王洪亮，程艷宇，王夢(mèng)曉（天津市乳品食品監(jiān)測(cè)中心，天津300381）

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食品中金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)方法的研究

王洪亮，程艷宇，王夢(mèng)曉
（天津市乳品食品監(jiān)測(cè)中心，天津300381）

摘要：探討一種金色葡萄球菌定量檢測(cè)的操作方法。采用GB4789.10-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》第二法Baird-Parker平板法，以接種量0.3、0.3、0.4mL和0.1 mL兩種方法對(duì)同一濃度的金色葡萄球菌進(jìn)行檢測(cè)，將各數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄對(duì)比分析。計(jì)數(shù)結(jié)果在10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL 3個(gè)數(shù)量級(jí)菌濃度上兩種操作方法相近，其中接種量0.1mL的方法計(jì)數(shù)值較高，但是此方法操作簡(jiǎn)單，涂布均勻。在實(shí)際非仲裁檢驗(yàn)過(guò)程中，經(jīng)過(guò)方法驗(yàn)證，可以根據(jù)需要采用此方法，以減輕工作量。

關(guān)鍵詞：食品安全；金黃色葡萄球菌；定量；方法比較

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）屬于葡萄球菌屬，是一種重要的病原菌，是典型的革蘭氏陽(yáng)性菌，有較強(qiáng)的抵抗力。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，且有高度的耐鹽性，容易污染肉類(lèi)、水產(chǎn)品、乳品等食品，在世界各個(gè)國(guó)家中，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒在細(xì)菌性食物中毒中均占較大比例［1-2］，金黃色葡萄球菌引起的食物中毒已成為世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。

目前關(guān)于食品中金黃色葡萄球菌的定量檢測(cè)方法主要有Baird-Parker平板計(jì)數(shù)法［3］、MPN計(jì)數(shù)法［3］、測(cè)試紙片法［4］、顯色培養(yǎng)基計(jì)數(shù)法等。由于國(guó)家的致病菌限量標(biāo)準(zhǔn)［5］中金色葡萄菌定量檢測(cè)的方法都為Baird-Parker平板計(jì)數(shù)法，但是接種量為0.3、0.3、0.4 mL，涂布不容易均勻，耗時(shí)，工作量大。為了省時(shí)，減小工作量，對(duì)接種量0.1 mL的操作方法進(jìn)行比較分析研究，添加非目標(biāo)菌進(jìn)行比較分析，同時(shí)比較研究了在食品中的應(yīng)用。旨在探求一種適應(yīng)食品微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)要求的省時(shí)省力準(zhǔn)確的方法，為食品檢測(cè)方法的研究及應(yīng)用積累一定的經(jīng)驗(yàn)，為今后金黃色葡萄球菌的檢測(cè)工作提供一定參考。

1　材料

1.1樣品

生鮮乳和乳粉。

1.2培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)瓊脂、BHI肉湯、Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)、卵黃亞碲酸鉀增菌劑、凍干血漿，革蘭氏染色液：北京路橋技術(shù)股份有限公司。

1.3試驗(yàn)菌株

金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、表皮葡萄球菌（CMCC 26069）：廣州環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.4儀器設(shè)備

高壓滅菌鍋：日本雅馬拓；隔水式恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司；麥?zhǔn)媳葷醿x：法國(guó)梅理埃公司（bioMérieux，Inc）。

2　方法

2.1菌株和菌懸液的制備

取-20℃條件下保存于含10%脫脂奶粉的菌種，轉(zhuǎn)種至BHI肉湯，36℃培養(yǎng)24 h，再轉(zhuǎn)種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，36℃培養(yǎng)24 h，用0.85%生理鹽水稀釋。調(diào)節(jié)濁度為（1～2）個(gè)麥?zhǔn)蠁挝唬鄳?yīng)的菌濃度大約為（3×108～6×108）CFU/mL，10倍連續(xù)稀釋?zhuān)謩e制成10、102CFU/ mL和103CFU/mL數(shù)量級(jí)的純菌液。

2.2無(wú)添加食品基質(zhì)的試驗(yàn)

分別吸取1mL不同濃度的菌懸液以0.3、0.3、0.4mL接種量，分別加入3塊Baird-Parker平板，和0.1 mL的接種量，加入到一塊Baird-Parker平板，然后用無(wú)菌L棒涂布整個(gè)平板，注意不要觸及平板邊緣。使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培養(yǎng)箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。

在通常情況下，涂布后，將平板靜置10 min，如菌懸液不易吸收，可將平板放在培養(yǎng)箱（36±1）℃培養(yǎng)1 h；等菌懸液吸收后翻轉(zhuǎn)平皿，倒置于培養(yǎng)箱，（36± 1）℃培養(yǎng)，45 h～48 h。表皮葡萄球菌作為陰性對(duì)照。

