廖淑珍，丁凱宏，侯春江

(廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗科　533000)

·臨床研究·

臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血診斷中的臨床應(yīng)用

廖淑珍，丁凱宏，侯春江

(廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗科533000)

摘要:目的本文就臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)診斷中的臨床應(yīng)用進行討論和說明。方法選取百色市人民醫(yī)院2013年4月1日至2015年5月1日的1 148例臍血標(biāo)本進行詳細(xì)討論和分析。對1 148例臍血標(biāo)本分別采用臍血血紅蛋白電泳和紅細(xì)胞滲透脆性試驗(簡稱一管法)的篩查方式。對進行產(chǎn)前檢查的1 148例臍血標(biāo)本進行臍血血紅蛋白電泳檢測，并觀察檢查后1 148例臍血標(biāo)本地貧類型分布及一管法的篩查溶血率。結(jié)果經(jīng)過一管法篩查后發(fā)現(xiàn)，其溶血率大于60%，1 148例臍血標(biāo)本中有402例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s,其中α-地貧的靜止型共29例，標(biāo)準(zhǔn)型108例，血紅蛋白H病共12例，Hb Bart′s水腫共5例。結(jié)論對于α-新生兒地貧的診斷使用臍血血紅蛋白電泳進行檢測，能夠有效地進行判斷，而且操作方便，但是對于β-新生兒地貧的診斷還需要進一步研究。

關(guān)鍵詞:：臍血蛋白電泳；α-新生兒珠蛋白生成障礙性貧血；β-新生兒珠蛋白生成障礙性貧血；診斷

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)屬于一種較為常見的新生兒疾病，是由于q常染色體隱性遺傳造成。經(jīng)過相關(guān)調(diào)查統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，我國地貧多發(fā)區(qū)域為廣西，有20%的人群為地貧攜帶者，而江西、四川、臺灣及香港等地區(qū)的地貧攜帶者分別占2.7%、4.1%、5.5%及8.4%[1-3]。在我國南寧、百色等壯族人民出現(xiàn)地貧的新生兒最多，廣西出現(xiàn)地貧的遺傳疾病概率最大[4]。若不能對地貧的新生兒進行檢查，就容易出現(xiàn)不能合理飲食、盲目進補等情況[5]。一般情況下，對于地貧的新生兒使用血紅蛋白電泳及紅細(xì)胞滲透脆性試驗(簡稱一管法)的檢查方式，但是其檢查效果并不顯著。因此，對于地貧新生兒提出了采用由臍血蛋白電泳的檢查方式，其檢查效果顯著。本研究探討臍血蛋白電泳在新生兒地貧診斷中的臨床應(yīng)用效果，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取本院2013年4月1日至2015年5月1日的1 148例臍血標(biāo)本作為研究對象，并對其資料進行討論和分析。首先對本院同期1 148例產(chǎn)前婦女資料進行統(tǒng)計和分析。1 148例產(chǎn)前婦女年齡17～39歲，平均(27.7±2.4)歲。對1 148例產(chǎn)前婦女含乙二胺四乙酸抗凝血標(biāo)本進行一管法篩查檢測，HbA(88.22±9.42)%，HbF(1.24±0.53)%，HbA2(0.79±0.23)%，RBC脆性試驗(58.24±18.93)%。

1.2方法

1.2.1制作臍血標(biāo)本在新生兒出生時將臍帶剪短，并在胎盤端保存2～3 mL的臍帶血，注入含EDTA-K2抗凝劑的試管中，未及時檢測標(biāo)本應(yīng)于2～8 ℃冰箱保存。

1.2.2檢驗儀器1 148例臍血標(biāo)本進行新生兒地貧檢驗的儀器2014年5月以前使用美國Helena SPIFE 3000全自動電泳儀(瓊脂糖凝膠法)，2014年5月起使用高分辨率電泳儀，法國Sebia公司生產(chǎn)的 Capillarys 2 FLEX PIERCING全自動毛細(xì)管電泳儀及其配套血紅蛋白電泳試劑盒CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)。

