許增祥，謝　閔，黃小梅，周芳芳，盧林明

(1.皖南醫(yī)學(xué)院　病理學(xué)教研室，安徽　蕪湖　241002；2.蕪湖市第二人民醫(yī)院　病理科，安徽　蕪湖　241000)

?

三陰性乳腺癌HER2(0/1+)和HER2(2+)的相關(guān)基因表達(dá)差異

許增祥1，謝閔2，黃小梅1，周芳芳1，盧林明1

(1.皖南醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，安徽蕪湖241002；2.蕪湖市第二人民醫(yī)院病理科，安徽蕪湖241000)

【摘要】目的：探討三陰性乳腺癌(TNBC)HER2(0/1+)和HER2(2+)兩組中CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOP Ⅱα的表達(dá)差異及其臨床意義。方法：收集2010年1月～2014年12月TNBC患者HER2(0/1+)組30例，HER2(2+)組15例，采用免疫組織化學(xué)方法檢測CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOP Ⅱα的表達(dá)。結(jié)果：與HER2(2+)組比較，HER2(0/1+)組中CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα的表達(dá)均偏高，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；且與患者年齡、腫瘤大小、病理學(xué)類型及分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯均無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論：TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)兩者存在一些基因表達(dá)差異，可能為臨床靶向治療藥物的選擇提供理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】三陰性乳腺癌；HER2；表達(dá)；差異

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.01.007

三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)是一種特殊分子類型的乳腺癌，其特點(diǎn)是雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)以及人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor reptor 2,HER2)表達(dá)均呈陰性。由于TNBC病人內(nèi)分泌治療和抗HER2靶向治療均無效，可選擇的藥物作用靶點(diǎn)和治療手段相對較少，因而TNBC患者預(yù)后較差。有研究報(bào)道，與HER2(1+)相比，HER2(0)的TNBC中CK5/6或EGFR表達(dá)明顯較高，表現(xiàn)出更像基底細(xì)胞樣乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC)特征。本研究通過采用免疫組織化學(xué)方法，檢測TNBC患者HER2(0/1+)和HER2(2+)兩組內(nèi)CK5/6、表皮生長因子受體(epithelial growth factor,EGFR)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)和DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(topoisomerase，TOPⅡα)的表達(dá)情況，并分析其差異和臨床意義。

1資料與方法

1.1臨床資料隨機(jī)選擇2010年1月～2014年12月在皖南醫(yī)學(xué)院附屬弋磯山醫(yī)院和蕪湖市第二人民醫(yī)院行手術(shù)并病理確診的乳腺癌病人標(biāo)本45例。患者年齡29～75歲，中位年齡52歲，均無其他惡性腫瘤史。所有病例ER、PR和HER2均經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室再次免疫組織化學(xué)驗(yàn)證，其中HER2(0/1+)組30例，HER2(2+)組15例，后者并經(jīng)熒光原位雜交(FISH)技術(shù)證實(shí)呈陰性。

1.2實(shí)驗(yàn)方法所有標(biāo)本均用10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋。根據(jù)HE染色切片選取癌細(xì)胞豐富區(qū)域的對應(yīng)蠟塊進(jìn)行打孔(直徑1.2 mm)，制備組織芯片。組織芯片蠟塊切片厚度4 μm，常規(guī)HE染色。免疫組化染色采用SP法，DAB顯色，技術(shù)操作嚴(yán)格按照國家衛(wèi)計(jì)委PQCC要求進(jìn)行病理質(zhì)控。所有抗體ER、PR、HER2、CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司和北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3結(jié)果判定免疫組化染色結(jié)果判讀分別由3名高年資病理醫(yī)師完成，最后對判讀結(jié)果進(jìn)行綜合分析。ER、PR表達(dá)于細(xì)胞核，著色<10%判為陰性(以周邊正常乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞作陽性對照)。HER2判定依照2014版乳腺癌HER2檢測指南進(jìn)行。CK5/6、VEGF和COX-2主要表達(dá)于細(xì)胞漿，TOPⅡα定位于細(xì)胞核，EGFR呈細(xì)胞膜/胞漿染色，當(dāng)上述基因蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞≥10%時(shí)判為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，所有數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法，以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)中基因表達(dá)差異由表1可知，CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα在TNBC HER2(0/1+)中表達(dá)均高于HER2(2+)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

