楊雪峰 劉麗偉 李愛杰

C-FOS、STAT 3在PCOS患者著床窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá)及意義

楊雪峰 劉麗偉 李愛杰

目的 探討C-FOS，STAT 3對(duì)多囊卵巢綜合征（PCOS）患者窗口期子宮內(nèi)膜容受性的影響。方法 選取15例已婚PCOS患者（PCOS組），14例其他原因?qū)е虏辉械膵D女（對(duì)照組），在窗口期收集其子宮內(nèi)膜組織，經(jīng)HE染色判斷組織學(xué)分期，用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)C-FOS，STAT 3在窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá)。結(jié)果 PCOS組窗口期C-FOS表達(dá)高于對(duì)照組，STAT 3表達(dá)低于對(duì)照組，二者呈顯著負(fù)相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論C-FOS高表達(dá)、STAT 3低表達(dá)可能影響PCOS組窗口期子宮內(nèi)膜容受性的建立，是造成PCOS患者妊娠率低、流產(chǎn)率高的原因之一。

多囊卵巢綜合征；子宮內(nèi)膜容受性；C-FOS因子；STAT 3因子

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是常見的內(nèi)分泌、代謝紊亂性疾病，主要以月經(jīng)不規(guī)則，不孕，雄激素過高，高胰島素血癥為臨床特征。PCOS在生育年齡女性的發(fā)病率為6%～8%，占無排卵性不孕的50%～70%，約50%PCOS患者有復(fù)發(fā)性流產(chǎn)史。具有妊娠率低、流產(chǎn)率高的特點(diǎn)。本研究用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)C-FOS，STAT 3在促排卵后PCOS患者和其他原因不孕患者著床窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá)，探討PCOS患者經(jīng)過糾正內(nèi)分泌紊亂后，妊娠率低、流產(chǎn)率高的可能原因，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取2014年3月～2015年2月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院門診就診的15例已婚PCOS患者為實(shí)驗(yàn)組。符合條件：診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2003年鹿特丹標(biāo)準(zhǔn)，年齡25～35歲，平均年齡（28.8±3.3）歲。經(jīng)藥物治療后，月經(jīng)規(guī)律，內(nèi)分泌恢復(fù)正常，自然排卵或促排卵治療后正常排卵，丈夫精液檢查正常，無其他內(nèi)科合并病癥等。隨機(jī)抽取同期在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院門診就診的14例因輸卵管或男方因素導(dǎo)致不孕患者為對(duì)照組。符合條件：年齡25～35歲，平均年齡（27.7±2.5）歲。月經(jīng)規(guī)律、內(nèi)分泌正常，正常排卵，近3個(gè)月未用過激素類藥物，陰道B超檢查未發(fā)現(xiàn)子宮、卵巢器質(zhì)性病變，無其他內(nèi)科合并癥及并發(fā)癥等。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本采集 PCOS組采用自然周期排卵或者用促排卵治療方案[克羅米芬（CC）50 mg/d，月經(jīng)周期第5～9天連續(xù)服用]，月經(jīng)第12天開始，經(jīng)陰道B超監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育及子宮內(nèi)膜厚度。當(dāng)卵泡直徑為18～23 mm，子宮內(nèi)膜厚度大于8 mm時(shí)肌肉注射人絨毛膜促性腺激素HCG 10000 U，指導(dǎo)患者同房。于注射HCG后第3天，經(jīng)陰道B超檢查確認(rèn)優(yōu)勢(shì)卵泡已破。對(duì)照組于月經(jīng)周期第12天開始經(jīng)陰道B超監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育及子宮內(nèi)膜厚度，于排卵日指導(dǎo)患者同房。PCOS組和對(duì)照組均于著床窗口期，即排卵后第8～10天，晨空腹抽取肘靜脈血3 mL，檢測(cè)血E2、P、HCG水平。當(dāng)血THCG＜30 IU/L時(shí)（本院檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)），認(rèn)為患者本月無妊娠可能。并于抽血當(dāng)日下午，在無菌操作下，用一次性子宮內(nèi)膜取樣管吸取少許子宮內(nèi)膜組織。將所取新鮮子宮內(nèi)膜組織立即放入10%甲醛溶液中固定，常規(guī)梯度酒精脫水后石蠟包埋，切片，HE染色，經(jīng)同一個(gè)經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生觀察子宮內(nèi)膜病理組織學(xué)情況。本研究所有實(shí)驗(yàn)對(duì)象均于取樣前簽署知情同意書。

