孫灌寧
【摘 要】目的:提高液質(zhì)聯(lián)用法的測(cè)量不確定度的普及與運(yùn)用水平。方法:精選匯總了近年來(lái)國(guó)內(nèi)采用液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定不確定度方面發(fā)表的論文。結(jié)果與討論總結(jié)不確定度評(píng)定的主要參數(shù),指出了目前研究中存在的主要問題,以期為今后的研究提供基礎(chǔ)資料。
【關(guān)鍵詞】不確定度;液質(zhì)聯(lián)用;研究進(jìn)展
0 概述
1993年,BIPM(國(guó)際計(jì)量局)、ISO(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織)、IFXX(國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)會(huì))等七個(gè)國(guó)際組織聯(lián)合制定了《測(cè)量不確定度表示指南》[1],將測(cè)量不確定度定義為:“與測(cè)量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的一個(gè)參數(shù),用以表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性”,即不確定度用于表達(dá)測(cè)量結(jié)果的分散程度,是一個(gè)可用數(shù)字描述的定量概念[2]。,測(cè)量的水平越高,試驗(yàn)質(zhì)量越高,則測(cè)量不確定度越小;反之亦然。測(cè)量不確定度評(píng)定的包括以下幾步:第一,規(guī)定被測(cè)量;第二,識(shí)別不確定度的來(lái)源;第三,不確量化定度分量;第四,計(jì)算合成不確定度;第五,報(bào)告不確定度[3]。隨著時(shí)代的發(fā)展,檢測(cè)手段和檢驗(yàn)方法的逐步完善,為了更合理、科學(xué)地控制質(zhì)量,測(cè)量不確定度被引入食品藥學(xué)領(lǐng)域[3]。
液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(Liquid Chromatography-Massspectrometry)是20世紀(jì)發(fā)展起來(lái)的一門綜合分析技術(shù),該技術(shù)在天然藥物化學(xué)成分分離和鑒定、藥物動(dòng)力學(xué)和藥物代謝產(chǎn)物研究、蛋白質(zhì)分離和鑒定、殘留物分析、臨床診斷研究等方面都具有廣泛的應(yīng)用[4]。作為目前最重要的分離和鑒定分析方法之一的技術(shù),其不確定度的評(píng)定也理所應(yīng)當(dāng)受到充分重視。近年來(lái)液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定的不確定度評(píng)定也有不少文獻(xiàn)報(bào)道,但由于液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定不像傳統(tǒng)光譜或高效液相色譜法測(cè)定參數(shù)簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好,不同儀器、不同參數(shù)、不同目標(biāo)物質(zhì)……甚至不同分析時(shí)間均產(chǎn)生不同誤差,因此不確定度的評(píng)定也相對(duì)復(fù)雜。
本文綜述了近年來(lái)發(fā)表的在食品藥品等領(lǐng)域液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定不確定度的主要文獻(xiàn)。
1 液質(zhì)聯(lián)用法的測(cè)量不確定度評(píng)定
張清華、楊勁、賀英等[5]采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定曲克蘆丁血藥濃度,用自底向上法與方法學(xué)驗(yàn)證數(shù)據(jù)相結(jié)合的方法,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度和合成相對(duì)不確定度。結(jié)果:提取回收率和標(biāo)準(zhǔn)曲線是最主要不確定度分量。其中,標(biāo)準(zhǔn)曲線分量大小與濃度范圍和重復(fù)次數(shù)密切相關(guān)。
楊杰、譚潔,鄒建軍[6],評(píng)價(jià)了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定氯吡格雷羧酸代謝物SR26334血藥濃度的不確定度,結(jié)果20μg/L的SR26334的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.816μg/L,擴(kuò)展不確定度為1.63μg/L。結(jié)論是樣品前處理和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合是濃度測(cè)定結(jié)果的主要的不確定度來(lái)源。
武利慶、王晶[7]比對(duì)了直接流動(dòng)注射電噴霧質(zhì)譜法和液質(zhì)聯(lián)用電噴霧質(zhì)譜法測(cè)定牛血清白蛋白相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)量不確定度:直接流動(dòng)注射法較液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定擴(kuò)展不確定度高。作者認(rèn)為:液質(zhì)聯(lián)用電噴霧質(zhì)譜法測(cè)定結(jié)果的中心值與理論值更為接近主要是由于在直接流動(dòng)注射分析時(shí)樣品中殘留的緩沖鹽和少量的多肽等雜質(zhì)可能與牛血清白蛋白形成加合物,使相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定結(jié)果發(fā)生偏差;而液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定時(shí)經(jīng)過色譜柱的分離和脫鹽,雜質(zhì)對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定結(jié)果的影響大大降低。