A示病理組織芯片掃描片(HE染色)，B～F示免疫組化染色(IHC ×200)：B示CK5/6(+)，C示EGFR(+)，D示VEGF(+)，E示COX-2(+)，F(xiàn)示Top Ⅱ(+)。

圖1TNBC組織芯片HE染色及免疫組化標(biāo)記

2.2TNBC HER2(0/1+)組和HER2(2+)組基因表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系由表2、3可見，在HER2(0/1+)和HER2(2+)中，CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2、TopoⅡα的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、病理學(xué)類型及分級、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)。

表1三陰性乳腺癌HER2(0/1+)與HER2(2+)基因表達(dá)差異

HER-2表達(dá)CK5/6+-陽性率/%PEGFR+-陽性率/%PVEGF+-陽性率/%PCOX-2+-陽性率/%PTOPⅡα+-陽性率/%PHER2(0/1+)82226.67>0.05102033.33>0.0522873.33>0.0524680.00>0.05141646.67>0.05HER2(2+)31220.0021313.3310566.678753.3351033.33合計(jì)113424.44123326.67321371.11321371.11192642.22

3討論

三陰性乳腺癌(TNBC)免疫組化標(biāo)記顯示為“三陰性”，即ER、PR、HER2均為陰性，是一種特殊類型的乳腺癌，其病理形態(tài)、臨床特征均與普通乳腺癌有所不同。TNBC發(fā)病率約占所有乳腺癌的12%～24%，平均15%左右。TNBC發(fā)病年齡比普通乳腺癌患者年齡輕，腫瘤體積往往較大，呈推擠性生長，中央往往伴有大片壞死；腫瘤細(xì)胞異型較明顯，組織學(xué)分級高，具有較高的增殖活性，侵襲性強(qiáng)。而且缺乏有效的減危手段，主要以化療為主，治療后大多在1～3年內(nèi)復(fù)發(fā)，多數(shù)在5年內(nèi)死亡。基底細(xì)胞樣乳腺癌(BLBC)同樣具有免疫組化標(biāo)記“三陰性”特征。它與TNBC有相似特性，但不完全相同，存在交叉重復(fù)。BLBC具有基底細(xì)胞基因表型，并不同程度地表達(dá)CK7、CK5/6、干細(xì)胞因子受體(c-kit)、p53等基因。因此，CK5/6和(或)CK14陽性表達(dá)成為BLBC病理診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。也有文獻(xiàn)將CK5/6或EGFR陽性表達(dá)作為具有基底細(xì)胞樣表型乳腺癌的指標(biāo)。TNBC和BLBC均高表達(dá)EGFR，而EGFR高表達(dá)則抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管新生，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和侵襲;乳腺癌患者若表達(dá)CK5/6或EGFR，其生存率明顯降低，預(yù)后往往極差。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TNBC組織內(nèi)CK5/6、EGFR均高表達(dá)，而且HER2(0/1+)組TNBC中CK5/6、EGFR表達(dá)率均高于HER2(2+)組。另外，CK5/6或EGFR陽性表達(dá)者占50%(15/30)，也明顯高于HER2(2+)組，這些結(jié)果提示HER2(0/1+)組TNBC在免疫表型上更加具有BLBC的特征，但CK5/6、EGFR的表達(dá)在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組均與臨床病理資料無顯著相關(guān)性。

