雷　鵬　李娟娥　李　靜　衣　蕾　姜小帆　吉海旺

陜西省人民醫(yī)院 (西安 710068)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

息痛散對大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用*

雷鵬李娟娥李靜衣蕾姜小帆吉海旺

陜西省人民醫(yī)院 (西安 710068)

摘要目的：觀察息痛散對尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用。方法：通過關(guān)節(jié)局部注射尿酸鈉晶體建立急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，將模型成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、別嘌醇組、息痛散高、中、低劑量組(18g/kg/d、36g/kg/d、72g/kg/d)，并灌胃治療5d，觀察各組大鼠的足跖腫脹度、步態(tài)學(xué)評分，并檢測大鼠血清炎性因子白介素1- lβ (IL-lβ)、腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平。結(jié)果：息痛散呈劑量依賴性抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠關(guān)節(jié)足跖腫脹度，改善大鼠步態(tài)學(xué)評分，降低血清炎性因子IL-1β、TNF-α水平，息痛散高劑量組與別嘌醇組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：息痛散對尿酸鈉晶體誘導(dǎo)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎足跖腫脹度有顯著的改善作用，其機(jī)制可能是與抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。

主題詞 關(guān)節(jié)炎，痛風(fēng)性/中醫(yī)藥療法炎癥因子 實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物大鼠@息痛散

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(Acute Gouty Arthritis，AGA)是嘌呤代謝紊亂引起尿酸水平增高或尿酸排泄減少導(dǎo)致尿酸鹽結(jié)晶沉積于關(guān)節(jié)及周圍組織，刺激關(guān)節(jié)而引起的關(guān)節(jié)滑膜及周圍組織病損及急性炎癥反應(yīng)所致的一種代謝性關(guān)節(jié)疾病。隨著生活方式的改變，近年來我國痛風(fēng)的患病率呈逐年升高趨勢，但目前尚缺乏安全、經(jīng)濟(jì)、有效的抗痛風(fēng)藥物。祖國醫(yī)學(xué)經(jīng)過數(shù)千年的發(fā)展，在治療痛風(fēng)方面有悠久的歷史和豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)。因此，結(jié)合中醫(yī)理論，積極尋找開發(fā)抗痛風(fēng)和改善炎癥作用的中草藥制劑具有重要的意義。本研究通過關(guān)節(jié)局部注射尿酸鈉晶體誘導(dǎo)大鼠急性關(guān)節(jié)炎模型, 以觀察息痛散對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的影響及作用效果。

息痛散由石膏、忍冬藤、蒼術(shù)、黃柏、全蟲、桃仁、牛膝等組成，具有瀉火解毒、祛濕通絡(luò)的功效，臨床應(yīng)用及研究均發(fā)現(xiàn)該藥具有緩解痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎疼痛和降低血清尿酸的作用[1]，但尚無明確實(shí)驗(yàn)室證據(jù)支持。本實(shí)驗(yàn)通過觀察息痛散對尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用，來探討其對痛風(fēng)的防治作用及可能機(jī)制。

1材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級健康SD大鼠，雄性，體重：200±20g。由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號：陜醫(yī)動(dòng)字第08-005號。各組大鼠均常規(guī)飼養(yǎng)，并自由攝水、進(jìn)食。

1.2藥物與試劑別嘌醇購自上海信萬象藥業(yè)股份有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字H31020334；尿酸鈉購自Sigma公司，批號：U2875-5G；IL-1β、TNF-α放免試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供。息痛散顆粒：由生石膏、忍冬藤、蒼術(shù)、黃柏、全蟲、桃仁、牛膝等組成，中藥配方顆粒，購自三九藥業(yè)。

1.3主要儀器臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(湘儀)；γ放射免疫計(jì)數(shù)器(Midwest-G)。

2方法

2.1動(dòng)物分組、造模及給藥

2.1.1 分組：將60只SPF級雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用隨機(jī)數(shù)字表將大鼠隨機(jī)分出8只為正常對照組，其余均復(fù)制模型。造模后，將模型成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、別嘌醇組、息痛散高劑量組、息痛散中劑量組、息痛散低劑量組，每組各8只。

