喬 柱，熊 浩，楊正兵

（雅安市人民醫(yī)院燒傷整形科 四川 雅安 625000）

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聯(lián)合外用干擾素軟膏和曲安奈德軟膏抑制兔耳瘢痕增生的實(shí)驗(yàn)研究

喬 柱，熊 浩，楊正兵

（雅安市人民醫(yī)院燒傷整形科 四川 雅安 625000）

［摘要］目的：本實(shí)驗(yàn)研究聯(lián)合外用干擾素軟膏和曲安奈德軟膏對兔耳增生性瘢痕組織的抑制作用。方法：健康新西蘭大耳白兔100只，建立兔耳增生性瘢痕模型，每只兔耳造模一個(gè)，篩選80只達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的增生性瘢痕模型。隨機(jī)分為5組，每組16只計(jì)瘢痕32個(gè)，A組為實(shí)驗(yàn)組聯(lián)合外用干擾素軟膏和曲安奈德軟膏，B組為單用干擾素軟膏，C組為單用曲安奈德軟膏，D組為聯(lián)合肌注曲安奈德和干擾素，E組為空白對照組。用藥3周后對瘢痕進(jìn)行大體觀察，切取瘢痕組織計(jì)算瘢痕增生指數(shù)，masson染色膠原纖維的形態(tài)分布及成纖維細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果：A組與D組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；A組與B、C組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）； A組與E組差異顯著（P＜0.01）。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)認(rèn)為干擾素軟膏和曲安奈德軟膏聯(lián)合外用能有效抑制兔耳瘢痕增生，比單用藥效果更佳，與肌注法比較操作方便，減少并發(fā)癥，減少組織壞死，可為增生性瘢痕的治療提供一種新方法。

［關(guān)鍵詞］干擾素；曲安奈德；增生性瘢痕；成纖維細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)研究

增生性瘢痕（hypertrophic scar， HS）發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全明了，其發(fā)生存在種族差異，具有明顯的家族遺傳傾向，其遺傳模式為常染色體顯性遺傳，不完全外顯［1］，其中P53［2］、Fas基因存在外顯子突變［3-4］。增生性瘢痕極大影響患者肢體功能及外觀，甚至可能癌變［5-6］，因此給患者生活工作帶來巨大的痛苦，但至今無良好的治療措施，是整形修復(fù)外科領(lǐng)域的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。單一手術(shù)切除瘢痕復(fù)發(fā)率很高［7］，常聯(lián)合其它方法如按摩［8-9］、藥物注射、加壓［10］、冷凍、激光［11］、超聲波、硅凝膠膜［12］等。目前主要采取手術(shù)切除，輔以激素注射等綜合治療［13］。一些學(xué)者業(yè)已證明曲安奈德和干擾素注射對抑制瘢痕增生效果明確，聯(lián)合肌注效果更佳。但曲安奈德長期肌注副作用大，如皮膚萎縮、潰瘍壞死、易產(chǎn)生耐藥性等；干擾素肌注量難以把握，操作復(fù)雜，疼痛劇烈，長期應(yīng)用影響機(jī)體的免疫系統(tǒng)等以及其他并發(fā)癥。依此提出外用藥物治療，研究聯(lián)合外用干擾素軟膏和曲安奈德軟膏對兔耳增生性瘢痕組織的抑制作用。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供兔100只兔耳完好，雌雄不計(jì)，年齡8～12月，體重為2.0～2.5kg。由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心代為飼養(yǎng)。

1.2主要儀器及試劑

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)手術(shù)器械包（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心），三星數(shù)碼相機(jī)（自備），干擾素a-2b軟膏（商品名：里亞美，哈藥集團(tuán)生物工程有限公司），曲安奈德軟膏（北京曙光藥業(yè)有限責(zé)任公司），干擾素a-2b（哈藥集團(tuán)生物工程有限公司），曲安奈德（北京曙光藥業(yè)有限責(zé)任公司）。

1.3兔耳瘢痕模型制作

本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的制作是依據(jù)李薈元［14］研究設(shè)計(jì)的制作方法，術(shù)后第4周可見瘢痕形成，瘢痕組織不超過手術(shù)區(qū)域。

1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

實(shí)驗(yàn)共80只兔耳模型分5組，每組16只（100只實(shí)驗(yàn)兔篩選81只達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的瘢痕模型，隨機(jī)切取一只兔左右耳的瘢痕組織予以病理組織學(xué)檢查）。A組為實(shí)驗(yàn)組聯(lián)合外用干擾素軟膏和曲安奈德軟膏，B組為單用干擾素軟膏，C組為單用曲安奈德軟膏，D組為聯(lián)合肌注曲安奈德和干擾素，E組為空白對照組。