表2TNBC HER2(0/1+)中基因表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

臨床病理特征nHER(0/1+)組CK5/6+-PEGFR+-PVEGF+-PCOX-2+-PTOPⅡα+-P年齡/歲>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥5018414612126144810 <5012484810210266腫塊大小>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥2cm226168141481661012 ﹤2cm82626808044病理類型>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 浸潤性導(dǎo)管癌268188182062241214 其他40422222222組織分級>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 Ⅰ、Ⅱ102846828255 Ⅲ20614614146164911淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有18612810144162108 無12210210848448脈管侵犯>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有1441041010410477 無1641261012414279

表3TNBC HER2(2+)中基因表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

臨床病理特征nHER(2+)組CK5/6+-PEGFR+-PVEGF+-PCOX-2+-PTOPⅡα+-P年齡/歲>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥5071616524334 <5082617534426腫塊大小>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥2cm102828646428 ﹤2cm51405412332病理類型>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 浸潤性導(dǎo)管癌13310211947658 其他20202111102組織分級>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 Ⅰ、Ⅱ71616433425 Ⅲ82617625335淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有62424514233 無91809544527脈管侵犯>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有40422403113 無1138011655647

血管內(nèi)皮生長因子能特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管、淋巴管的生成，并能提高血管通透性，在腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。已有研究證實(shí)，TNBC高表達(dá)VEGF，而且患者生存期往往更短。COX-2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在多種腫瘤中高表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、抑制凋亡和促進(jìn)血管新生、腫瘤播散[10]。同樣，COX-2在乳腺癌組織中高表達(dá)，且與預(yù)后相關(guān)[11]。最近有文獻(xiàn)報(bào)道[12]，TNBC中COX-2表達(dá)增高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TNBC組織中VEGF和COX-2呈高表達(dá)，COX-2在HER2(0/1+)TNBC中表達(dá)也高于HER2(2+)，進(jìn)一步提示COX-2高表達(dá)不僅與TNBC有關(guān)，而且可能與BLBC關(guān)系更密切，有可能作為BLBC未來的一個(gè)分子治療靶點(diǎn)。TOP是DNA代謝過程中催化DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)改變的重要的酶，同時(shí)也是多種化療藥物的靶點(diǎn)。乳腺癌中，TOPⅡα不僅在TNBC組織中高表達(dá)[3,13]，而且還可作為蒽環(huán)類藥物的療效預(yù)測指標(biāo)以及乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)[14]。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TOPⅡα在HER2(0/1+)組表達(dá)率高于HER2(2+)組，提示蒽環(huán)類藥物可能對部分TNBC有效。

本實(shí)驗(yàn)中，我們分別研究了HER2(0/1+)和HER2(2+)中這些基因表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系，結(jié)果顯示HER2(0/1+)中這些基因的表達(dá)患者年齡、腫瘤大小、病理學(xué)類型及分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯均無相關(guān)性，可能原因是標(biāo)本量過低所導(dǎo)致。但就部分?jǐn)?shù)據(jù)可言，提示我們這些基因在TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)中表達(dá)存在差異，可能與腫瘤的不同生物學(xué)行為存在某些聯(lián)系。

總之，本研究結(jié)果表明TNBC中，HER2不同表達(dá)狀態(tài)下，一些基因表達(dá)存在差異，這些基因表達(dá)差異不僅反映了TNBC不同的臨床生物學(xué)行為，而且可根據(jù)這些基因表達(dá)的差異，選擇合理的化療方案，對TNBC的預(yù)防和治療、改善預(yù)后等均有重要意義。

【參考文獻(xiàn)】

[1] THIKE AA,CHEOK PY,JARA-LAZARO AR,et al.Triple-negative breast cancer:clinicopathological characteristics and relationship with basal-like breast cancer.Mod Pathol,2010,23(1):123-133.

[2] NAKAGAWA M1,BANDO Y,NAGAO T,et al.Among triple-negative breast cancers,HER2(0)breast cancer shows a strong tendency to be basal-like compared with HER2(1+)breast cancer:preliminary results.Breast Cancer，2012，19(1):54-59.

