劉彩雙， 劉衛(wèi)云， 黨曉偉， 秦博文， 馬秀芬(承德護理職業(yè)學院， 河北 承德 067000)

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SIAH2和HIF-1α蛋白在喉鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義?

劉彩雙， 劉衛(wèi)云， 黨曉偉， 秦博文， 馬秀芬
(承德護理職業(yè)學院， 河北 承德 067000)

摘 要:目的:通過檢測喉鱗狀細胞癌組織、聲帶息肉、癌旁組織中SIAH2和HIF-1α蛋白的表達，為喉鱗狀細胞癌發(fā)病機制提供理論依據(jù)，并為其早期診斷和治療提供幫助。方法:收集喉鱗狀細胞癌患者的石蠟包埋組織60例，同時收集聲帶息肉、癌旁石蠟包埋組織各30例，應(yīng)用法免疫組織化學技術(shù)檢測SIAH2和HIF-1α蛋白的表達水平。結(jié)果:SIAH2蛋白和HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細胞癌中的陽性表達率分別為10%、33.3%、70%和3.3%、30.0%和66.7%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；SIAH2蛋白和HIF-1α蛋白的表達與喉鱗狀細胞癌患者的分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期有關(guān)(P＜0.05)。喉鱗狀細胞癌中SIAH2和HIF-1α蛋白的表達呈正相關(guān)。結(jié)論:SIAH2和HIF-1α蛋白可能與喉鱗狀細胞癌的發(fā)病有關(guān)，并對喉鱗狀細胞癌的侵襲性生物學行為有促進作用，聯(lián)合檢測二者可為預(yù)測腫瘤的生物學行為以及患者的預(yù)后提供幫助。

關(guān)鍵詞:SIAH2； HIF-1α； 喉鱗狀細胞癌

SIAH2蛋白作為一種E3泛素連接酶，能夠促使底物蛋白發(fā)生泛素化降解，目前研究指出SIAH2可以通過SIAH2/ PHD/ HIF-1α信號通路發(fā)揮促癌作用。本研究通過檢測SIAH2和HIF-1α蛋白的表達，探討二者在喉鱗狀細胞癌中的臨床病理意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料:收集2015年6月至2015年12月承德護理職業(yè)學院附屬醫(yī)院病理科喉鱗狀細胞癌石蠟包埋組織60例，同時收集聲帶息肉、癌旁石蠟包埋組織各30例。60例患者中男52例，女8例；年齡26～80歲，平均59.2歲；聲門型45例，非聲門型15例；高分化19例，中分化21例，低分化20例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例；無遠處轉(zhuǎn)移著37例，伴有遠處轉(zhuǎn)移者13例；臨床Ⅰ期17例，臨床Ⅱ期15例，臨床Ⅲ期15例，Ⅳ期13例。所有患者術(shù)前均無其他原發(fā)腫瘤，并且未進行放化療，均接受手術(shù)切除治療，并經(jīng)兩位副高以上病理醫(yī)師確診為喉鱗狀細胞癌。

1.2方 法

1.2.1免疫組織化學染色(PV二步法):將組織切片置于高壓鍋，檸檬酸鈉溶液熱修復，滴加一抗(SIAH2稀釋度為1:100，HIF-1α為工作液無需稀釋)，4℃孵育過夜。滴加通用型兩步法檢測試劑盒(PV-9000)，室溫孵育15min。滴加現(xiàn)配制的DAB顯色液，適時終止顯色。以上個步驟均嚴格按照說明書進行，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.2.2統(tǒng)計學分析:采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，計數(shù)資料組間比較采用x2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié) 果

2.1SIAH2蛋白在癌旁組織、聲帶息肉及喉鱗狀細胞癌中的表達及意義，見表1。

表1　SIAH2蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細胞癌中的表達

表2　SIAH2蛋白的表達與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關(guān)系

2.2HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細胞癌中的表達及意義，見表3。

表3　HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細胞癌中的表達

表4　HIF-1α蛋白的表達與喉鱗狀細胞癌臨床及病理特征的關(guān)系

2.3喉鱗狀細胞癌中SIAH2和HIF-1α間的相關(guān)性: SIAH2與HIF-1α蛋白在喉癌中的表達經(jīng)Spearman相關(guān)性分析得出rs＝0.295(P＝0.017)，兩種蛋白在喉鱗狀細胞癌中表達呈正相關(guān)。