2.1.2模型建立[2]：將大鼠右后踝關(guān)節(jié)屈曲，用手觸摸，可捫及兩骨突部，局部無菌操作后，用6號注射針自兩骨突間進(jìn)針，感覺有突破感后，證明針頭進(jìn)入踝關(guān)節(jié)內(nèi)，注入0.2mL尿酸鈉混懸液(濃度為100mg/mL)，正常對照組注入等量生理鹽水。注射尿酸鈉混懸液24h后，觀察右后踝關(guān)節(jié)，如有明顯腫脹，即表明模型復(fù)制成功。

2.1.3給藥：造模后24h開始給藥，均為灌胃治療。息痛散低、中、高劑量用藥劑量分別為18g/kg/d、36g/kg/d、72g/kg/d。別嘌醇組給藥劑量為0.3mg/kg/d。各組均2次/d給藥，連用5d，正常組及模型組予等劑量生理鹽水。

2.2指標(biāo)的檢測

2.2.1 大鼠足跖腫脹度率的測定[3]：用記號筆在大鼠后肢踝關(guān)節(jié)周圍作上記號，測量時(shí)將大鼠右后肢拉直并浸入玻管中，使踝關(guān)節(jié)標(biāo)記與液面重疊，抽吸上升液體至原液面水平，讀取所吸液體體積，此即實(shí)測足跖容積。分別于模型復(fù)制前、模型復(fù)制后24h，治療后1、3、5d后進(jìn)行測量。造模后足跖腫脹度率=(致炎后24h足容積-致炎前足容積)/ 致炎前足容積×100%，治療后足跖腫脹率=(給藥后不同時(shí)間足容積-給藥前足容積)/ 給藥前足容積×100%。

2.2.2 大鼠步態(tài)學(xué)評分：造模后24h、48h觀察大鼠步態(tài)。Ⅰ級：正常行走；Ⅱ級：輕微跛行，受試下肢略有彎曲；Ⅲ級：中度跛行，受試下肢剛觸及地面；Ⅳ級：重度跛行，受試下肢離開地面，三足著地行走。

2.2.3血清炎性指標(biāo)的檢測:末次治療24h后用10%水合氯醛溶液按0.3mL/100g劑量予腹腔內(nèi)注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血，室溫下放置1h，4000轉(zhuǎn)/分，離心10min，取血清，按照放免試劑盒檢測血清IL-1β、TNF-α。

3結(jié)果

3.1大鼠足跖容積的變化結(jié)果如表1所示，息痛散中、高劑量對尿酸鈉所引起的足跖腫脹均具有一定的改善作用，并呈一定的劑量依賴性，高劑量組與別嘌醇組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　息痛散對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠足跖腫脹率的影響±s)

注：與正常組相比△P<0.01；與模型組相比▲P<0.05 ，◇P<0.01；與別嘌醇組相比◆P<0.01；與息痛散低劑量組相比□P<0.01；與息痛散中劑量組相比：■P<0.01

3.2大鼠步態(tài)學(xué)評分與正常組相比，模型組大鼠活動(dòng)減少，出現(xiàn)較嚴(yán)重跛行。與模型組相比，息痛散中、高劑量及別嘌醇組對大鼠步態(tài)有顯著改善作用，而息痛散低劑量組無明顯改善。

表2　息痛散對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠

注：與正常組相比△P<0.01；與模型組相比▲P<0.05 ，◇P<0.01

3.3息痛散隊(duì)型大鼠炎癥因子TNF-α、1L-1β的影響如表2示，與模型組比較，別嘌醇組和息痛散組含量均顯著降低(P<0.05)。

表3　息痛散對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎

注：與正常組相比△P<0.01；與模型組相比▲P<0.05 ，◇P<0.01；與別嘌醇組相比◆P<0.05；與息痛散低劑量組相比□P<0.05

4討論痛風(fēng)(gout)是單鈉尿酸鹽沉積于骨關(guān)節(jié)、腎臟和皮下等部位，引發(fā)的急、慢性炎癥和組織損傷，與嘌呤代謝紊亂及(或)尿酸排泄減少所致的高尿酸血癥直接相關(guān)，屬于代謝性風(fēng)濕病范疇，已經(jīng)成為臨床的常見病、多發(fā)病。急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是由于尿酸鹽結(jié)晶沉積引起的炎癥反應(yīng)，常因受寒、勞累、飲酒、高蛋白高嘌呤飲食及外傷等誘發(fā)[4]。TNF-α、IL-lβ等炎癥因子是引起關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子[5-6]，參與了尿酸鈉誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)組織免疫炎癥反應(yīng)。本研究采用將尿酸鈉晶體注入大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)制備的急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，其病理表現(xiàn)與臨床相似，是痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥物篩選的經(jīng)典造模方法。

