劉瑩，張紅，喬穎

（天津市人民醫(yī)院兒科，天津300121）

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維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病的關(guān)系

劉瑩，張紅，喬穎

（天津市人民醫(yī)院兒科，天津300121）

摘要：目的探討維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病的關(guān)系。方法選取本院2012年9月-2014年9月的82例喘息性疾病患兒進(jìn)行分析。支氣管哮喘41例，作為試驗(yàn)組1，喘息性支氣管炎41例，作為試驗(yàn)組2，正常對(duì)照組41例，3組研究對(duì)象采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性長度多態(tài)性檢測(cè)維生素D受體ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ和TaqⅠ基因多態(tài)性，觀察3組研究對(duì)象的基因型分布頻率及維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病的相關(guān)性。結(jié)果試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組2和對(duì)照組的維生素D受體ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ和TaqⅠ基因型的分布頻率之間存在明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；試驗(yàn)組1與試驗(yàn)組2和對(duì)照組的維生素D受體ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ和TaqⅠ等位基因頻率之間存在明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病具有良好的相關(guān)性，為治療兒童喘息性疾病提供可靠依據(jù)。

關(guān)鍵詞：維生素D受體基因；基因分布；喘息性疾?。幌嚓P(guān)性

維生素D是調(diào)節(jié)骨代謝和鈣平衡的一種固醇激素，隨著越來越多的研究不斷進(jìn)行，維生素D也作為一種調(diào)節(jié)人體免疫作用的激素，越來越多的被重視。相關(guān)研究表明［1］，減少陽光暴露與哮喘發(fā)病有關(guān)，而認(rèn)為維生素D是聯(lián)系陽光暴露與哮喘發(fā)病之間的中介物。維生素D缺乏與不足都會(huì)使發(fā)病率提高，陽光暴露不足的人群是兒童，因此兒童也最容易發(fā)生哮喘類疾病。哮喘類疾病的發(fā)生與很多炎癥因子、細(xì)胞介質(zhì)有很大關(guān)系，但是維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病的發(fā)生也是當(dāng)前研究的重點(diǎn)。維生素D受體多態(tài)基因主要有ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ、TaqⅠ、Tru9Ⅰ等位點(diǎn)，不同的基因在喘息性疾病方面的分布頻率不同，通過研究這些基因型的分布頻率來確定維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病的關(guān)系。前人的研究［2-3］顯示，ApaⅠ和BsmⅠ位點(diǎn)的多態(tài)性分布與喘息性疾病有關(guān)，而且不同的哮喘疾病表現(xiàn)不同。有研究［1］顯示，ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ、TaqⅠ、Tru9Ⅰ位點(diǎn)的多態(tài)性與兒童支氣管哮喘有關(guān)。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上對(duì)維生素D受體基因ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ、TaqⅠ位點(diǎn)上的分布頻率與兒童喘息性疾病的關(guān)系進(jìn)行分析，從而為兒童喘息性疾病的治療提供可靠依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料

對(duì)天津市人民醫(yī)院2012年9月-2014年9月的82例兒童喘息性疾病患兒進(jìn)行分析。所有患兒符合哮喘及喘息性支氣管炎疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］：①反復(fù)發(fā)作喘息、咳嗽、氣促、胸悶等癥狀；②患兒發(fā)作時(shí)雙肺可聽到彌漫性哮鳴音，呼氣相延長；③患兒的癥狀經(jīng)過抗哮喘類藥物治療均可以有效治療。排除其他疾病所引起的喘息、咳嗽、氣促和胸悶癥狀。支氣管哮喘41例，作為試驗(yàn)組1，喘息性支氣管炎41例，作為試驗(yàn)組2，正常對(duì)照組41例。正常對(duì)照組沒有以上癥狀的表現(xiàn)。其中試驗(yàn)組1中男性24例，女性17例，年齡1～7歲，平均年齡為（3.9±1.2）歲；試驗(yàn)組2中男性25例，女性16例，年齡1～6歲，平均年齡為（3.4±1.1）歲；正常對(duì)照組41例，男性23例，女性18例，年齡1～7歲，平均年齡為（3.7±1.3）歲。3組患者在一般資料方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1基因組DNA的提取采集3組研究對(duì)象的2.0 ml外周靜脈血，用2%乙二胺四乙酸抗凝，采用酚氯法提取DNA，并保存在-20℃冰箱冷凍待用。

1.2.2引物設(shè)計(jì)及合成［4］PCR引物序列見表1。

1.2.3維生素D基因型分析［5］采用PCR-RFLP技術(shù)確定維生素D基因型，PCR體系50μl，循環(huán)參數(shù)：95℃預(yù)變性10 min，94℃變性1 min，65℃退火1 min，72℃延伸1 min，30 s后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。最后72℃延伸7 min，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖電泳，溴化乙錠染色，擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物采用純化試劑盒進(jìn)行純化。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)用例數(shù)和構(gòu)成比表示，用X2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　PCR引物序列

2　結(jié)果

2.13組研究對(duì)象的維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)基因型分布頻率比較（見表2）

2.2維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)基因型分布頻率兩兩比較

試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2以及試驗(yàn)組1與對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；試驗(yàn)組2與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

2.33組研究對(duì)象的維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)等位基因型分布頻率比較（見表4）

2.4維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)等位基因型分布頻率兩兩比較

試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2以及試驗(yàn)組1與對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；試驗(yàn)組2與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表5。

表2　3組研究對(duì)象的維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)基因型分布頻率比較［n=41，例（%）］

表3　維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)基因型分布頻率兩兩比較

表4　3組研究對(duì)象的維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)等位基因型分布頻率比較?。踤=41，例（%）］

