林　琳，邰　賀，朱紅霞，趙明光，馮　妍

(1. 武警遼寧省總隊醫(yī)院，遼寧 沈陽 110034；2. 沈陽軍區(qū)總醫(yī)院，遼寧 沈陽 110004)

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腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術(shù)后免疫功能與營養(yǎng)狀態(tài)的影響

林琳1，邰賀1，朱紅霞1，趙明光2，馮妍1

(1. 武警遼寧省總隊醫(yī)院，遼寧 沈陽 110034；2. 沈陽軍區(qū)總醫(yī)院，遼寧 沈陽 110004)

[摘要]目的探討腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑瑞先對肝硬化肝癌大鼠肝部分切除術(shù)后營養(yǎng)狀態(tài)與免疫功能的影響。方法將成功建立肝硬化肝癌模型大鼠26只隨機分為觀察組與對照組，每組13只。2組均應(yīng)用Higgins法行大鼠肝部分切除術(shù)，觀察組術(shù)后6 h灌胃腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑瑞先,連用7 d；對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，不予腸內(nèi)營養(yǎng)液。比較2組大鼠術(shù)前及術(shù)后7 d免疫功能與營養(yǎng)狀態(tài)。結(jié)果術(shù)后2組血清TG、TC、LDL、Hb水平均較術(shù)前明顯降低(P均<0.05)，但觀察組各指標(biāo)水平明顯高于對照組(P均<0.05)。術(shù)后2組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯低于術(shù)前(P均<0.05)，CD8+明顯高于術(shù)前(P均<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯高于對照組(P均<0.05)，CD8+明顯低于對照組(P均<0.05)。結(jié)論肝硬化肝癌大鼠行肝部分切除術(shù)后給予腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑有助于改善大鼠的營養(yǎng)狀況與免疫功能。

[關(guān)鍵詞]肝硬化；肝癌；腸內(nèi)營養(yǎng)；營養(yǎng)狀況；免疫功能

肝硬化和肝癌均可導(dǎo)致機體營養(yǎng)不良與免疫力低下，二者同時存在時機體營養(yǎng)不良和免疫功能低下更為明顯[1]。手術(shù)是治療肝硬化肝癌的重要手段，但術(shù)后由于營養(yǎng)不良與免疫力低下，極易發(fā)生急性肝衰竭和腫瘤復(fù)發(fā)[2]，故改善肝硬化肝癌患者圍手術(shù)期的營養(yǎng)與免疫狀況對于患者的預(yù)后是十分重要的。圍手術(shù)期營養(yǎng)支持已證實能很好地改善營養(yǎng)狀態(tài)與免疫功能狀態(tài)[3]，但營養(yǎng)支持對免疫功能影響的研究相對較少。因此本實驗通過建立肝硬化肝癌大鼠模型，觀察了肝硬化肝癌大鼠術(shù)后給予腸內(nèi)營養(yǎng)支持對免疫功能與營養(yǎng)狀況的影響，旨在為臨床選擇合理營養(yǎng)治療方法提供依據(jù)。

1實驗資料

1.1實驗動物40只Wistar大鼠，雌雄不限，周齡8～10周，體質(zhì)量230～250 g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號：SCXK-(京)2007-0001。飼喂普通飼料[購自北京科澳協(xié)力飼料有限公司，合格證號：京動(2000)第015號]。

1.2試劑與儀器主要試劑：瑞先，華瑞公司生產(chǎn)，規(guī)格：500 mL/瓶。TG、TC、LDL檢測所需7020全自動生物化學(xué)分析儀為日本日立公司產(chǎn)品，試劑盒為上海復(fù)星長征有限公司產(chǎn)品。Hb采用氰化高鐵法測定，淋巴細胞分離液(Ficoll-hypque)為天津TBD公司產(chǎn)品，IgGrl-FITC/IgGr2a-PE、CD3-FITC/ CD4-PE、CD3-FITC/ CD8-PE和FACS Lysing Solution溶血素為BD公司產(chǎn)品； FACSCalibur流式細胞儀、AxSYM型全自動免疫發(fā)光分度儀為美國雅培公司產(chǎn)品；雙色熒光試劑盒為美國BD公司產(chǎn)品。NFS-221S型超低溫冰箱由中國海爾集團提供。