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎屬于祖國醫(yī)學(xué)“痹證”、“歷節(jié)病”、“痛風(fēng)”范疇。其名最早記載于梁代陶弘景《名醫(yī)別錄》，如“百節(jié)痛風(fēng)無久新者”。目前認(rèn)為主要因勞倦過度，或七情內(nèi)傷，或酗酒食傷，或關(guān)節(jié)外傷，或復(fù)感外邪等因素誘發(fā)下，體內(nèi)蓄積的痰濁日久化熱，致熱毒、痰濕凝滯于關(guān)節(jié)，形成紅、腫、焮熱及劇痛。因此，該病證屬濕熱瘀毒，或邪熱熾盛，痰濁、熱毒、瘀血共同為病。此時(shí)邪氣雖盛，正氣未虛，表現(xiàn)為實(shí)證。息痛散方中生石膏，辛甘性寒，入足陽明，兼入手太陰、少陽，質(zhì)重降火、氣輕泄熱；忍冬藤清熱解毒、活血祛風(fēng)、宣泄風(fēng)熱，兩藥共為君藥；蒼術(shù)、黃柏一方面清熱解毒助石膏之力，另一方面清熱燥濕化痰；全蟲、桃仁化瘀通絡(luò)止痛，助君藥之用合而為臣藥；川牛膝除活血通經(jīng)外，更具引藥下行之功，使諸藥直達(dá)病所。全方共奏清熱瀉火、燥濕化痰，祛瘀通絡(luò)之效。

本研究通過研究息痛散對尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)息痛散呈劑量依賴性抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠關(guān)節(jié)足跖腫脹度，改善大鼠步態(tài)學(xué)評分，降低血清炎性因子IL-1β、TNF-α水平。息痛散對尿酸鈉晶體誘導(dǎo)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎足跖腫脹度有顯著的改善作用，其機(jī)制可能是與減少炎癥損傷有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

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(收稿2016-01-03；修回2016-01-23)

The effect of xitong powder on acute gouty arthritis in rats

Shaanxi Provincial People’s Hospital(xi’an,710068)

Lei pengLi Juan’eLi Jinget al

ABSTRACTObjective :To study the effects and mechanisms of Xitong Powder on Acute Gouty Arthritis in rats. Methods :The rats of Acute Gouty Arthritis stimulated by monosodium urate crystals were divided randomly according to body weight into Models, Allopurinol group, Xitong Powder Ⅰgroup(18g/kg/d)，Xitong PowderⅡgroup(36g/kg/d)，Xitong Powder Ⅲ group(72g/kg/d), and 8 normal SD rats as normal control group. All rats were treated by corresponding drugs or physiological saline for 5 days. The ankle jionts’ swelling degree and gait profile score were tested at different time, and plasma IL-1β、TNF-α levels were tested by Radioimmuno assay at the end of the experiment. Results:Xitong Powder dose-dependently decreased ankle jionts’ swelling degree and improved gait profile score, and induced the levels of serum IL-1β, TNF-α in Acute Gouty Arthritis rats stimulated by monosodium urate crystals. There was no difference between Allopurinol group and Xitong PowderⅢ group. Conclusion Xitong Powder decreased ankle jionts’ swelling degree in Acute Gouty Arthritis rats stimulated by monosodium urate crystals. The mechanism is possibly mainly related to inflammatory parameters.

KEY WORDSArthritis, Gouty/traditional Chinese Medicine therapyInflammatory parameters Animal，ExperimentationRats @Xitong Powder

【中圖分類號】R684.3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.059

*陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(陜西省科技惠民

專項(xiàng)2013K14-02-10)