1.2.2 子宮內(nèi)膜C-FOS，STAT 3的測(cè)定 C-FOS，STAT 3一抗均用鼠抗人單克隆抗體工作液，二抗均用羊抗鼠工作液，按照標(biāo)準(zhǔn)免疫組化SP法進(jìn)行操作。

1.2.3 結(jié)果判定 免疫組化SP法染色切片呈棕黃色（低表達(dá)）或棕褐色（高表達(dá)）。每張切片分別選取5個(gè)不重疊的陽性區(qū)域（高倍鏡視野下，40×10倍），用病理圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)其表達(dá)情況。每個(gè)因子的平均光密度值（OD）表示該因子在相應(yīng)組子宮內(nèi)膜的表達(dá)情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，定性資料比較采用Fishers確切概率法，相關(guān)性分析用pearson相關(guān)性分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組著床窗口期血雌激素（E2）、孕激素（P）水平比較 著床窗口期PCOS組血清E2值為（267.3±19.7），對(duì)照組為（225.5±18.6），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。著床窗口期PCOS組血清P值為（11.2±2.6），對(duì)照組P值為（13.5±2.5），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 2組子宮內(nèi)膜病理組織學(xué)結(jié)果 對(duì)照組子宮內(nèi)膜分泌早期4例，分泌晚期10例，分泌反應(yīng)欠佳3例（占21.4%）。PCOS組分泌早期3例，分泌晚期12例，分泌反應(yīng)欠佳10例（占66.7%），2組比較差異具有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。見表2。

表1 2組著床窗口期血清E2、P水平比較（±s）

表1 2組著床窗口期血清E2、P水平比較（±s）

組別例數(shù)E2(ng/L)P(μg/L) PCOS組15267.3±19.711.2±2.6對(duì)照組14225.5±18.613.5±2.5 t值5.880-2.359 P值＜0.01＜0.05

表2 2組子宮內(nèi)膜病理組織學(xué)結(jié)果(n)

2.3 子宮內(nèi)膜組織中C-FOS，STAT 3的表達(dá) 2組子宮內(nèi)膜組織中，C-FOS主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核，STAT 3表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞核，均呈棕黃色或棕褐色。PCOS組C-FOS表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；STAT 3表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表3。二者表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.985，P＜0.01）。

表3 PCOS組和對(duì)照組窗口期子宮內(nèi)膜C-FOS和STAT 3的表達(dá)（±s）

表3 PCOS組和對(duì)照組窗口期子宮內(nèi)膜C-FOS和STAT 3的表達(dá)（±s）

組別例數(shù)C-FOS（OD）STAT 3(OD) PCOS組150.473±0.0360.048±0.005對(duì)照組140.114±0.0080.233±0.016 t值37.381-43.969 P值＜0.01＜0.01

3 討論

3.1 PCOS組和對(duì)照組子宮內(nèi)膜病理結(jié)果分析 本研究中，PCOS組子宮內(nèi)膜分泌反應(yīng)欠佳發(fā)生率高于對(duì)照組，提示PCOS患者經(jīng)過糾正內(nèi)分泌及代謝紊亂和促排卵治療后，雖然可以正常排卵，但由于PCOS患者窗口期雌、孕激素分泌不足，不僅造成PCOS患者子宮內(nèi)膜組織形態(tài)發(fā)生改變，分泌反應(yīng)欠佳，而且引起PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性降低，造成其妊娠率低流產(chǎn)率高的臨床特點(diǎn)。Roemer KL等[1]認(rèn)為，PCOS患者子宮內(nèi)膜孕激素抵抗和長(zhǎng)期雌激素作用，導(dǎo)致PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性降低。本研究與國(guó)外報(bào)道基本一致。

