趙　君　胡沛臻

710005 陜西省第二人民醫(yī)院

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胃癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后與幽門螺桿菌相關(guān)性分析及幽門螺桿菌篩查的臨床意義

趙君胡沛臻

710005 陜西省第二人民醫(yī)院

【摘要】目的探討幽門螺桿菌感染與胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系，以及幽門螺桿菌篩查的臨床意義。方法收集138例胃癌患者的組織石蠟標(biāo)本，同時(shí)選擇相應(yīng)的癌旁組織40例作為對(duì)照組，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)組織中幽門螺桿菌的相對(duì)感染量。結(jié)果40例癌旁組織HP相對(duì)感染量為(5.32±1.96),138例胃癌組織HP相對(duì)感染量(13.07±6.11)，兩者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。胃癌患者的1年、2年、3年生存率與HP相對(duì)感染率呈負(fù)相關(guān)，HP相對(duì)感染率越高，則胃癌患者生存率越低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?；颊叩哪挲g、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及HP相對(duì)感染量與胃癌患者的預(yù)后呈正相關(guān)。HP感染陽(yáng)性率男性患者為43.8%，女性患者為41.1%，差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；年齡≤50歲HP陽(yáng)性率為40.4%，年齡>50歲HP陽(yáng)性率為59.6%，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論幽門螺桿菌感染在一定程度上影響胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后，臨床上對(duì)幽門螺桿菌篩查具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】胃癌；幽門螺桿菌；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；臨床篩查

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:743～746)

胃癌是危害我國(guó)人類最嚴(yán)重的惡性腫瘤疾病，其致死率已居首位[1],究其原因，與該疾病的發(fā)現(xiàn)較晚密切相關(guān)，因此早期發(fā)現(xiàn)并采取積極的治療措施是提高患者預(yù)后的重要措施。目前，幽門螺桿菌已被世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)列為第一致癌原[2]。而幽門螺桿菌在胃癌患者的發(fā)展、預(yù)后及篩查方面的作用已逐漸得到認(rèn)可[3]。本研究通過對(duì)胃癌患者癌組織中幽門螺桿菌含量與其疾病發(fā)展和預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行分析，探討幽門螺桿菌在胃癌中的作用。

1材料與方法

1.1臨床資料

收集我院病理科2010年6月至2013年12月期間存檔的胃癌患者的組織石蠟標(biāo)本138例，Hp美蘭染色為陽(yáng)性，同時(shí)選擇癌旁組織40例，Hp美蘭染色為陰性。在選取的病例中，男性94例，女性44例，平均年齡(61±11)歲。癌旁組織是取距離癌癥病灶邊緣5 cm以外的非癌組織。同時(shí)選擇我院健康體檢的患者200例，對(duì)其進(jìn)行幽門螺桿菌篩查，評(píng)定篩查結(jié)果及意義。

1.2方法

石蠟組織切片5 μm 10張裝1.5 mL 滅菌 Ep 管中，應(yīng)用QIAGEN 試劑盒提取DNA，分光光度法測(cè)定DNA 濃度和純度后，分裝并-20 ℃保存。HP以及內(nèi)參基因β-globin引物設(shè)計(jì)均由上海羅氏生物有限公司設(shè)計(jì)合成，均經(jīng)過BLAST軟件驗(yàn)證。內(nèi)參基因β-globin引物序列為： 5’-CAGACACCATGGTGCACCTGAC-3’，5’-CCAATAGGCAGAGAGAGTCAGTG-3’，PCR 產(chǎn)物大小為210 bp，。HPYR1引物序列[4]:5’-GAGCCCTCAAAGAACTGCAC-3’和5’-AATTGGACAGCACCTTCTGG-3’，PCR產(chǎn)物大小173 bp。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 反應(yīng)體系(25 μL)：2×Quantifast SYBR Green PCR Master Mix 12.5 μL，10 μmol 引物各1.0 μL， 模板DNA 3 μL，RNase-free water 7.5 μL； 反應(yīng)條件：95 ℃ 預(yù)變性5 min，95 ℃ 變性10 s，60 ℃ 退火延伸30 s，40 個(gè)循環(huán)；其中模板DNA 濃度不超過100 ng/體系， 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 試劑盒購(gòu)于QIAGEN 公司，儀器為QIAGEN公司的Rotor-Gene Q。

1.3觀察指標(biāo)