1.5用藥方法

術(shù)后第28天兔耳瘢痕形成后，予以A組16只兔共32耳瘢痕創(chuàng)面均勻涂抹干擾素軟膏與曲安奈德軟膏（以1：1的比例混合），每日一次，每次涂抹在瘢痕創(chuàng)面上，然后適當(dāng)?shù)陌慈囫：?～2min幫助藥物吸收，共計(jì)3周。同樣方法B組單用干擾素軟膏，C組單用曲安奈德軟膏。D組注射干擾素與曲安奈德（1：1），每3d一次，每次注射至兔耳瘢痕發(fā)白為止，共3周。E組空白對照組。

1.6取標(biāo)本及處理

實(shí)驗(yàn)第50d，利用空氣栓塞法處死實(shí)驗(yàn)兔子，無菌條件下切取兔耳標(biāo)本，瘢痕周邊帶有部分正常皮膚軟組織及軟骨膜。將標(biāo)本固定在10%的甲醛溶液里，用石蠟包埋，送病理科進(jìn)行HE染色及Msson染色。

2　觀察指標(biāo)

2.1大體觀察

大體表現(xiàn)：采用溫哥華瘢痕評分標(biāo)準(zhǔn)［15］：每天觀察創(chuàng)面的外觀，手術(shù)區(qū)情況，肉芽生長情況，瘢痕組織的顏色、質(zhì)地、大小、厚度等，并每日拍照記錄創(chuàng)面愈合情況及瘢痕形成情況，用藥后各組瘢塊的變化，如顏色、質(zhì)地、大小等。

2.2瘢痕增生指數(shù)HI

依據(jù)Morris等［16］提出的公式HI=A/B，A為瘢痕凸起最高點(diǎn)到兔耳軟骨表面的垂直距離，B為瘢痕周緣正常皮膚皮緣到兔耳軟骨表面的垂直距離。

2.3成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)FBI

依據(jù)Weidner等［17］對瘢痕組織的成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，首先在低倍鏡下尋找HE染色標(biāo)本中清楚顯示并且成纖維細(xì)胞數(shù)最多的區(qū)域，再通過高倍鏡下觀察計(jì)數(shù)4個(gè)不同區(qū)域，結(jié)果取均數(shù)，此數(shù)為該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的成纖維細(xì)胞數(shù)目。

3　統(tǒng)計(jì)方法

本實(shí)驗(yàn)采用PASW Statistics18（SPSS18.0）軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用了t檢驗(yàn)，并且按檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)組與對照組對瘢痕的抑制作用無明顯差異。

4　結(jié)果

4.1一般觀察

A，D給藥組肉眼可見瘢痕明顯變平，變軟，顏色變淡，斑塊體積明顯變?。籅、C給藥組瘢痕較用藥前有所變平，變軟，顏色變淡，斑塊有所縮??；E組空白組無明顯變化。

4.2Masson染色觀察

A、D組膠原纖維排列整齊，形態(tài)纖細(xì)；B、C組膠原纖維排列欠整齊，形態(tài)較A、D組粗；E組膠原纖維藍(lán)染顏色深，纖維排列紊亂，粗大。

4.3瘢痕增生指數(shù)及成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

通過對表1及表2數(shù)據(jù)進(jìn)行軟件分析，認(rèn)為A、D組對瘢痕有明顯的抑制作用，P＞0.05差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A、D組與B、C組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A、D組與E組比較P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，非常顯著；B、C組與E組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見表1～2）。

表1　瘢痕增生指數(shù)（Hl）比較?。ā纒）

表1　瘢痕增生指數(shù)（Hl）比較?。ā纒）

注：A、D之間比較P＞0.05差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對兔耳瘢痕增生的抑制作用相似；A、D組與B，C組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A、D組對兔耳瘢痕增生的抑制作用強(qiáng)于B、C組；A、D組與E組比較P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A、D組對兔耳瘢痕增生的抑制作用明顯強(qiáng)于E組；B、C組與E組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C組對兔耳瘢痕增生的抑制作用強(qiáng)于E組

組別 個(gè)數(shù) 瘢痕增生指數(shù)A組 32 1.089±0.321 B組 32 2.311±0.141 C組 32 2.208±0.124 D組 32 1.056±0.305 E組 32 3.256±0.226

表2　成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)比較?。ā纒）

表2　成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)比較　（±s）

組別 個(gè)數(shù) 成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)A組 32 20.614±2.016 B組 32 26.321±2.101 C組 32 27.485±2.319 D組 32 19.578±2.072 E組 32 33.174±2.136