表5　維生素D受體Apa｜、Fok｜、Bsm｜、Taq｜位點(diǎn)等位基因型分布頻率兩兩比較

3　討論

維生素D受體基因多態(tài)性的基因型的變化與喘息性疾病有一定關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)與哮喘有關(guān)的染色體DNA可以與維生素D激素受體進(jìn)行結(jié)合形成激素-受體復(fù)合物，該結(jié)合物對(duì)特色的DNA具有一定的表達(dá)，可以誘導(dǎo)炎癥因子的發(fā)生，從而導(dǎo)致喘息性疾病的發(fā)生［6］。研究發(fā)現(xiàn)，喘息性疾病的發(fā)生主要是因?yàn)門h1/Th2的平衡被打破，而維生素D能抑制Th1淋巴細(xì)胞的作用，同時(shí)增強(qiáng)Th2淋巴細(xì)胞的作用，導(dǎo)致Th1/Th2的平衡的破壞，可見維生素D與哮喘疾病有關(guān)［7］。本研究通過研究發(fā)現(xiàn)喘息性支氣管炎患者的維生素D受體ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ、TaqⅠ位點(diǎn)基因型分布頻率與其他研究組存在明顯差異，而且與正常人群比較，不同基因型存在明顯差異，這也表明維生素D受體基因多態(tài)性與兒童喘息性疾病具有良好的關(guān)系。劉颯等［8］人通過采用維生素D治療兒童喘息性疾病，可以明顯的改善患兒的炎癥因子，可見維生素D可以降低氣道反應(yīng)性，從而達(dá)到治療效果，這也說明維生素D與哮喘疾病有關(guān)。

研究認(rèn)為，哮喘與喘息性支氣管炎的發(fā)生與遺傳和環(huán)境有一定關(guān)系，而遺傳和環(huán)境的影響各占一半［9］。環(huán)境中陽光暴露也是一種重要環(huán)境因素，在陽光下充分暴露可以明顯的減少患上喘息性疾病的機(jī)率。充足的陽光可以促進(jìn)維生素D的合成，起到提高免疫的作用。研究發(fā)現(xiàn)［10］，維生素D與兒童支氣管哮喘有關(guān)，發(fā)現(xiàn)血清維生素D水平越少，患兒的肺功能就會(huì)越差，維生素D的低水平存在與哮喘的形成有關(guān)。研究認(rèn)為［11］，血清維生素D水平與兒童哮喘發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)。即血清中維生素D的含量越少，發(fā)生兒童哮喘的機(jī)率就會(huì)增大。分析其原因是因?yàn)榫S生素D的受體基因發(fā)生變化。甄艷芬等人［12］維生素D的受體基因位點(diǎn)的ApaⅠ的基因型進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)發(fā)生哮喘的患兒的基因型分布頻率要低于正常人群。本研究中對(duì)維生素D的受體基因位點(diǎn)的ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ和TaqⅠ基因型的分布頻率及其等位基因的分布頻率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)支氣管哮喘患兒的維生素D的受體基因位點(diǎn)的ApaⅠ、FokⅠ、BsmⅠ和TaqⅠ的基因型分布頻率和等位基因型的分布頻率與喘息性支氣管炎患兒和正常人群差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由此可見維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病有關(guān)。而且不同性質(zhì)的喘息性疾病中的支氣管哮喘和喘息性支氣管炎的維生素D受體基因的多態(tài)性的表現(xiàn)不同，也說明了不同的喘息性疾病與維生素D受體基因的多態(tài)性的關(guān)系存在一定差異。本研究得到的結(jié)果與其他研究結(jié)果基本一致。

綜上所述，維生素D受體基因的多態(tài)性與兒童喘息性疾病具有良好的相關(guān)性，為治療兒童喘息性疾病提供可靠依據(jù)。

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（張蕾編輯）

論著

Relationships of vitamin D receptor gene polymorphisms with children asthma and wheezy bronchitis

Ying Liu，Hong Zhang，Ying Qiao
（Department of Pediatrics，the People's Hospital of Tianjin，Tianjin 300121，China）

Abstract：Objective To study the relationship of vitamin D receptor gene polymorphisms with children asthma and wheezy bronchitis. Methods Eighty-two cases of asthma and wheezy bronchitis treated in our hospital from September 2012 to September 2014 were analyzed and divided into two groups∶41 cases of bronchial asthma were into experimental group 1，41 cases of asthmatic bronchitis were into experimental group 2. There were 41 cases in normal control group. The three groups used polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP）to detect vitamin D receptor ApaⅠ，F(xiàn)okⅠ，BsmⅠand TaqⅠgene polymorphisms. The frequency of genotype distribution of the 3 groups were observed and the correlations of the vitamin D receptor gene polymorphisms with children asthmatic diseases were studied. Results The frequency of vitamin D receptor ApaⅠ，F(xiàn)okⅠ，BsmⅠand TaqⅠgenotype distribution in the experimental group 1 had significant differences from that in the group 2 and the normal control group（P＜0.05）. The vitamin D receptor ApaⅠ，F(xiàn)okⅠ，BsmⅠand TaqⅠallele frequency of the experimental group 1 had significant differences from that of the group 2 and the normal control group（P＜0.05）. Conclusions The vitamin D receptor gene polymorphisms are closely correlated with asthmatic diseases，which provides a reliable basis for treatment of children with asthmatic diseases.

Keywords：vitamin D receptor gene；gene distribution；asthmatic disease；correlation

中圖分類號(hào)：R246.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1005-8982.2016.10.008

文章編號(hào)：1005-8982（2016）10-0036-04

收稿日期：2015-12-07