1.3腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑的配置按非蛋白質(zhì)熱量171.5 kcal/(kg·d)(1 cal=4.2 J)、氮1.22 g/(kg·d)，熱氮比為140∶1配置營養(yǎng)液(華瑞公司產(chǎn)品)。營養(yǎng)乳劑均現(xiàn)用現(xiàn)配，4 ℃避光保存。

1.4肝硬化肝癌大鼠模型的建立大鼠皮下注射60%四氯化碳(美國Sigma公司產(chǎn)品)油溶液0.13 mL/(100 g·5 d)，3%～5%乙醇代替飲用水，40 d后停止用藥，動物穩(wěn)定1周后在B超引導(dǎo)下將濃縮的Walker-256瘤細胞混懸液(購于中國醫(yī)科大學(xué)細胞生物學(xué)教研室)注入大鼠肝中葉，取種植瘤直徑0.5～0.8 cm的造模成功后大鼠用于實驗研究[2]。

1.5實驗動物分組與處理將成功造模的26只大鼠隨機分為觀察組與對照組，每組13只，人工控溫 20～26 ℃，12 h光照，12 h黑暗，顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水取食。2組均于術(shù)前最后一次進食后禁食水10 h，無菌條件下抽取大鼠尾緣靜脈血送檢，并立即行肝臟腫瘤切除術(shù), 按照Higgins法切除帶瘤的肝中葉，縫合切口后，用75%乙醇消毒切口，定期換藥。手術(shù)后6 h，觀察組給予營養(yǎng)乳劑 120 mL/kg灌胃，連續(xù)7 d；對照組給予普通飼料喂養(yǎng)。2組最后一次喂養(yǎng)后禁食水10 h，無菌條件下抽取大鼠尾緣靜脈血送檢。

1.6檢測項目

1.6.1血清TG、TC、LDL、Hb水平抽取的靜脈血用高速離心機3 000 r/min離心5 min，用吸管將上層血清吸出，隨后放入容積為1.5 mL的離心管中，并立即放于-30 ℃冰箱中冷凍保存，在1 周內(nèi)按試劑盒說明檢測TG、TC、LDL、Hb水平。

1.6.2免疫指標(biāo)水平將抽取的靜脈血3 mL注入玻璃試管中，靜置10 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清在-70 ℃超低溫冰箱內(nèi)保存待檢。使用流式細胞術(shù)細胞計數(shù)儀檢測外周血T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平，用淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離外周血有核細胞，染色標(biāo)記30 min，棄去上清液，沖洗2次后，采用免疫散射比濁法檢測免疫球蛋白IgG、IgM、IgA水平。

2結(jié)果

2.12組手術(shù)前后營養(yǎng)狀況比較術(shù)前2組營養(yǎng)狀態(tài)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。術(shù)后2組血清TG、TC、LDL、Hb水平均較術(shù)前明顯降低(P均<0.05)，但觀察組各指標(biāo)水平明顯高于對照組(P均<0.05)。見表 1。

表1　2組手術(shù)前后營養(yǎng)情況比較±s)

注：①與術(shù)前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

2.22組手術(shù)前后細胞免疫功能比較術(shù)前2組血清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；術(shù)后2組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于術(shù)前(P均<0.05)，CD8+明顯高于術(shù)前(P均<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于對照組(P均<0.05)，CD8+明顯低于對照組(P均<0.05)。見表2。

表2　2組手術(shù)前后細胞免疫功能比較

注：①與術(shù)前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

2.32組手術(shù)前后體液免疫功能比較術(shù)前2組血清IgG、IgM、IgA水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；術(shù)后2組IgG、IgM、IgA水平均明顯低于術(shù)前(P均<0.05)，但觀察組各指標(biāo)水平均明顯高于對照組(P均<0.05)。見表3。

表3　2組手術(shù)前后體液免疫功能比較

注：①與術(shù)前比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

3討論

肝硬化肝癌患者術(shù)后均有明顯的營養(yǎng)不良和免疫功能低下，而進行營養(yǎng)支持治療可以改善患者的營養(yǎng)狀況和免疫功能。以往研究認為腹部中等強度手術(shù)后6 h即可測得復(fù)合運動波，小腸在術(shù)后6～8 h就能接受腸內(nèi)物質(zhì)的輸入，這使早期經(jīng)腸營養(yǎng)成為可能。目前將術(shù)后6～24 h給予腸內(nèi)營養(yǎng)定義為早期腸內(nèi)營養(yǎng)，早期腸內(nèi)營養(yǎng)可促進胃腸道功能恢復(fù)，有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，防治腸道菌群移位，保證機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[4]。

