菌對各種抗菌藥物感受性，如表4所示。

3　分析與建議

3.1致病菌藥物感受性分析

不同抗菌素藥敏試驗(yàn)的敏感性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)有所不同，參照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）標(biāo)準(zhǔn)，對藥物的敏感性及耐藥性判定范圍劃分，如表5。依據(jù)這一劃分范圍，將所有抗菌藥物對菌株的MIC值測定結(jié)果進(jìn)行判定，得出了嗜水氣單胞菌對抗菌素類藥物的感受性測定結(jié)果（表6）和溫和氣單胞菌對抗菌素類藥物的感受性測定結(jié)果（表7）。

表1　嗜水氣單胞菌菌株的來源

表2　溫和氣單胞菌菌株的來源

3.2藥物使用建議

同種病原菌對不同抗菌素的感受性不同，不同的病原菌對同種抗菌素的感受性也不同［1］。該研究中，嗜水氣單胞菌對氟苯尼考、恩諾沙星和痢菌凈等敏感；對土霉素、硫酸新霉素、甲砜霉素、多西環(huán)素和復(fù)方新諾明等具有一定的耐藥性；對阿莫西林和磺胺二甲嘧啶全部具有耐藥性。溫和氣單胞菌對氟苯尼考、恩諾沙星、甲砜霉素和痢菌凈等敏感；對土霉素、硫酸新霉素、多西環(huán)素和復(fù)方新諾明等具有一定的耐藥性；對阿莫西林和磺胺二甲嘧啶全部具有耐藥性。嗜水氣單胞菌和溫和氣單孢菌均屬于弧菌科氣單胞菌屬，從檢測結(jié)果可以看出，這兩種菌對同一種抗菌素藥物的感受性類似。

21株菌株對阿莫西林和磺胺二甲嘧啶均具有耐藥性，說明該藥對氣單孢菌已無明顯效果，治療魚病時(shí)盡量避免使用。氟苯尼考的MIC值小于0.25 μg/mL，恩諾沙星的MIC值小于2 μg/mL，痢菌凈的MIC值集中于2～4 μg/mL，說明氣單胞菌對氟苯尼考最敏感。因此，若發(fā)生由氣單孢菌引起的水生動物疾病時(shí)，建議選用氟苯尼考、恩諾沙星和痢菌凈等藥物，其中優(yōu)先選用氟苯尼考。

表3　嗜水氣單胞菌對各種抗菌藥物的感受性

表4　溫和氣單孢菌對各種抗菌藥物的感受性

表5　供試藥物MIC值對應(yīng)感受性判定表MIC值單位：μg/mL

對魚類使用抗菌素容易使致病菌產(chǎn)生耐藥性，連續(xù)給魚投喂氟苯尼考餌料后，從試驗(yàn)魚中分離的菌株來看，大部分菌株對該藥的耐藥性明顯增強(qiáng)［2-4］。因此，在養(yǎng)殖過程中，建議養(yǎng)殖戶交替使用不同的抗菌素治療魚病，避免長期使用某種藥物而產(chǎn)生耐藥性。

表6　嗜水氣單胞菌對抗菌素類藥物的感受性測定結(jié)果

表7　溫和氣單胞菌對抗菌素類藥物的感受性測定結(jié)果

參考文獻(xiàn)：

［1］宋曉玲，張巖，李健.4株淡水魚致病菌對常用漁用藥物的藥物敏感性研究［J］.海洋水產(chǎn)研究，2000，21（1）：47-51.

［2］劉遠(yuǎn)高.抗菌素類藥物在魚類細(xì)菌性疾病治療中的規(guī)范應(yīng)用研究［D］.武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［3］陳昌福，陳亮波，郭慶，等.投喂氟苯尼考后黃顙魚腸道內(nèi)細(xì)菌耐藥性的變化［J］.當(dāng)代水產(chǎn)，2014，（4）：78-79.

［4］陳昌福，陳輝，馮東岳，等.溫和氣單胞菌對氟苯尼考的耐藥性獲得和消失速率［J］．當(dāng)代水產(chǎn)，2015（8）：90-91．

作者簡介：張娟（1984-），女，碩士，主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病研究．E-mail：zhangjuanwxf@163.com

doi：10.3969/j.issn.1004-2091.2016.05.014

收稿日期：（2015-09-28）