朱方磊，周芳芳，李進，李國攀，榮俊，熊濤

長江大學(xué)生物醫(yī)藥研究所，湖北 荊州 434025；長江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025

2種豬瘟疫苗對豬群的免疫效果評價

朱方磊，周芳芳，李進，李國攀，榮俊，熊濤

長江大學(xué)生物醫(yī)藥研究所，湖北 荊州 434025；長江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025

[摘要]采用阻斷ELISA檢測血清抗體的方法對2種豬瘟疫苗的免疫效果進行了評價，結(jié)果顯示：(1)豬瘟活疫苗A(脾淋源)的免疫效果與免疫劑量和次數(shù)沒有明顯關(guān)系；(2)豬瘟活疫苗B(細(xì)胞源)在加強免疫后2倍劑量的抗體保護率比單倍劑量更高；(3)隨著免疫時間(80d內(nèi))的增加，2種試驗疫苗的抗體保護率都在提高，但在一次免疫后20d內(nèi)均不能達到較好的免疫保護效果。

[關(guān)鍵詞]豬瘟疫苗；免疫效果；抗體保護率

豬瘟(Classical Swine Fever, CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus)引起豬的一種以高熱和出血為特征的高度接觸性和致死性傳染病[1]。該病是危害我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的一種重要疫病，我國自1954年開始推廣使用豬瘟兔化弱毒疫苗以來，豬瘟疫情得到了有效控制，但該病不時仍有發(fā)生[2～4]。為了解2015年政府招標(biāo)的豬瘟活疫苗的免疫效果，筆者于2月20日在湖北省內(nèi)的3個豬場對豬場指定的2個廠家生產(chǎn)的豬瘟活疫苗(脾淋源和細(xì)胞源)進行了免疫效果評價試驗，同時與豬場自購的豬瘟細(xì)胞源疫苗的免疫效果進行了比較，現(xiàn)將試驗結(jié)果報告如下。

1材料與方法

1.1材料

試驗動物為湖北省3個豬場內(nèi)的未免疫豬瘟疫苗的斷奶仔豬。

受試疫苗為豬場指定2個廠家生產(chǎn)的豬瘟疫苗A(脾淋源)和B(細(xì)胞源)，以及豬場自購疫苗C(細(xì)胞源)。

試劑豬瘟病毒抗體檢測試劑盒(阻斷ELISA)，由北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2方法1.2.1A疫苗在豬場1豬群中的免疫試驗

在豬場1中選擇未免疫豬瘟疫苗30日齡左右的仔豬180頭作為試驗樣本。試驗豬群隨機分為7組(1～7組)，1～3組使用豬瘟疫苗A分別按免疫推薦劑量1、2、4倍進行1次免疫，每組16頭；4～6組使用豬瘟疫苗A分別按免疫推薦劑量1、2、4倍進行2次免疫，每組33頭；第7組(對照組)分別使用豬場自購豬瘟活疫苗C按豬場免疫程序進行2次免疫，樣本33頭；分欄飼養(yǎng)。初選豬群采血后開展母體抗原檢測并進行第一輪免疫(簡稱一免)注射；30d后，對4～7組進行加強免疫。對1～3組，分別于一免后20、50、80d于前腔靜脈采血測抗；對4～7組，分別于一免后30、50、80d于前腔靜脈采血測抗。

表1　A疫苗在豬場1豬群中的免疫試驗分組及注射和采血方法

1.2.2A疫苗在豬場2豬群中的免疫試驗

在豬場2中選擇未免疫豬瘟疫苗30日齡左右的仔豬180頭作為試驗樣本，隨機分為6組(1～6組)，使用豬瘟活疫苗A免疫。1～3組分別按照疫苗使用正常劑量1、2、4倍作一免；4～6組分別按照疫苗使用正常劑量1、2、4倍作加強免疫。各組做好標(biāo)記，分欄飼養(yǎng)，所有樣本仔豬于前腔靜脈采血測抗。1～3組分別于一免后20、50d于前腔靜脈采血測抗；4～6組，分別于一免后20d、二免后20、50d于前腔靜脈采血測抗。

表2　A疫苗在豬場2豬群中的免疫試驗分組及注射和采血方法

1.2.3B疫苗在豬場3豬群中的免疫試驗

在豬場3中選擇未免疫豬瘟35日齡左右的仔豬150頭作為試驗樣本，隨機分為5組(1～5組)，使用豬瘟活疫苗B免疫。1～3組分別按照豬瘟疫苗正常劑量1、2、4倍免疫一次；分別于免疫前、免疫后21d和51d，前腔靜脈采血。4～5兩組分別按照豬瘟疫苗正常劑量1、2倍間隔30d作加強免疫；分別于免疫前、二免后21d和51d，前腔靜脈采血。