3.2 C-FOS在PCOS組和對(duì)照組子宮內(nèi)膜表達(dá)情況C-FOS由即刻早期基因（IEGS）C-FOS表達(dá)產(chǎn)生。C-FOS在絕大多數(shù)細(xì)胞中呈低表達(dá)狀態(tài)，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、信號(hào)傳遞等生理過程。孫雪艷[2]等研究發(fā)現(xiàn)EM患者窗口期在位子宮內(nèi)膜C-FOS蛋白表達(dá)明顯升高，推測(cè)EM患者窗口期在位子宮內(nèi)膜C-FOS蛋白的高表達(dá)可能會(huì)降低子宮內(nèi)膜容受性而影響胚胎著床。Fujimoto J[3]等通過對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞和來源于子宮內(nèi)膜的纖維母細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)，雌激素促進(jìn)C-FOS表達(dá)，孕激素抑制C-FOS表達(dá)，認(rèn)為C-FOS在人子宮內(nèi)膜周期性表達(dá)，且增生期表達(dá)高于分泌期。Maldonado Vicente[4]研究表明，性激素通過C-FOS等因子發(fā)揮對(duì)子宮內(nèi)膜的周期性調(diào)節(jié)作用。本研究中，PCOS組窗口期C-FOS表達(dá)高于對(duì)照組，說明PCOS患者雖然內(nèi)分泌紊亂糾正后，可以正常排卵，由于孕激素分泌不足，不能抑制子宮內(nèi)膜C-FOS表達(dá)，導(dǎo)致窗口期子宮內(nèi)膜C-FOS高表達(dá)。異常表達(dá)的C-FOS可能使性激素不能發(fā)揮對(duì)子宮內(nèi)膜周期性作用，影響子宮內(nèi)膜蛻膜化，降低PCOS患者窗口期子宮內(nèi)膜容受性。對(duì)照組窗口期PCOS表達(dá)低于對(duì)照組，推測(cè)低表達(dá)的C-FOS在維持窗口期子宮內(nèi)膜形態(tài)和功能方面起重要作用。

3.3 STAT 3在2組子宮內(nèi)膜的表達(dá)情況 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子(STATS)家族是一種存在于胞漿并在激活后能夠轉(zhuǎn)入核內(nèi)與DNA結(jié)合的蛋白家族，具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控雙重功能。目前在哺乳動(dòng)物中已鑒定出STAT家族成員有STATl(a/ B)、STAT 2、STAT 3(a／13／'y)等。STAT 3是STATS家族中與腫瘤關(guān)系最為密切的一員，參與腫瘤細(xì)胞多種重要的生理活動(dòng)。Sun X[5]等通過控制性地刪除小鼠STAT 3基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)這些小鼠雌激素反應(yīng)性基因上調(diào)，孕激素反應(yīng)性基因下調(diào)，這些變化導(dǎo)致子宮腔上皮細(xì)胞分化失敗，阻止容受態(tài)子宮內(nèi)膜的建立，從而導(dǎo)致胚胎種植失敗，認(rèn)為STAT 3對(duì)子宮內(nèi)膜容受性和胚胎種植至關(guān)重要。本研究中，PCOS組窗口期STAT 3表達(dá)低于對(duì)照組，可能通過下調(diào)孕激素反應(yīng)性基因，降低孕激素對(duì)子宮內(nèi)膜的蛻膜化作用，不利于子宮腔上皮分化。TSLP通過STAT 3通路抑制蛻膜細(xì)胞凋亡[6]，低表達(dá)的STAT 3可能使TSLP抑制蛻膜細(xì)胞凋亡的作用減弱，加速蛻膜細(xì)胞凋亡，削弱PCOS患者窗口期子宮內(nèi)膜容受性，不易于妊娠的建立和維持，可能是PCOS患者妊娠率低流產(chǎn)率高的原因之一。對(duì)照組窗口期STAT 3表達(dá)較高，說明高表達(dá)的STAT 3利于子宮內(nèi)膜容受性建立。與國(guó)外報(bào)道[7]基本一致。

本研究中，PCOS患者窗口期C-FOS高表達(dá)，STAT 3低表達(dá)，這些變化，可能通過一定環(huán)節(jié)影響PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性的建立。C-FOS，STAT 3作為PCOS患者內(nèi)膜容受性的新的影響因子，仍需要進(jìn)一步的研究與證實(shí)，但是期待通過干預(yù)窗口期二者的表達(dá)，為改善多囊患者妊娠率低、流產(chǎn)率高的臨床狀態(tài)提供理論依據(jù)。

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Objective To explore the effect of C-FOS and STAT 3 on endometrial receptivity of polycystic ovarian syndrome (PCOS). Methods The endometrial samples were obtained from 15 marride cases with PCOS (PCOS group) and 14 infertile women cause of other factors (Control guoup) at the window of implatation, hematoxylin-eosin staining to determin the samples' histologic staging,immunohitochemical method to test the expression of C-FOS and STAT 3. Results At the window of implantation, the expression levels of C-FOS in PCOS group were higher than those in Control group, while the expression levels of STAT 3 were on the contrary, the differences was statistically signif i cant (P<0.01). Conclusion The high expression of C-FOS and the low expression of STAT 3 may affect the establishment of endometrial receptivity in PCOS, which may be one of the reasons of the low pregnancy rate and high rate of abortion in them.

Polycystic ovarian syndrome；Endometrial receptivity；C-FOS；STAT 3

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.1.001

河南 450052 河南省鄭州市鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 （楊雪峰 劉麗偉 李愛杰）