經(jīng)美蘭染色法檢測(cè)到的HP呈藍(lán)色，單個(gè)散在或者成片分布，形狀彎曲或呈棒桿狀，分布于胃黏膜表面/腺腔。幽門螺桿菌的相對(duì)感染量=2-△△Ct，△Ct= Ct目的-Ct內(nèi)參，△△Ct=△Ct目的-△△Ct空白,空白對(duì)照組的相對(duì)感染量為1， 即<1為Hp 陰性，>1為Hp 陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取平均值；其中空白對(duì)照組是根據(jù) Hp 美蘭染色為陰性而選取。同時(shí)通過多種隨訪方式獲取患者的疾病進(jìn)展?fàn)顩r，與幽門螺桿菌含量進(jìn)行比較，以分析兩者的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)、Cox回歸模型分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析幽門螺桿菌含量與患者相關(guān)臨床資料和生存率之間的相關(guān)性。

2結(jié)果

2.1HP相對(duì)感染量與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

本研究中HP相對(duì)感染量為0.03～24.59，平均為7.93±7.47，HP半定量PCR擴(kuò)增條帶為173 bp，內(nèi)參β-globin擴(kuò)增條帶為210 bp。HP相對(duì)感染量在浸潤(rùn)深度為T3+T4、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移以及TNM分期為Ⅲ+Ⅳ中明顯增高，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，具體見表1。

表1　HP相對(duì)感染量與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2HP相對(duì)感染率

本研究中40例癌旁組織HP相對(duì)感染量為(5.32±1.96),138例胃癌組織HP相對(duì)感染量(13.07±6.11)，兩者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3HP相對(duì)感染量與胃癌患者生存率的關(guān)系

胃癌患者的1年、2年、3年生存率與HP相對(duì)感染率呈負(fù)相關(guān)，HP相對(duì)感染率越高，則胃癌患者生存率越低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，具體見表2。

表2　HP相對(duì)感染量與胃癌患者生存率的關(guān)系/%

注：P值為三組HP相對(duì)感染量相互比較結(jié)果。

2.4HP感染與胃癌病理特征關(guān)系的Cox回歸分析

本研究中Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)，患者的年齡、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及HP相對(duì)感染量與胃癌患者的預(yù)后呈正相關(guān)，Cox多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)患者的年齡、TNM分期以及HP相對(duì)感染量使得胃癌患者的死亡危險(xiǎn)性增加，提示年齡、TNM分期以及HP相對(duì)感染量為胃癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的不利因素，見表3。

表3　HP感染與胃癌病理特征關(guān)系的Cox回歸分析

2.5HP篩查效果分析

本研究對(duì)200例健康體檢者篩查HP發(fā)現(xiàn)，HP感染陽(yáng)性率男性患者為43.8%，女性患者為41.1%，差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；年齡≤50歲HP陽(yáng)性率為40.4%，年齡>50歲HP陽(yáng)性率為59.6%，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

胃癌已對(duì)人們的健康造成了嚴(yán)重的影響，幽門螺桿菌已被很多學(xué)者認(rèn)為是胃癌發(fā)生的啟動(dòng)子之一，上個(gè)世紀(jì)WHO宣布HP是人類胃癌的Ⅰ類致癌源[5]，但其致癌機(jī)制尚不明確，可能是途徑是幽門螺桿菌感染誘發(fā)慢性胃炎，引起胃粘膜的損傷，促進(jìn)胃粘膜細(xì)胞的增殖，從而引發(fā)各種癌基因如ARIDIA的突變，導(dǎo)致癌癥的發(fā)生[6]。