1.2.3電泳方法使用瓊脂糖凝膠法檢測時，在儀器電泳之前需要進行血紅蛋白液的制備，取紅細(xì)胞約250 μL，用生理鹽水洗滌后以3 000 r/min離心5 min，棄去上清液，重復(fù)此操作3次；吸干上清液后加入每管380 μL蒸餾水溶血約5 min；每管加入250 μL四氯化碳，置振蕩器上振蕩5～6 min，以3 000 r/min離心5 min，取上層血紅蛋白液備用。吸取血紅蛋白應(yīng)用液13.5 μL在點樣板，將標(biāo)本板、瓊脂糖凝膠片等放置好，進行電泳測試，儀器自動染色、脫色和干燥處理，最后進行掃描定量分析。使用Capillarys 2 FLEX PIERCING全自動毛細(xì)管電泳儀，無需制備血紅蛋白液，只需將合格的抗凝血標(biāo)本正確放入試管架，再將試管架從儀器入口導(dǎo)入，儀器自動進行血紅蛋白電泳分析，約30 min后全部檢測程序完成，樣品結(jié)果即顯示在工作目錄下。新生兒地貧進行一管法篩查檢驗時，使用米基醫(yī)療器械有限公司提供的試劑盒，并嚴(yán)格按操作規(guī)程進行測定。

1.3觀察指標(biāo)觀察經(jīng)過監(jiān)測后的1 148例臍血標(biāo)本的地貧類型分布，靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型、血紅蛋白H病及Hb Bart′s水腫例數(shù)。同時觀察一管法的篩查溶血率。

1.4檢驗標(biāo)準(zhǔn)β-地貧輕型：HbA2或HbF輕度升高，大多在4%～8%；中間型：HbF可達(dá)10%，HbA2正?；蛏撸恢匦停阂颚骆溕赏耆驇缀跬耆艿揭种?，以致含有β鏈的HbA 合成減少或消失，HbF 30%～90%，HbA多低于40%或甚至為0%[5-6]。α-地貧靜止型(-α/αα)：患者無癥狀，紅細(xì)胞形態(tài)正常，出生時臍帶血中Hb Bart′s水平為1.0%～2.0%，但3個月后即消失。輕型(標(biāo)準(zhǔn)型)(-/αα)：患者無癥狀，紅細(xì)胞形態(tài)有輕度改變，如大小不等、中央淺染、異形等；紅細(xì)胞滲透脆性降低；變性珠蛋白小體陽性；HbA2和HbF水平正?；蛏缘蚚7-8]。新生兒期Hb Bart′s可達(dá)5%～15%，于生后6個月時完全消失。經(jīng)煌焦油藍(lán)溫育后，少數(shù)紅細(xì)胞內(nèi)有H包涵體。血紅蛋白電泳無異常發(fā)現(xiàn)。血紅蛋白H病：HbH在pH8.6或8.8電泳時，向陽極方向移動，電泳速度快于HbA;有溶血性貧血的特征，骨髓中紅細(xì)胞系統(tǒng)增生極度活躍[9]。HbH明顯增高(2.5%～40.0%)，HBA2及 HbF水平正常。Hb電泳可出現(xiàn) Hb H區(qū)帶。紅細(xì)胞滲透脆性試驗降低，紅細(xì)胞包涵體陽性；血紅蛋白Bart胎兒水腫綜合征(γ4)：Hb Bart′s占80%～100%，可有少量HbH。HbA、A2及F均缺失。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS18.0軟件分析，計數(shù)資料以率表示，組間比較以χ2檢驗；計數(shù)資料采用百分比表示,數(shù)據(jù)對比采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.11 148例臍血標(biāo)本的地貧類型分布見表1。在1 148例臍血標(biāo)本中共有154例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s，在檢出Hb Bart′s的154例臍血標(biāo)本中有29例為靜止型，占總數(shù)的18.83%，其發(fā)生率經(jīng)計算為2.526%；有108例為標(biāo)準(zhǔn)型，占總數(shù)的70.13%，其發(fā)生率經(jīng)計算為9.407%；有12例為血紅蛋白H病，占總數(shù)的7.79%，其發(fā)生率經(jīng)計算為1.045%；有5例為Hb Bart′s水腫，占總數(shù)的3.25%，其發(fā)生率經(jīng)計算為0.435%。