平行5次試驗(yàn)，觀察典型生長(zhǎng)情況，記錄數(shù)據(jù)并分析比較。

2.3添加食品基質(zhì)的試驗(yàn)

生鮮乳在高壓121℃，5 min滅菌后，添加菌懸液分別制成10、100CFU/mL和1000 CFU/mL數(shù)量級(jí)的樣品。按“2.2”方法培養(yǎng)，判讀，計(jì)數(shù)，記錄數(shù)據(jù)并分析比較。

3　結(jié)果與分析

3.1無(wú)添加食品基質(zhì)的試驗(yàn)

選用10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數(shù)量級(jí)濃度的純菌液，檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　兩種操作方法檢測(cè)10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數(shù)量級(jí)濃度金色葡萄球菌懸液的結(jié)果Table 1 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

續(xù)表1　兩種操作方法檢測(cè)10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數(shù)量級(jí)濃度金色葡萄球菌懸液的結(jié)果Continue table 1 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

2種操作方法檢測(cè)數(shù)據(jù)平均值結(jié)果相近，其中接種量0.1 mL的方法計(jì)數(shù)值較高。

3.2添加食品基質(zhì)的試驗(yàn)

選用10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數(shù)量級(jí)菌濃度的生鮮乳樣品，檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　兩種操作方法檢測(cè)10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數(shù)量級(jí)濃度金色葡萄球菌生鮮乳樣品的結(jié)果Table 2 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus fresh milk sample in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

續(xù)表2　兩種操作方法檢測(cè)10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL數(shù)量級(jí)濃度金色葡萄球菌生鮮乳樣品的結(jié)果Continue table 2 Results of the two methods in determining the number of level concentration of S.aureus fresh milk sample in the concentration of 10，100 CFU/mL和1 000 CFU/mL

2種操作方法檢測(cè)數(shù)據(jù)平均值結(jié)果相近，其中接種量0.1 mL的方法計(jì)數(shù)值較高。

4　結(jié)論與討論

計(jì)數(shù)結(jié)果在10、100 CFU/mL和1 000 CFU/mL 3個(gè)數(shù)量級(jí)菌濃度兩種操作方法相近，其中接種量0.1 mL的方法計(jì)數(shù)值較高，但是此方法操作簡(jiǎn)單，涂布均勻。對(duì)非仲裁檢驗(yàn)單位有十分重要的實(shí)際意義，在實(shí)際非仲裁檢驗(yàn)過(guò)程中，經(jīng)過(guò)方法驗(yàn)證，可以根據(jù)需要采用此方法，以減輕工作量。同時(shí)對(duì)金色葡萄球菌定量檢驗(yàn)積累一些經(jīng)驗(yàn)及參考。

參考文獻(xiàn)：

［1］李自然，施春雷，宋明輝，等．上海市食源性金黃色葡萄球菌分布狀況［J］．食品科學(xué)，2013，34（1）：268-271

［2］陳廣全，張惠媛，曾靜．食品安全檢測(cè)培訓(xùn)教材微生物檢驗(yàn)［M］．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010：351-352

［3］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部．GB 4789.10-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)［S］．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010

［4］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局．SN/T 1895-2007食品中金黃色葡萄球菌的快速計(jì)數(shù)法PetfifllmTM測(cè)試片法［S］．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007

［5］中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)．GB 29921-2013食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量［S］．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013

Study on Quantitative Detection Method of Staphylococcus Aureus in Food

WANG Hong-liang，CHENG Yan-yu，WANG Meng-xiao
（Dairy and Food Monitoring Center，Tianjin 300381，China）

Abstract：To explore a method for quantitative detection of Staphylococcus aureus. By GB 4789.10-2010＜National food safety standard Food microbiological examination：Staphylococcus aureus＞，the second method Baird Parker plate method，with two methods of inoculation of 0.3，0.3，0.4 mL and 0.1 mL of the same concentration of Staphylococcus aureus were detected，the data recording and comparison analysis. The results of the 10，100 CFU/mL and 1 000 CFU/mL three number of level concentration of the two methods of operation were similar，and the amount of 0.1 mL was higher，but this method was simple，and the coating was uniform. In theprocess of actual non arbitration inspection，verified by method，this method can be used according to the need to reduce the amount of work.

Key words：food safety；Staphylococcus aureus；determination；comparison method

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.09.044

作者簡(jiǎn)介：王洪亮（1981—），男（漢），工程師，碩士，從事食品微生物檢驗(yàn)研究。

收稿日期：2016-03-08