徐淑暖、韓媛媛、陳硯朦等通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中氯霉素的殘留[8]量,內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果:不確定度的來(lái)源主要是標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、待測(cè)樣品的制備時(shí)、回收率和樣品測(cè)定的重復(fù)性等。作者對(duì)測(cè)量不確定度較大的原因進(jìn)行了討論,并對(duì)計(jì)算方法進(jìn)行簡(jiǎn)化,認(rèn)為樣品中氯霉素的含量低,對(duì)照品稀釋步驟較多,引入貢獻(xiàn)最大。并且待測(cè)樣品基底和前處理復(fù)雜,造成回收率偏低,引入的不確定度較大。作者將與天平稱量操作的重復(fù)性、定容體積重復(fù)性和移液體積重復(fù)性這幾項(xiàng)重復(fù)性分量合并為總測(cè)量過程的一個(gè)分量,由測(cè)量結(jié)果的重復(fù)性表示,不再單獨(dú)計(jì)算。
任雪冬、劉成雁、林雪征等[9]對(duì)畜禽肉中十種磺胺類獸藥殘留檢測(cè)的不確定度進(jìn)行了分析和評(píng)定。結(jié)果:標(biāo)準(zhǔn)品的配制、稀釋,標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn),樣品回收率對(duì)樣品的相對(duì)不確定度貢獻(xiàn)較大。作者同樣認(rèn)為樣品前處理中樣本制備、提取、凈化等環(huán)節(jié)帶來(lái)的污染或損失,基質(zhì)干擾,儀器進(jìn)樣、檢測(cè)器響應(yīng)等誤差均可以通過增加回收率實(shí)驗(yàn)考察不確定度貢獻(xiàn)。
2 結(jié)果與討論
測(cè)定不確定度與測(cè)量誤差既有區(qū)別,又有聯(lián)系。誤差是客觀存在的測(cè)量結(jié)果與真值之差。但由于真值往往不知道,無(wú)法準(zhǔn)確得到。測(cè)量不確定度是說(shuō)明測(cè)量分散性的參數(shù),由分析和評(píng)定得到,因而與人的認(rèn)識(shí)程度有關(guān)[10]。測(cè)量誤差很小,但對(duì)不確定度的認(rèn)識(shí)不足,計(jì)算的不確定度可能較大;反之分析估計(jì)不足,給出的不確定度比實(shí)際偏小。因此,科學(xué)的評(píng)估方法是關(guān)鍵。
高效液相色譜法評(píng)估測(cè)量不確定度的文獻(xiàn)較多,鑒于液質(zhì)聯(lián)用法與普通高效液相色譜法的主要區(qū)別:測(cè)量濃度范圍低和基質(zhì)效應(yīng)。采用液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定測(cè)量不確定度的文獻(xiàn)多得出結(jié)論:不確定度來(lái)源主要為標(biāo)準(zhǔn)曲線和前處理。這主要是由于低濃度需要更多的稀釋步驟,減少基質(zhì)效應(yīng)需要更復(fù)雜的樣品前處理步驟,更需要進(jìn)行回收率的驗(yàn)證;為了消除前處理回收率的變化,可以引入內(nèi)標(biāo)定量,而內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的回收率和基質(zhì)效應(yīng)又需要進(jìn)一步驗(yàn)證。因此,采用液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定測(cè)量不確定度時(shí)應(yīng)著重關(guān)注基質(zhì)效應(yīng)和回收率的問題,并且避免重復(fù)計(jì)算。
【參考文獻(xiàn)】
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[5]張清華,楊勁,賀英,湯麗玲,杜迎翔.對(duì)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定曲克蘆丁血藥濃度的不確定度評(píng)價(jià)[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2010,26(01):68-70.
[6]楊杰,譚潔,鄒建軍.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定氯吡格雷羧酸代謝物SR26334血藥濃度的不確定度評(píng)價(jià)[J].中國(guó)新藥與臨床雜志,2013,32(08):664-668.
[7]武利慶,王晶.電噴霧質(zhì)譜法測(cè)定牛血清白蛋白相對(duì)分子質(zhì)量及測(cè)定結(jié)果的不確定度評(píng)估[J].化學(xué)分析計(jì)量,2007,16(1):20-25.
[8]徐淑暖,韓媛媛,陳硯朦,彭寨玉,張少彬. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留量的不確定度評(píng)定[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,40(05):454-458.
[9]任雪冬,劉成雁,林雪征,趙海波.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定畜禽肉中十種磺胺類獸藥殘留的不確定度評(píng)定[J].中國(guó)獸藥雜志,2011,45(05):20-25.
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