王　蕾，任志彬

（1.邯鄲出入境檢驗(yàn)檢疫局，河北邯鄲　056017；2.河北工程大學(xué)農(nóng)學(xué)院，河北邯鄲　056038）

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高效液相色譜法測(cè)定飲料中合成色素不確定度評(píng)估

王蕾，任志彬

（1.邯鄲出入境檢驗(yàn)檢疫局，河北邯鄲056017；2.河北工程大學(xué)農(nóng)學(xué)院，河北邯鄲056038）

摘要：根據(jù)SN/T 1743-2006《食品中誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測(cè)高效液相色譜法》方法，利用高效液相色譜測(cè)定飲料中合成色素的含量，通過(guò)分析不確定度來(lái)源，建立測(cè)量過(guò)程的數(shù)學(xué)模型。

關(guān)鍵詞：誘惑紅；亮藍(lán)；日落黃；不確定度

合成色素具有色澤鮮艷，著色力強(qiáng)，穩(wěn)定性好，易溶于水，易調(diào)色，品質(zhì)均一，成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用。不確定度作為與檢測(cè)結(jié)果相聯(lián)系衡量檢測(cè)水平高低的參數(shù)，越來(lái)越受到世界各國(guó)的重視。本文根據(jù)SN/T 1743-2006［1］方法，利用配有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀檢測(cè)飲料中的誘惑紅、亮藍(lán)、日落黃三種合成色素，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，建立數(shù)學(xué)模型，討論測(cè)定過(guò)程中各分量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的不確定度貢獻(xiàn)［2-4］，通過(guò)不確定度評(píng)估［5］，發(fā)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大的因素，通過(guò)改進(jìn)減少誤差，提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀配紫外檢測(cè)器，C18反相色譜柱。誘惑紅［GBW（E）100164］、亮藍(lán)［GBW（E）100162］、日落黃［GBW（E）100159］，由北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.2高效液相色譜分析條件

甲醇/乙酸銨（0.02mol/L）淋洗液梯度洗脫：甲醇20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%～98%，繼續(xù)6min。進(jìn)樣量：10uL；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：室溫。

1.3樣品測(cè)定方法

依據(jù)SN/T 1743-2006［1］，取50g飲料樣品，加熱驅(qū)除二氧化碳，然后用水稀釋定容至50mL，經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾后供液相色譜分析，外標(biāo)法定量。

1.4計(jì)算公式

式中：

X——樣品中色素的含量，單位為克每千克或克每升（g/kg或g/L）；

m——樣液中色素的量，單位為微克（ug）；

M——樣品量，單位為克或毫升（g或mL）；

V1——樣品稀釋總體積，單位為毫升（mL）；

V2——進(jìn)樣體積，單位為毫升（mL）。

1.5不確定度來(lái)源分析

（1）樣品處理時(shí)，稱量ure（m）和定容urel（V50mL）引入的不確定度。

（2）高效液相色譜儀引入的不確定度。

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度。

（4）重復(fù)測(cè)量引入的不確定度。

2　不確定度評(píng)定

2.1稱量引入的不確定度urel（m）

應(yīng)用分度值為10mg的分析天平，稱量樣品50.00g，查閱天平檢定證書(shū)，在0～50g范圍內(nèi)，天平的誤差為0.005g，按照矩形分布，由天平稱量導(dǎo)致樣品質(zhì)量的不確定度按均勻分布為：

2.2定容引入的不確定度urel（V）

樣品定容引入的不確定度因素主要包括50 mL容量瓶體積校準(zhǔn)和溫度變化兩個(gè)方面。

根據(jù)JJG 196-2006［6］，A級(jí)50 mL容量瓶允許的最大允差為±0.05mL，假設(shè)為矩形分布，其相對(duì)不確定度為：

實(shí)驗(yàn)中控制室溫為20℃±5℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃，按照矩形分布則u（V2）=

2.3高效液相色譜儀引入的不確定度urel（Y）

實(shí)驗(yàn)使用Waters e2695高效液相色譜儀，檢定證書(shū)給出在k=2時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.2%，其引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量為0.001。

2.4標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度urel（C）

本實(shí)驗(yàn)所用的三種標(biāo)準(zhǔn)品，誘惑紅［GBW（E）100164］、亮藍(lán)［GBW（E）100162］、日落黃［GBW（E）100159］的相對(duì)擴(kuò)展不確定度均為1%（k=2），則由標(biāo)準(zhǔn)品純度引入的不確定度為0.005。

標(biāo)準(zhǔn)溶液原液濃度為1mg/mL，5mL/支，將其配制成濃度梯度為10ug/mL，20ug/mL，30ug/mL，40ug/mL，50ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線。配置過(guò)程中的不確定度主要由20-200uL、100-1000uL移液器和10mL容量瓶引入。查儀器設(shè)備校準(zhǔn)證書(shū)得移液器的擴(kuò)展不確定度均為0.6%（k=2），根據(jù)JJG196-2006［6］，算法同2.2，10mL容量瓶引入的不確定度為0.00115，則由標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的不確定度為：u（C2）=

標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)不確定度urel（C）=

2.5重復(fù)測(cè)量引入的不確定度urel（S）

用濃度為1μg /mL人工色素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收率的測(cè)定，其前處理及測(cè)定過(guò)程與實(shí)際飲料樣品一致，重復(fù)7次。由貝塞爾公式法得到：

表1　重復(fù)測(cè)量結(jié)果（n=7）

3　合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：urel（X）=，則urel（X）紅=0.008007，urel（X）藍(lán)=0.008017，urel（X）黃= 0.008007。

取置信概率為95%，則k=2，擴(kuò)展不確定度：U=u（X）×2

U紅=u（X）紅×2=0.0070×2=0.014（mg/kg），

U藍(lán)=u（X）藍(lán)×2=0.0090×2=0.018（mg/kg），

U黃=u（X）黃×2=0.0070×2=0.014（mg/kg）。

參考文獻(xiàn)：

［1］SN/T 1743-2006.食品中誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測(cè)高效液相色譜法［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

［2］李錦，等.離子色譜法測(cè)定牛乳中硫氰酸鹽含量的不確定度評(píng)估［J］.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015，6，（10）:3810-3816.

［3］蘭淑惠，等.高效液相色譜法測(cè)定食品中甲醛的測(cè)量不確定度評(píng)定［J］.大眾科技，2014，16，（179）:56-57，68.

［4］李芳，等.氣相色譜法測(cè)定果蔬中毒死蜱的不確定度評(píng)定［J］.廣州化工，2014，42，（22）:136-138，180.

［5］JJF1059.1-2012.測(cè)量不確定度評(píng)定與表示［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

［6］JJG196-2006.常用玻璃量器檢定規(guī)程［S］.北京:中國(guó)計(jì)量出版社，2006.

［作者簡(jiǎn)介］王蕾（1991-），女，河北邢臺(tái)人，河北工程大學(xué)研究生.

［收稿日期］2016-03-15

中圖分類號(hào)：O657.7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-4658（2016）02-0191-02