史　紅，趙文霞，方士華，于曉雯，劉雪梅，佴科軍

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水通道蛋白1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在宮頸鱗狀上皮癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性

史紅1，趙文霞1，方士華1，于曉雯1，劉雪梅2，佴科軍3

[摘要]目的：探討水通道蛋白1(AQP1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在宮頸鱗狀上皮癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)41例宮頸鱗狀上皮癌、55例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和22例正常宮頸組織中AQP1、VEGF的表達(dá),探討二者在宮頸癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性。結(jié)果：AQP1在宮頸鱗狀上皮癌、CIN的陽(yáng)性率分別為90.24%、81.82%，均顯著高于正常宮頸組織的40.91%(P<0．01);VEGF在宮頸鱗狀上皮癌、CIN的陽(yáng)性率分別為100.00%、96.36%，顯著高于正常宮頸組織的63.64%(P<0.01);AQP1在宮頸鱗狀上皮癌和CIN組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而宮頸鱗狀上皮癌組織中VEGF表達(dá)均明顯高于CIN組織(P<0.01);AQP1、VEGF的表達(dá)與宮頸鱗狀上皮癌患者的年齡和組織學(xué)分化程度間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);AQP1和VEGF的表達(dá)呈明顯正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。結(jié)論：AQP1和VEGF在宮頸鱗狀上皮癌和CIN組織中表達(dá)上調(diào)，可能與宮頸鱗狀上皮癌的發(fā)生、發(fā)展有一定關(guān)系。

[關(guān)鍵詞]宮頸鱗狀上皮癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；水通道蛋白1；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

水通道蛋白1(AQP1)是第1個(gè)被鑒定的水通道蛋白，除中樞神經(jīng)外，AQP1在全身微血管內(nèi)皮細(xì)胞上均有表達(dá)，在惡性腫瘤的增殖性微血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)更強(qiáng)烈[1]。有研究[2-3]表明，AQP1在疾病狀態(tài)下改變了新生血管的形成，促進(jìn)腫瘤血管的生長(zhǎng)，且對(duì)血管的高滲透性和高組織間液壓有著重要意義。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性強(qiáng)效有絲分裂原，在體內(nèi)可誘導(dǎo)血管發(fā)生，研究[4]表明在許多腫瘤組織中VEGF表達(dá)增高，并且其水平的高低與腫瘤的某些生物學(xué)行為有密切關(guān)系。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)(免疫組化)技術(shù)檢測(cè)AQP1和VEGF在宮頸鱗狀上皮癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和正常宮頸組織中的表達(dá)及相關(guān)性。現(xiàn)作報(bào)道。

1資料與方法

1.1一般資料取保存在上海市江灣醫(yī)院病理科1994年1月至2014年4月手術(shù)及宮頸活檢標(biāo)本，其中隨機(jī)抽取正常宮頸組織22例，年齡37～61歲；從35歲以上診斷為CIN患者中隨機(jī)抽取55例，其中高級(jí)別病變(HSIL)29例，低級(jí)別病變(LSIL)26例，年齡36～79歲；宮頸鱗狀上皮癌41例，其中中分化32例，低分化9例，年齡25～81歲。3組患者年齡均具有可比性。 所有患者術(shù)前均未接受放、化療。所有宮頸組織經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，病理診斷明確，特殊病例經(jīng)復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科、第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院病理科和上海市病理讀片會(huì)會(huì)診。

1.2方法

1.2.1主要試劑鼠抗人AQP1多克隆一抗(sc-25287)和羊抗鼠二抗(sc-2005)均由美國(guó)Santa Cruz公司提供；鼠抗人VEGF多克隆一抗(Ab1316)由英國(guó)Abcam公司提供，羊抗鼠二抗(sc-2005)由美國(guó)Santa Cruz公司提供；正常山羊血清、3,3′-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)和蘇木精均購(gòu)自碧云天公司。