表3　B疫苗免疫采血試驗

1.3檢測方法及結(jié)果判定

分離血清后，使用北京愛德士元亨生物科技有限公司的豬瘟病毒抗體檢測試劑盒，按照說明書步驟，采用阻斷ELISA方法檢測血清抗體。檢測樣本光密度值阻斷率≥40%判定為抗體水平合格。

2結(jié)果與分析

2.1不同豬瘟疫苗對豬群的一免效果

如圖1～3所示，2種試驗疫苗一免在20d內(nèi)都不能達到較好的免疫保護效果，但隨著時間(80d內(nèi))的增加，免疫保護率逐漸提高。豬瘟活疫苗A(脾淋源)在2個豬場免疫保護率存在差異，豬場1的免疫保護率明顯偏低，可能是檢測環(huán)境和豬群群體差異等因素導(dǎo)致，但免疫保護率隨時間逐漸提高的趨勢相同。

圖1　A疫苗免疫后檢測合格率統(tǒng)計(豬場1)

圖2　A疫苗免疫后檢測合格率統(tǒng)計(豬場2)

圖3　B疫苗免疫后檢測合格率統(tǒng)計(豬場3)

2.2不同豬瘟疫苗對豬群的加強免疫效果

如圖4～6所示，在對豬群進行加強免疫后，在二免后20d內(nèi)2種疫苗的免疫保護率都能得到不同程度的增加，值得注意的是，豬瘟活疫苗A(脾淋源)在1倍劑量二免后50d免疫保護率卻會下降，綜合2次免疫結(jié)果來看，豬瘟活疫苗(脾淋源)免疫效果與免疫劑量和次數(shù)沒有明顯關(guān)系。豬瘟活疫苗B(細(xì)胞源)1、2倍劑量加強免疫后，免疫保護率60%、80.8%與一免同期保護率25.0%、30.8%相比，2倍劑量加強免疫在21d后抗體保護率差異明顯。一免效果不好，但加強免疫后，免疫保護率顯著提高。

圖4　A疫苗加強免疫檢測合格率統(tǒng)計(豬場1)

圖5　A疫苗加強免疫檢測合格率統(tǒng)計(豬場2)

3討論

自20世紀(jì)50年代中國首創(chuàng)了豬瘟兔化弱毒疫苗(即C株)以來，隨后又發(fā)展了不同的疫苗制造工藝，如細(xì)胞培養(yǎng)苗、乳兔組織苗和牛體反應(yīng)組織苗等[5,6]。CSF脾淋源活疫苗是用異源活體動物組織細(xì)胞生產(chǎn)，代次低、免疫效果好、安全性高，并且在脾淋源活疫苗中富含有免疫增強作用的細(xì)胞因子，非特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)優(yōu)于細(xì)胞源活疫苗和乳兔組織苗,緊急預(yù)防接種效果好，但存在生產(chǎn)流程復(fù)雜、質(zhì)量不易控制等問題[7,8]。

本研究所用CSF細(xì)胞源活疫苗B一次免疫效果不明顯，在二次免疫豬群后，抗體的保護率明顯上升，而CSF脾淋源活疫苗A在二次免疫豬群后，抗體保護率也有一定程度的提高，這與在其他省市報道的豬瘟活疫苗免疫效果類似[9，10]。CSF脾淋源活疫苗A在不同的豬場的免疫保護效果不一樣，這可能與豬瘟疫苗質(zhì)量及豬場檢測環(huán)境有關(guān)，廠家不同批次的疫苗以及保管運輸環(huán)節(jié)等都直接影響豬瘟的免疫效果。因此，應(yīng)加強對豬瘟疫苗的質(zhì)量監(jiān)控和豬場環(huán)境的管理，以便正確綜合評價豬瘟疫苗的免疫效果。

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[收稿日期]2016-02-24

[基金項目]中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室開發(fā)基金項目(2014H19001)。

[作者簡介]朱方磊(1987-)，男，碩士生，研究方向為基因工程疫苗。通信作者：熊濤，xiongtaohotmail.com。

[中圖分類號]S852.65+1

[文獻標(biāo)識碼]A

[文章編號]1673-1409(2016)15-0033-05

[引著格式]朱方磊，周芳芳，李進，等.2種豬瘟疫苗對豬群的免疫效果評價[J].長江大學(xué)學(xué)報(自科版) ，2016，13(15)：33～37.