張永琦　王　敏　朱艷麗　史　聰　閆效宇　卓玉蓮

110004 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院

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OCT4及BIM蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性研究

張永琦王敏朱艷麗史聰閆效宇卓玉蓮

110004 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院

【摘要】目的研究OCT4及Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性，并探討兩者在化療耐藥中的影響。方法采用免疫組化sp法，對(duì)67例卵巢漿液性囊腺癌(化療耐藥30例，敏感37例)、卵巢漿液性囊腺瘤石蠟標(biāo)本10例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤者石蠟標(biāo)本10例及正常卵巢組織石蠟標(biāo)本10例，進(jìn)行OCT4及Bim蛋白表達(dá)情況檢測(cè)。結(jié)果OCT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞減，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組陽(yáng)性表達(dá)率分別為83.33%和45.95%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。Bim蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞增，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組陽(yáng)性表達(dá)率分別為43.33%和70.27%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)。在化療耐藥卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(γ=0.03;P=0.875)；在化療敏感卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)亦無(wú)明顯相關(guān)性(γ=0.006;P=0.97)。OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)與卵巢漿液性癌的發(fā)展呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。OCT4蛋白與Bim蛋白與卵巢漿液性癌臨床病理因素?zé)o關(guān)。結(jié)論OCT4及Bim蛋白與卵巢漿液性癌的發(fā)生與發(fā)展有關(guān).OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)在卵巢漿液性癌的發(fā)展呈負(fù)相關(guān)。OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相互作用。OCT4基因高表達(dá)，Bim基因低表達(dá)可能是造成卵巢漿液性癌對(duì)紫杉醇+鉑類(lèi)化療耐藥的因素之一。

【關(guān)鍵詞】OCT4;Bim;免疫組化；卵巢癌;化療;耐藥;敏感

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:723～726)

卵巢癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤,死亡率居?jì)D科惡性腫瘤之首?；熓侵委熉殉舶┲匾侄沃?患者在預(yù)后方面主要取決于對(duì)化療的敏感性。但是由于原發(fā)性與繼發(fā)性耐藥的關(guān)系，化療耐藥是成為卵巢癌治愈率的關(guān)鍵因素。

OCT4是1種全能性或多能性干細(xì)胞標(biāo)記物，與多種腫瘤的形成與發(fā)展及化療耐藥相關(guān)。相關(guān)研究表明，在卵巢癌的發(fā)展機(jī)制中OCT4基因是一影響因素。Bim是Bel-2家族中僅含有一個(gè)BH3結(jié)構(gòu)域的蛋白，廣泛分布在機(jī)體各種組織，對(duì)防御自身免疫、維持造血細(xì)胞穩(wěn)態(tài)有重要意義，并具有腫瘤抑制因子活性[1]近年研究發(fā)現(xiàn)，OCT4基因在多種惡性上皮性腫瘤高表達(dá)，并與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后呈高度正相關(guān)[2-7]。Bim基因具有助凋亡活性，對(duì)防御自身免疫、維持造血細(xì)胞穩(wěn)態(tài)有重要意義，并具有腫瘤抑制因子活性。有研究顯示在Bim蛋白表達(dá)的改變促使多種癌癥的發(fā)生[8-9]。本研究采用免疫組織化學(xué)方法(S-P免疫組化法)，檢測(cè)OCT4、Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)，討論OCT4及Bim蛋白與卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展之間的關(guān)系。通過(guò)研究我們可以控制OCT4、Bim蛋白的表達(dá)情況，將對(duì)卵巢癌治療有重要意義。