1.2.2檢測(cè)方法采用二步法DAB顯色檢測(cè)。操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，其中一抗稀釋度為1∶100，以已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.3結(jié)果判讀AQP1、VEGF免疫組化染色以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。高倍鏡(×400)視野下綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行半定量測(cè)定，不著色0分,著色淡1分,著色適中2分,著色深3分；每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)視野,計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占比例。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為0分,5%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分，>75%為4分。兩項(xiàng)評(píng)分相加，0～1分為陰性(-),2～3分為弱陽(yáng)性(1+),4～5分為中陽(yáng)性(2+),6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(3+)[5]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用秩和檢驗(yàn)和等級(jí)相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1不同性質(zhì)宮頸組織中AQP1和VEGF的表達(dá)比較AQP1主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞，定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜(見圖1～3)；VEGF在正常宮頸組織和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，尤其在腫瘤細(xì)胞和CIN異型細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上表達(dá)強(qiáng)烈(見圖4～6)。在宮頸鱗狀上皮癌和CIN組織中AQP1的表達(dá)均顯著高于正常宮頸組織(P<0．01)，VEGF在宮頸鱗狀上皮癌和CIN組織中的表達(dá)均顯著高于正常宮頸組織(P<0．01)；AQP1在宮頸鱗狀上皮癌和CIN組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而宮頸鱗狀上皮癌組織中VEGF表達(dá)均明顯高于CIN組織(P<0.01)(見表1)。

2.2宮頸鱗狀上皮癌患者不同臨床病理參數(shù)癌組織中AQP1和VEGF的表達(dá)比較和相關(guān)性分析宮頸鱗狀上皮癌患者年齡與組織學(xué)分化程度間AQP1和VEGF的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表2)。AQP1和VEGF在宮頸鱗狀上皮癌組織的表達(dá)呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.407,P<0.01)。

3討論

3.1AQP1與宮頸鱗狀上皮癌的關(guān)系研究[6]證實(shí)腫瘤組織中AQP1高表達(dá)，且表達(dá)量與腫瘤惡性程度有直接關(guān)系，惡性程度越高，AQP1表達(dá)量越高。AQP1使腫瘤血管通透性增加，促進(jìn)水在腫瘤細(xì)胞間的快速轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)腫瘤血管生成，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[7]。有研究[8]發(fā)現(xiàn)，AQP1在宮頸鱗狀上皮癌、CIN組織中的表達(dá)顯著高于正常宮頸組織，但在鱗狀上皮癌、CIN組織中的表達(dá)無(wú)差異；AQP1的表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但與患者年齡、腫瘤大小以及分級(jí)無(wú)關(guān)。本研究除因部分患者轉(zhuǎn)往外院治療，臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移資料不全未作相關(guān)分析外，AQP1在宮頸鱗狀上皮癌、CIN和正常宮頸組織的表達(dá)以及與宮頸鱗狀上皮癌患者年齡、組織分化程度的研究結(jié)果與之一致。AQP1可能與宮頸鱗狀上皮癌發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。

表1　不同性質(zhì)宮頸組織中APQ1和VEGF的表達(dá)比較(n)

兩兩比較秩和檢驗(yàn)：與正常宮頸組織比較**P<0.01 ；與CIN組織比較△△P<0.01

表2　宮頸鱗狀上皮癌患者不同臨床病理參數(shù)在癌組織中AQP1和VEGF的表達(dá)比較(n)

3.2VEGF與宮頸鱗狀上皮癌的關(guān)系VEGF是目前已知的作用最強(qiáng)的促血管生成因子，它起著使血管內(nèi)皮增生和通透性增加的雙重作用，尤其是微小血管的通透性，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和新生毛細(xì)血管網(wǎng)的建立提供營(yíng)養(yǎng)，在腫瘤血管的形成中起重要作用。其表達(dá)水平反映了腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管重建的水平，直接反映腫瘤生長(zhǎng)的速度和轉(zhuǎn)移的傾向[3,9]。有研究[10-11]發(fā)現(xiàn)，VEGF在宮頸癌中高表達(dá)，與患者年齡、病理分型、組織學(xué)分化程度無(wú)明顯相關(guān)，但與有無(wú)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)在宮頸鱗狀上皮癌和CIN組織中的VEGF表達(dá)均顯著高于正常宮頸組織(P<0.01)，表明VEGF可能與宮頸鱗狀上皮癌發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。