Hb、TG、TC、LDL是反映人體營養(yǎng)狀態(tài)的重要指標(biāo)，王佳等[5]研究表明TC水平能比血漿白蛋白更敏感地對營養(yǎng)狀況做出評價，即低血漿TC水平是一個評價患者營養(yǎng)缺乏與營養(yǎng)不良的敏感指標(biāo)，其可能原因為：①膽固醇的半衰期較短，約8 d，血清白蛋白約為20 d，血紅蛋白約為120 d。②疾病早期便會出現(xiàn)低血漿TC水平[6]。但目前尚無一項指標(biāo)能夠?qū)I養(yǎng)狀況做出敏感的診斷與預(yù)測營養(yǎng)不良的發(fā)生，需要綜合多個指標(biāo)來評價營養(yǎng)狀況[5，7]。本實驗結(jié)果顯示，術(shù)后2組血清TG、TC、LDL、Hb水平均較術(shù)前明顯降低，但觀察組各指標(biāo)水平明顯高于對照組，與王紹山等[3]實驗結(jié)果相同。

機體免疫功能主要由T、B淋巴細胞控制。細胞免疫是T淋巴細胞參與的一種重要免疫反應(yīng)，惡性腫瘤患者往往免疫功能受到嚴重抑制，表現(xiàn)為外周血中CD3+、CD4+減少， CD8+增多，CD4+/CD8+比例降低[8]。IgG、IgM是人體內(nèi)重要的免疫球蛋白，在體液免疫過程中發(fā)揮重要作用[9]。本實驗結(jié)果顯示，術(shù)后2組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯低于術(shù)前，CD8+明顯高于術(shù)前(P均<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgG、IgM、IgA水平均明顯高于對照組，CD8+明顯低于對照組。與賀德等[2]實驗結(jié)果相同。

綜上所述，腸內(nèi)營養(yǎng)可明顯改善肝硬化肝癌大鼠術(shù)后的營養(yǎng)狀況與免疫功能，但其具體機制仍不明確，免疫功能與營養(yǎng)狀態(tài)是否存在一定的相關(guān)性還需要進一步研究。

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Effect of enteral nutrition emulsion on immune function and nutritional status after partial hepatectomy in rats with liver cirrhosis

LIN Lin1, TAI He1, ZHU Hongxia1, ZHAO Mingguang2, FENG Yan1

(1.Armed Police Corps Hospital of Liaoning Province, Shenyang 110034, Liaoning, China; 2.The General Hospital of Shenyang Military, Shenyang 110004, Liaoning, China)

Abstract:Objective It is to investigate the influence of enteral nutrition emulsion on immune function and nutritional status after partial hepatectomy in rats with liver cirrhosis. Methods 26 rats of liver cirrhosis model which were established successfully were randomly divided into observation group and the control group, 13 cases in each group. Higgins method was used in the 2 groups for partial hepatectomy in rats. After operation, the rats were administered with oral enteral nutrition emulsion and regular diet in the observation group, whereas with regular diet only in the control group. The indexes of immune function and nutritional status before and after operation between two groups were compared. Results The levels of hemoglobin (Hb), total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein (LDL) were significantly lower after operation in the two groups (all P<0.05), but the indexes of the observation group were markedly higher than that of the control group (all P<0.05). The concentrations of CD3+, CD4+, IgG, IgM, IgA and CD4+/CD8+ were significantly lower after operation (all P<0.05) and the concentration of CD8+ were significantly higher (all P<0.05) in the two groups, and the concentration of CD3+, CD4+, IgG, IgM, IgA and CD4+/CD8+ in the observation group were significantly higher, and the concentration of CD8+ was significantly lower than those in the control group (all P<0.05). Conclusion After partial hepatectomy, the enteral nutrition emulsion can help to improve the nutritional status and immune function in rats with liver cirrhosis.

Key words:hepatic cirrhosis; hepatoma; enteral nutrition; nutritional status; immune function

[收稿日期]2015-08-16

[中圖分類號]R-332

[文獻標(biāo)識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)06-0601-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.06.009

[基金項目]國家自然科學(xué)基金項目(81471213)

[作者簡介]林琳，女，護師，主要從事腫瘤患者營養(yǎng)護理研究。[通信作者]邰賀，E-mail: www.tai_he83@126.com