1材料與方法

1.1資料來(lái)源

選擇于2004年1月至2010年10月期間在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦科行卵巢癌分期術(shù)或腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)的卵巢漿液性囊腺癌初發(fā)患者手術(shù)的石蠟標(biāo)本共90例，經(jīng)病理學(xué)檢查確診、經(jīng)隨訪(fǎng)后，確定術(shù)后TP化療最少6次且化療期間未使用其它化療藥物或放療的患者，排除不符合條件者，術(shù)后單純行紫杉醇+鉑類(lèi)方案化療最少6次者為67例，23例不符合條件排除。67例患者根據(jù)2011年版美國(guó)NCCN分為化療敏感組37例，化療耐藥組30例。同時(shí)選取卵巢漿液性囊腺瘤石蠟標(biāo)本10例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤者石蠟標(biāo)本10例及正常卵巢組織石蠟標(biāo)本10例。入選的患者年齡、 腫瘤大小、 位置差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.2試劑和儀器

兔抗人OCT4多克隆抗體、兔抗人AKT1多克隆抗體 (北京博奧森生物) ； SP免疫組化檢測(cè)試劑盒及DAB顯色試劑盒 (北京中杉金橋) ； PBS緩沖液 (武漢博士得) ； 其他試劑及儀器由本院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3方法

采用免疫組化SP法，嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每批實(shí)驗(yàn)中均按比例選擇每組切片，每批均設(shè)對(duì)照組。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。DAB 顯色后用蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封固后鏡檢。

1.4判斷標(biāo)準(zhǔn)

OCT4蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。Bim蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。以出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性染色。按半定量積分法判斷蛋白表達(dá)。按染色強(qiáng)度評(píng)分： 0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分： 0分為無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，1分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%，2分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%～50%，3分為>50%～75%，4分為>75%。上述兩項(xiàng)評(píng)分≤3為陰性，>3為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用χ2檢驗(yàn)、 Spearman 等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同卵巢組織中OCT4蛋白和Bim蛋白的表達(dá)情況

OCT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞減，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組其陽(yáng)性表達(dá)率分別為83.33%和45.95%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。Bim蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞增，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組其陽(yáng)性表達(dá)率分別為40.33%和70.27%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)，見(jiàn)表1。OCT4與Bim蛋白在正常卵巢、漿液性囊腺瘤、交界性漿液性囊瘤、漿液性囊腺癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(γ=-1.7，P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　不同卵巢組織中OCT4蛋白和Bim蛋白的

2.2OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腺癌化療耐藥和化療敏感組織中的相關(guān)性

對(duì)耐藥組與敏感組免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行半定量分析積分，繪制出OCT4與Bim蛋白之間的散點(diǎn)圖,并進(jìn)行 Spearman 等級(jí)相關(guān)分析，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在化療耐藥卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(γ=0.03;P=0.875)；在化療敏感卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)亦無(wú)明顯相關(guān)性(γ=0.006;P=0.97)，見(jiàn)圖1～3。

2.3OCT4蛋白和Bim蛋白與卵巢漿液性腺癌臨床病理特征的關(guān)系

OCT4蛋白與Bim蛋白在卵巢漿液性腺癌的臨床病理特征無(wú)明顯相關(guān) (P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2　OCT4及Bim 蛋白與卵巢漿液性癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系/例