[3] 《乳腺癌HER2檢測指南(2014版)》編寫組.乳腺癌HER2檢測指南(2014版).中華病理學(xué)雜志,2014,43(4):262-266.

[4] RAKHA EA,ELLIS IO.Triple-negative/basal-like breast cancer:review.Pathology，2009，41(1):40-47.

[5] 劉莉萍,白君,魏亞，等.基底細(xì)胞樣乳腺癌臨床病理特征及免疫組織化學(xué)分析.中華病理學(xué)雜志,2013，42(2):101-105.

[6] LYNCH TJ,BELL DW,SORDELLA R,et al.Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness on no-small-cell lung cancer to gefitinib.N Engl J Med，2004，350(21):2129-2139．

[7] TISCHKOWITZ M，BRUNET JS，BéGIN LR，et al．Use of immunohistochemical markers can refine prognosis in triple negative breast cancer.BMC Cancer,2007,24(7):134．

[8] KOWANETZ M,FERRARA N.Vascular endothelial growth factor signaling pathways:therapeutic perspective.Clin Cancer Res,2006,12(17):5018-5022.

[9] LINDERHOLM BK,HELLBORG H,JOHANSSON U,et al.Significantly higher levels of vascular endothelial growth factor(VEGF)and shorter survival times for patients with primary operable triple-negative breastcancer.Ann Oncol,2009,20(10):1639-1646.

[10] SOLOW RA，DANNENBERG AJ，RUSH D，et al．COX-2 is expressed in human pulmonary，colonic，and manlmary tumors.Cancer，2000，89(12)：2637-2645．

[11] MIGLIETTA A，TOSELLI M，RAVARINO N，et al．COX-2 expression inhuman breast carcinomas：correlation with clinicopathological features and prognostic molecular markers．Expert Opin Ther Targets，2010，14(7)：655-664．

[12] MOSALPURIA K,HALL C,KRISHNAMURTHY S,et al.Cyclooxygenase-2 expression in non-metastatic triple-negative breast cancer patients.Mol Clin Oncol，2014，2(5):845-850.

[13] MRKLIC I,C POGORELI Z,CAPKUN V,et al.Expression of topoisomerase Ⅱ-α in triple negative breast cancer.Appl Immunohistochem Mol Morphol，2014,22(3):182-187.

Gene expression difference between HER2(0/1+)and HER2(2+)in the triple-negative breast cancers

XU Zengxiang,XIE Min,HUANG Xiaomei,ZHOU Fangfang,LU Linming

Department of Pathology,Wannan Medical College,Wuhu 241002 China

【Abstract】Objective：To investigate the expression difference of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2,TOPⅡα genes and their clinical significance between HER2(0/1+)and HER2(2+)in the triple-negative breast cancers(TNBC).Methods:Thirty cases of TNBC with HER2(0/1+)and 15 with HER2(2+)were included.Immunohistochemistry was performed to detect the expression of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2 and TOPⅡα in the tissue specimens obtained from the TNBC cases.Results:Up-regulated expression of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2 and TOPⅡα was observed in cases of HER2(0/1+),yet the difference was not statistically significant,and expression of these genes was not correlated with the patient′s ages，tumor size,type of pathology,histology grade,lymph node metastasis and vascular invasion(P>0.05).Conclusion:Expression of HER2(0/1+)appears somewhat different from that of in TNBC,and this biological marker may be an important theoretical support to molecular target therapy for TNBC.

【Keywords】triple-negative breast cancer;HER2;expression;differences

文章編號：·臨床醫(yī)學(xué)·1002-0217(2016)01-0022-04

基金項(xiàng)目：皖南醫(yī)學(xué)院中青年科研基金項(xiàng)目(WK201513)

收稿日期：2015-05-29

作者簡介：許增祥(1980-),男,講師,碩士,(電話)0553-3932474；(電子信箱)xuzx1980@126.com；

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】【中圖號】R 737.9A

謝閔(1981-)，女，主治醫(yī)師，博士研究生，(電子信箱)76206423@qq.com，通訊作者.