注：A、D組比較P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A、D組成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)相似；A、D組與B、C組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A、D組成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)少于B、C組；A、D組與E組比較P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A、D組成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯少于B、C組；B、C組與E組比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C組成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)少于E組

5　討論

近幾年對瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究中，可見大量關(guān)于干擾素與曲安奈德的文獻(xiàn)報(bào)道。干擾素是一種分泌蛋白，誘導(dǎo)細(xì)胞分化，抑制成纖維細(xì)胞增殖，抑制膠原合成，促進(jìn)膠原降解，拮抗TGF-β的作用，抑制α-SMA的合成，從而抑制瘢痕增生。曲安奈德可以抑制前膠原基因的表達(dá)，減少透明質(zhì)酸的含量及膠原酶抑制劑，抑制膠原蛋白的合成，促進(jìn)膠原纖維降解，減少膠原纖維含量，使瘢痕變軟；曲安奈德還可以抑制毛細(xì)血管以及成纖維細(xì)胞的增生，減少纖維和細(xì)胞基質(zhì)的形成，對纖維母細(xì)胞DNA有直接抑制作用，抑制肉芽組織形成［18］，最終達(dá)到抑制瘢痕形成的作用?？梢婑：鄣男纬芍匾囊蛩刂皇浅衫w維細(xì)胞，而干擾素和曲安奈德通過不同的原理，不同的機(jī)制最終影響成纖維細(xì)胞，從而抑制瘢痕增生。本實(shí)驗(yàn)即依據(jù)兩種藥的不同機(jī)理聯(lián)合應(yīng)用抑制瘢痕增生，強(qiáng)化藥物的作用，比單一應(yīng)用效果更明顯，達(dá)到抑制瘢痕增生的作用。

本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合外用干擾素軟膏與曲安奈德軟膏抑制兔耳瘢痕增生，從大體及組織病理學(xué)方面與單用藥法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證明聯(lián)合外用干擾素軟膏與曲安奈德軟膏對兔耳瘢痕增生有更明顯抑制作用，使瘢痕組織變軟、變平、顏色變淺，抑制瘢痕組織成纖維細(xì)胞增生，顯著降解兔耳增生性瘢痕組織中的膠原纖維。另外與肌注法比較，外用法操作方便，減少并發(fā)癥，減少組織壞死等優(yōu)勢，可為增生性瘢痕的治療提供一種操作簡單且有效的方法。但用藥的最佳劑量及用藥頻次以及聯(lián)合應(yīng)用時(shí)兩種藥的最佳配比和進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)需下一步深入研究。

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編輯/張惠娟

?皮膚美容?

The experimental study about using topical interferon ointment and triamcinolone acetonide ointment to inhibit hypertrophic scar in the rabbit ears

QIAO Zhu，XIONG Hao，YANG Zheng-bing
（Department of Burn and Plastic Surgery，Ya’an People’s Hospital， Ya’an 625000，Sichuan，China）

Abstract:Objective The experiment studies inhibition on hypertrophic scar in the rabbit ears combined with topical interferon ointment and triamcinolone acetonide ointment. Methods 100 healthy white New Zealand rabbits were used to establish the hypertrophic scar model of rabbit ears， and 80 models of the hypertrophic scar was selected. They were randomly divided into 5 groups （each group 16 ）， experimental group A was combined with topical interferon ointment and triamcinolone acetonide ointment， group B used single interferon ointment， group C used triamcinolone acetonide ointment and group D was injected triamcinolone acetonide and interferon， E group was blank control group. After 3 weeks of treatment， the scars were observed in general， the scar tissue was cut and calculated the number of fibroblasts， and the distribution of collagen fibers in Masson staining was observed. Results There was no significant difference between group A and group D （P＞0.05）； the difference between group A and group B and C was statistically significant （P＜0.05）； group A and group E were significantly different （P＜0.01）. Conclusion Combined with topical interferon ointment and triamcinolone acetonide ointment can effectively inhibit the hypertrophic scar of rabbit ear，was more effectively than single use and more convenient operation than intramuscular injection， it reduces complications and the necrosis， it provides a new method for hypertrophic scar treatment.

Key words:interferon； triamcinolone acetonide； hypertrophic scar； fibroblast； experimental study

［中圖分類號(hào)］R619+.6

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

［文章編號(hào)］1008-6455（2016）05-0060-03

基金項(xiàng)目：雅安市人民醫(yī)院院級(jí)課題（ysy2015005）

［收稿日期］2016-03-02 ［修回日期］2016-04-28