圖1　OCT4、Bim蛋白在正常卵巢、漿液性囊腺瘤、交界性漿

圖2　OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性癌化療

3討論

OCT4是1種全能或多能性干細(xì)胞標(biāo)記物，屬于V

圖3　OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性癌化療

類(lèi)蛋白。OCT4 蛋白定位于胚胎細(xì)胞和胚泡的細(xì)胞核內(nèi)，在維持干細(xì)胞的多能性以及自我更新能力上起到重要作用[10]。研究表明，OCT4具有雙重調(diào)節(jié)作用，既能維持干細(xì)胞的未分化狀態(tài)，又能控制干細(xì)胞向某一種細(xì)胞類(lèi)型分化。OCT4是1種全能性或多能性干細(xì)胞標(biāo)記物，與多種腫瘤的形成與發(fā)展及化療耐藥相關(guān)。OCT4促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增值的機(jī)制可能是通過(guò)激活PI3K通路完成的[11]。PI3K通調(diào)控腫瘤生長(zhǎng)的關(guān)鍵分子[12]。Bim 是1種重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白,在造血細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、 防止自身免疫及腫瘤的發(fā)生中有著重要的作用。一定的凋亡刺激能通過(guò)各種信號(hào)途徑激活Bim分子,活化的 Bim 分子通過(guò)與 Bcl-2/Bax 的相互作用激活 Bax,引起細(xì)胞凋亡[13-15].Bim蛋白是PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中最重要的蛋白。AKT分子包含pH結(jié)構(gòu)域、 中心催化結(jié)構(gòu)域和羧基端調(diào)AKT1是AKT的亞型之一，定位于染色體14q32，具有廣泛組織分布性，能在胚胎發(fā)育和生長(zhǎng)方面起決定性作用[16]。激活的AKT能對(duì)其下游多種底物進(jìn)行調(diào)控，主要發(fā)揮抑制凋亡的作用，進(jìn)而促進(jìn)耐藥性的產(chǎn)生[17]。近年研究的表明，它在血管再生、 新陳代謝、 腫瘤遷移中的作用逐步被發(fā)現(xiàn)[18]。

本研究發(fā)現(xiàn)OCT4基因?yàn)榘┗?，Bim基因?yàn)橐职┗颉CT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中成負(fù)相關(guān)。說(shuō)明在OCT4與Bim蛋白表達(dá)通路上，存在某一基因共同調(diào)節(jié)它們的表達(dá)。為臨床預(yù)測(cè)和防止腫瘤的發(fā)生提供依據(jù)。OCT4基因高表達(dá)，Bim基因低表達(dá)可能是造成卵巢漿液性癌對(duì)紫杉醇+鉑類(lèi)化療耐藥的因素之一，為臨床耐藥性提供預(yù)測(cè)指標(biāo)。

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(編輯：吳小紅)

Studying of the Expression of OCT4 and BIM Protein in Ovarian Cancer and Their Correlation

ZHANGYongqi,WANGMin,ZHUYanli,etal.

ShengjingHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,110004

【Abstract】ObjectiveTo study the expression of the OCT4 and BIM protein in ovarian cancer and their relation，and to explore its effect on the chemotherapy drug resistance.MethodsOCT4 and BIM protein expression of 67 cases of ovarian serous cystadenocarcinoma(chemotherapy drug resistance 30 cases,sensitive 37 cases)and 10 cases of ovarian serous cystic adenoma paraffin specimens,10 cases of ovarian serous border pouch adenoma paraffin specimens and 10 cases of normal ovarian tissue paraffin specimens were det ected.ResultsThe positive expression rate of OCT4 protein decreased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002);The positive expression rates of OCT4 protein in the resistant group and sensitive group were 83.33% and 45.95%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.002).The positive expression rate of BIM protein increased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002).In the resistant group and sensitive group,the positive expression rate of BIM protein were 43.33% and 70.27%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.026).In the chemotherapy drug-resistant ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression had no significant correlation with Bim protein expression(γ=0.03;P=0.875);In chemotherapy sensitive ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression and Bim protein expression had no obvious correlation(γ=0.006;P=0.97).OCT4 protein expression and Bim protein expression in ovarian serous carcinoma had negative correlation(P<0.01).OCT4 and Bim protein expression had no correlation with clinical factors.ConclusionOCT4 and BIM protein expression are associated with the occurrence and development of ovarian serous carcinoma.Bim and OCT4 protein expression are negatively correlated with the development of ovarian serous carcinoma.OCT4 and Bim protein expression are interacted in ovarian serous tumor occurrence and development.High OCT4 gene expression and low Bim gene expression may be factor of resistance of ovarian serous carcinoma to paclitaxel plus platinum chemotherapy.

【Key words】OCT4;Bim;Immunohistochemical;Ovarian cancer;Chemotherapy;Drug resistance;Sensitive

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.008

中圖分類(lèi)號(hào)：R737.31

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2016)05-0723-04

(收稿日期2015-07-15修回日期 2016-01-05)