臨床上已有大量研究資料表明HP與胃癌的發(fā)生關(guān)系密切[7-8]，HP感染的患者胃腺癌的發(fā)生率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于未感染者，且根除HP后，胃癌的發(fā)生率則降低。本研究中40例癌旁組織HP相對(duì)感染量為5.32±1.96,138例胃癌組織HP相對(duì)感染量13.07±6.11，這與文獻(xiàn)報(bào)道相一致。HP可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，HP也可以造成淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，從而導(dǎo)致胃癌的發(fā)生[9-10]，且HP具有的多種細(xì)胞毒素如細(xì)胞空泡毒素可致胃黏膜發(fā)生炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致胃癌的發(fā)生發(fā)展[11]。通過本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的生存率與患者的浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期以及HP相對(duì)感染量相關(guān)?；颊叩慕?rùn)深度達(dá)到(T3+T4)、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移以及TNM分期為Ⅲ+Ⅳ明顯增加了患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)，這提示我們上述因素均為胃癌發(fā)生發(fā)展的不利因素。本研究中HP相對(duì)感染量為1～15胃癌組患者的生存率相較于HP相對(duì)感染量為15～25胃癌組患者的生存率增加約1倍，回歸系數(shù)約為1.061，這提示我們HP感染為胃癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這與吳軍等[12]研究認(rèn)為的HP感染與胃癌組織浸潤(rùn)深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否有關(guān)的結(jié)果相一致。胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后一直是臨床上關(guān)心的重點(diǎn)，關(guān)于HP感染與胃癌預(yù)后的研究報(bào)道并未得出統(tǒng)一的結(jié)論，但普遍為臨床上接受的觀點(diǎn)為HP陽(yáng)性的胃癌患者較之HP陰性的胃癌患者預(yù)后要好得多[13],但甘露等[14]則認(rèn)為HP感染并非是胃癌患者預(yù)后良好與否的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。關(guān)于HP感染對(duì)胃癌預(yù)后影響的研究依然是以后臨床研究的焦點(diǎn)。

HP感染是慢性胃腸病的主要病因，在健康人群中普遍存在，但患病率較低，而且常規(guī)體檢中也未將其列為必選項(xiàng)目，但國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道HP與胃癌的相關(guān)性值得引起我們注意，對(duì)健康人群進(jìn)行HP篩查不失為一個(gè)發(fā)現(xiàn)高危人群的手段。通過本研究發(fā)現(xiàn)，HP感染陽(yáng)性率在性別上不存在差異，男性患者為43.8%，女性患者為41.1%，但年齡≤50歲HP陽(yáng)性率為40.4%，年齡>50歲HP陽(yáng)性率為59.6%，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與賈繼芳[15]的研究結(jié)果基本一致。年齡同樣為胃癌的高危危險(xiǎn)因素，所以對(duì)健康人群進(jìn)行HP篩查可以有效提高對(duì)胃癌的早期診斷，從而使得患者獲得有效的治療，獲得良好的預(yù)后，提高患者的生存質(zhì)量。

綜上所述，幽門螺桿菌感染在胃癌的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后中獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)幽門螺桿菌篩查可以有效的干預(yù)及預(yù)防胃癌的發(fā)生。

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(編輯：吳小紅)

Correlation Analysis of Helicobacter Pylori Infection and Occurrence and Prognosis of Gastric Cancer and the Clinical Significance of Helicobacter Pylori Screening

ZHAOJun,HUPeizhen.

TheSecondPeople'sHospitalofShaanxi,Xi’an,710005

【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between helicobacter pylori infection and the occurrence and prognosis of gastric cancer,and the clinical significance of helicobacter pylori screening.MethodsRelative infection of helicobacter pylori was examined by real-time fluorescent quantitative PCR in 138 cases of gastric cancer tissues(test group) and 40 cases of adjacent non-cancerous tissues(control group) of paraffin embedded specimens.ResultsThe relative infection rate of helicobacter pylori in 40 cases of adjacent tissues was (5.32±1.96),and the relative infection rate of helicobacter pylori in 138 gastric cancer tissues was (13.07±6.11),and the difference was statistically significant (P<0.05).The 1-,2-,3-year survival rates of gastric cancer were negatively correlated with the relative infection rate of helicobacter pylori,the higher the helicobacter pylori relative infection rate,the lower the survival rate of gastric cancer patients,the difference was statistically significant (P<0.05).Age,degree of invasion,lymph node metastasis,TNM staging and helicobacter pylori relative infection were positively correlated with the prognosis of gastric cancer patients.Helicobacter pylori infection positive rate in male patients was 43.8%,and in female patients was 41.1%,the difference was not statistically significant;the helicobacter pylori positive rate of patients ≤50 was 40.4%,the helicobacter pylori positive rate of patients >50 was 59.6%,the difference was statistical significance (P<0.05).ConclusionHelicobacter pylori infection can affect the development and prognosis of gastric cancer to certain extent,and helicobacter pylori screening has important clinical significance.

【Key words】Gastric cancer;Helicobacter pylori;Real-time fluorescent quantitative PCR;Clinical screening

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.014

中圖分類號(hào)：R735.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2016)05-0743-04

(收稿日期2015-08-07修回日期 2016-02-14)