3.3AQP1與VEGF在宮頸鱗狀上皮癌表達(dá)的相關(guān)性PAN等[12]研究結(jié)果顯示，在腫瘤組織內(nèi)AQP1表達(dá)水平和微血管密度呈正相關(guān)，并且瘤內(nèi)AQP1和微血管密度均和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)。有研究[13]發(fā)現(xiàn)，宮頸鱗狀上皮癌組織中AQP1、VEGF呈高表達(dá),二者的表達(dá)存在正相關(guān)，提示這兩個(gè)因子在宮頸鱗狀上皮癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和血管生成的作用。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸鱗狀上皮癌和CIN組織中AQP1與VEGF的表達(dá)較正常宮頸組織顯著升高(P<0.01)，對(duì)宮頸鱗狀上皮癌中AQP1與VEGF的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn)，二者的表達(dá)呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.407，P<0．01)。提示在功能上可能存在協(xié)同作用，共同促進(jìn)宮頸鱗狀上皮癌的發(fā)生、發(fā)展。對(duì)AQP1與VEGF的更深入研究可能為宮頸鱗狀上皮癌的治療提供新的分子靶點(diǎn)和策略。

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(本文編輯周洋)

Expressions of AQP1 and VEGF in cervical squamous cell carcinoma tissue and their correlations

SHI Hong1,ZHAO Wen-xia1，F(xiàn)ANG Shi-hua1,YU Xiao-wen1,LIU Xue-mei2,NAI Ke-jun3

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,2.DepartmentofPathology,ShanghaiJiangwanHospital,Shanghai200434; 3.DepartmentofGynecology,BranchofShanghaiFirstPeople′sHospital,Shanghai200120,China)

[Abstract]Objective:To investigate the expressions of aquaporin1(AQP1) and vascular endothelial growth factor(VEGF) in cervical squamous cell carcinoma tissue and their correlations.Methods:The expressions of AQP1 and VEGF in 41 samples of cervical squamous cell carcinoma tissues,55 samples of cervical intraepithelial neoplasisa(CIN) tissue and 22 samples of normal cervical tissue were detected by immunohistochemical method,and their correlations were analyzed.Results:The positive rates of AQP1 in cervical squamous cell carcinoma tissue and CIN tissue were 90.24% and 81.82%,respectively,which was higher than that in normal cervical tissue(40.91%)(P<0.01).The positive rates of VEGF in cervical squamous cell carcinoma tissue and CIN tissue were 100.00% and 96.36%,respectively,which was significantly higher than that in normal cervical tissue(63.64%)(P<0.01).The differences of the expressions of AQP1 and VEGF between cervical squamous cell carcinoma and CIN tissue were not statistically significant(P>0.05).The differences of the expressions of AQP1 in different ages and histological grades in cervical squamous cell carcinoma tissue were not statistically significant(P>0.05),the expression of AQP1 was significantly positive correlation with the expression of VEGF(P<0.01).Conclusions:The expressions of AQP1 and VEGF in cervical squamous cell carcinoma tissue and CIN tissue are upregulated,which may be related to the occurrence and development of the cervical squamous carcinoma.

[Key words]cervical squamous cell carcinoma;cervical intraepithelial neoplasisa;aquaporin1;vascular endothelial growth factor

[文章編號(hào)]1000-2200(2016)03-0314-04·臨床醫(yī)學(xué)·

[收稿日期]2015-04-07

[基金項(xiàng)目]上海市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研項(xiàng)目(20134139)

[作者簡(jiǎn)介]史紅(1964-)，女，副主任醫(yī)師.[通信作者] 佴科軍，副主任醫(yī)師.E-mail:jiansong81081@yeah.net

[中圖法分類號(hào)]R 737.33

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

DOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.03.011

[作者單位] 上海市江灣醫(yī)院 1.婦產(chǎn)科，2.病理科，200434；3.上海市第一人民醫(yī)院分院 婦科，200120