表1　　1 148例臍血標(biāo)本的地貧類型及分布

2.2檢出Hb Bart′s帶的154例臍血標(biāo)本父母進行檢驗及一管法的篩查溶血率一管法的篩查溶血率大于60%。對有β-地貧臍帶攜帶的父母進行電泳檢驗，發(fā)現(xiàn)沒有異常血紅蛋白帶、HbF、HbA水平與沒有地貧的標(biāo)本HbF、HbA水平對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

地貧屬于一種嚴(yán)重危害人們身體健康的疾病，分為異常血紅蛋白病和地貧兩種。對于使用臍血蛋白電泳在新生兒地貧血的診斷中具有重要作用。Hb Bart′s被國際認(rèn)為是一種特殊的血紅蛋白，其被廣泛應(yīng)用于新生兒地貧中，在新生兒出生后，靜止型Hb Bart′s很快就會消失。全自動毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的原理是在溶血試劑中進行過稀釋的紅細(xì)胞樣品，會被注射到毛細(xì)管的正極端，在高壓電的作用下進行電泳分離，然后血紅蛋白會被靠近負(fù)極端的415 nm光波檢測裝置檢測到，然后對檢測結(jié)果進行記錄和分析[10-12]。對于新生兒地貧的診斷可以使用臍血蛋白電泳、一管法及紅細(xì)胞指數(shù)的檢測方法，但是從上述研究內(nèi)容中可知，對于新生兒地貧的診斷使用一管法并不合適，而紅細(xì)胞指數(shù)的檢測方法在醫(yī)學(xué)研究中沒有明確定論，因此最適合進行新生兒地貧的診斷方法就是臍血蛋白電泳的檢測方式[13]。在電泳診斷中，其對于Hb Bart′s水腫胎和α-地貧基因的診斷率極高。貧血是由于血紅蛋白異常造成的，因此在實施電泳檢測時就會出現(xiàn)血紅蛋白異常的現(xiàn)象。雖然臍血蛋白電泳的檢測方式對于新生兒地貧的診斷準(zhǔn)確、診斷方式簡便，但是在進行新生兒地貧的診斷過程中只對α-新生兒地貧診斷準(zhǔn)確，但在檢驗過程中有時易出現(xiàn)假陰性和假陽性的情況，并且對于β-新生兒地貧的診斷還尚待研究[14-15]。

從以往研究結(jié)果中可知，對于血紅清蛋白采用電泳的檢查方式其中有967例患者被確診為α-地貧基因，準(zhǔn)確率為89.9%；有404例患者被確診為β-地貧基因，準(zhǔn)確率為82.9%。由此可見，對于新生兒地貧的診斷采用毛細(xì)管血蛋白電泳的診斷方式較為有效。另有研究顯示，對于α-地貧缺失型采用電泳的診斷方式準(zhǔn)確率高、簡單、重復(fù)性好。

由本研究結(jié)果可見，一管法篩查的溶血率大于60%。對有β-地貧臍帶攜帶的父母進行電泳檢驗發(fā)現(xiàn)沒有異常血紅蛋白帶、HbF、HbA的量與沒有地貧的標(biāo)本HbF、HbA的量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。但是，使用臍血蛋白電泳的檢測方式對于新生兒地貧的診斷準(zhǔn)確性非常高。在1 148例臍血標(biāo)本中共有154例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s，總發(fā)生率為13.410%，在檢出Hb Bart′s的154例臍血標(biāo)本中有29例患者為靜止型，占總數(shù)的18.83%,其發(fā)生率為2.526%；有108例患者為標(biāo)準(zhǔn)型，占總數(shù)的70.13%,其發(fā)生率為9.407%；有12例患者為血紅蛋白H病，占總數(shù)的7.79%,其發(fā)生率為1.045%；有5例患者為Hb Bart′s水腫，占總數(shù)的3.25%,其發(fā)生率為0.435%。

綜上所述，對于新生兒地貧的診斷可以使用臍血蛋白電泳方式，其簡便、精確，值得在臨床診斷中大力推廣和應(yīng)用。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.044

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)11-1551-02

(收稿日期：2016-01-23修回日期：2016-03-20)