3　討 論

近年來，泛素化修飾的研究日趨完善，泛素化修飾通過調(diào)控細胞周期影響著細胞的增殖和凋亡過程，當泛素化降解的過程失調(diào)時，腫瘤細胞凋亡和增殖等生物學過程發(fā)生改變，最終促使了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[1]。SIAH2是泛素連接酶E3家族的成員之一，研究發(fā)現(xiàn)，SIAH2作為一種癌基因在胰腺癌細胞株Bx-PC3、Panc-1以及肺癌細胞株BZR、A549中的表達水平升高，而且通過抑制SIAH2的表達，可以使腫瘤的生長過程受到抑制[2，3]。孟媛[4]等證實SIAH2蛋白在乳腺正常組織、原位癌、浸潤性導管癌中的陽性表達率依次升高，而且與乳腺癌的組織學分級密切相關(guān)。劉瑤等[5]研究表明SIAH2蛋白在肝癌組織中的陽性表達率為78%，明顯高于相應(yīng)癌旁組織中的14%，并與肝癌的TNM分期密切相關(guān)。肖海等[6]研究結(jié)果顯示，當SIAH2受到抑制后，肝癌細胞的增殖受到抑制，細胞周期被阻滯在G1期，而其細胞凋亡過程受到了促進。以上研究結(jié)果表明，SIAH2作為一個癌基因，參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。

HIF-1是一種異源二聚體，主要是由HIF-1α亞基和HIF-1β亞基組成，HIF-1α主要存在于細胞核中，胞漿中的HIF-1α含量極少且?guī)缀醪话l(fā)揮生物學功能。但是如果HIF-1α穩(wěn)定性增強或表達量增加，HIF-1α不斷地積聚，并且逐漸由細胞核轉(zhuǎn)移至細胞漿中，其可與HIF-1β結(jié)合，最終形成具有活性的HIF -1，發(fā)揮相應(yīng)的生物學功能。研究證實，抑制HIF-1α基因的表達可使胰腺癌細胞中VEGF表達下調(diào)，從而抑制腫瘤血管形成，而腫瘤細胞中HIF-1α的轉(zhuǎn)錄激活，則可能通過多條信號傳導通路促進VEGF表達上調(diào)，從而促進腫瘤血管的形成。范平等發(fā)現(xiàn)HIF-1α在肝癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，并與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、腫瘤包膜及臨床TNM分期密切相關(guān)。孫國貴等[7]結(jié)果顯示HIF1α在NSCLC中呈高表達，HIF-1α的表達與患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表明HIF-1α表達陽性增加了NSCLC發(fā)生惡性行為的風險。

SIAH2和HIF-1α關(guān)系密切，在SIAH2/ PHD/ HIF -1α通路中，常氧情況下脯氨酰羥化酶(Pro1y1 Hydroxy1ase，PHD)可以將HIF-1α降解，破壞其穩(wěn)定性。同時PHD作為SIAH2的底物可通過泛素化降解途徑被SIAH2所降解。本研究中SIAH2和HIF-1α蛋白在癌旁組織、聲帶息肉以及喉鱗狀細胞癌中的陽性表達率依次升高，均與喉鱗狀細胞癌患者的分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期有關(guān)，并且二者表達呈正性相關(guān)，我們推測在喉鱗狀細胞癌中SIAH2的表達與活性增強，通過泛素化降解途徑促進PHD的降解，進而使HIF-1α穩(wěn)定性增強并且表達量增加，HIF-1α可進一步調(diào)控其靶基因的表達，促進腫瘤細胞的遷移、侵襲。SIAH2和HIF-1α影響了喉鱗狀細胞癌的分化，并可能促進了癌細胞的淋巴道播散，因此二者促腫瘤發(fā)展的作用極強，及時篩選喉鱗狀細胞癌癌變過程中差異表達蛋白質(zhì)對于喉鱗狀細胞癌的防治具有非常重要的意義。

參考文獻:

[1] 劉瑤，廖躍光，黃才斌，等.肝細胞癌組織中PEG10、SIAH2的表達及其意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2012，28 (4)：371～373.

[2] Confa1onieri S，Quarto M，Goisis G，et a1. A1terations of ubiquitin 1igases in human cancer and their association with the natura1 history of the tumor [ J]. Oncogene，2009，28 (33)：2959～2968.

[3] Schmidt RL，Park CH，Ahmed AU，et a1. Inhibition of RAS -mediated transformation and tumorigenesis by targeting the downstream E3 ubiquitin 1igase seven in absentia homo1ogue [J].Cancer Res，2007，67(24)：11798～11810.

[4] 孟媛，董經(jīng)宇，甄娟，等.SIAH2與P-ERK在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國組織化學與細胞化學雜志，2011，20(3)：220～226.

[5] 劉瑤，廖躍光，黃才斌，等.肝細胞癌組織中PEG10、SIAH2的表達及其意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2012，28 (4)：371～373.

[6] 肖海，賀興波，黃才斌，等.靶向泛素連接酶SIAH2的shRNA對人肝癌細胞株HepG2細胞周期和凋亡的影響[J].中國病理生理雜志，2013，29(8)：1406～1411.

[7] 孫國貴，胡萬寧，王雅棣，等.HIF-1α蛋白在非小細胞肺癌中表達的Meta分析[J].臨床腫瘤學雜志，2012，17 (10)：894～898.

文獻標識碼:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.006

文章編號:1006-6233(2016)02-0192-04

基金項目：?河北省高等學?？茖W技術(shù)研究項目，(編號：Z2015011)