馮穩(wěn)，宋魏，于慶凱，趙冬梅

[鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（河南省腫瘤醫(yī)院）病理科，河南鄭州450003]

?

CD117和神經(jīng)巢蛋白在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義*

馮穩(wěn)，宋魏，于慶凱，趙冬梅

[鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（河南省腫瘤醫(yī)院）病理科，河南鄭州450003]

摘要：目的探討CD117、神經(jīng)巢蛋白（Nestin）在三陰性乳腺癌（TNBC）組織中的表達(dá)及臨床意義。方法收集2010年11月-2012年5月于本院手術(shù)治療的乳腺癌患者腫瘤組織病理切片，隨機(jī)選取其中50例經(jīng)免疫組織化學(xué)染色ER、PR、HER2均為陰性者，設(shè)為實(shí)驗(yàn)組。另隨機(jī)選取普通乳腺癌組織50例，設(shè)為對(duì)照組。通過(guò)免疫組織化學(xué)方法研究正常實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組切片組織中CD117、Nestin的表達(dá)情況，分析CD117、Nestin在TNBC中的臨床意義。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組CD117、Nestin表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論在TNBC組織中CD117、Nestin的表達(dá)顯著上調(diào)，與TNBC的發(fā)生關(guān)系密切。

關(guān)鍵詞：CD117；Nestin；免疫組織化學(xué)；三陰性乳腺癌

*基金資助：河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（No：2011020159）

三陰性乳腺癌（triple negative breast carcinoma，TNBC）是指雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長(zhǎng)因子受體（human epidermal growth factor receptors，HER-2）3者均為陰性表達(dá)的乳腺癌，約占所有乳腺癌患者的15%～19%[1-2]。TNBC發(fā)病年齡比其他類型乳腺癌小，社會(huì)經(jīng)濟(jì)地位低的婦女發(fā)病率高，腫塊直徑較大，組織學(xué)Ⅲ級(jí)比例高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率高[3-4]，無(wú)病生存率及總生存率均比非三陰乳腺癌差[5]。術(shù)后3年是TNBC的復(fù)發(fā)高峰[6]，且更易出現(xiàn)內(nèi)臟及軟組織轉(zhuǎn)移。目前乳腺癌的治療主要為內(nèi)分泌治療和分子靶向治療，但對(duì)三陰乳腺癌的治療效果欠佳[7-9]。

已有研究證實(shí)，原癌基因蛋白（proto-oncogene proteins c-kit，CD117）是c-kit基因的表達(dá)產(chǎn)物，而c-kit原癌基因編碼跨膜酪氨酸激酶受體，屬于受體型酪氨酸激酶Ⅲ家族[10]，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有重要的調(diào)控作用。因此，本研究擬檢測(cè)TNBC組織中CD117、神經(jīng)巢蛋白（Nestin）的表達(dá)情況，探索CD117、Nestin與三陰性乳腺癌的相互關(guān)系，現(xiàn)將研究方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料

收集2010年11月-2012年5月于鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院行乳腺癌手術(shù)治療者的腫瘤組織病理切片，篩選出其中經(jīng)免疫組織化學(xué)染色ER、PR、HER2均為陰性者，隨機(jī)選取50例設(shè)為實(shí)驗(yàn)組。50例切片組織來(lái)源均為女性患者，年齡24～49歲，平均（37.21±4.21）歲。50例病例均為原發(fā)性腫瘤，術(shù)前未經(jīng)任何治療，術(shù)后經(jīng)病理診斷為TNBC并排除合并其他腫瘤。另隨機(jī)選取普通乳腺癌組織50例作為對(duì)照組，組織來(lái)源均為女性，年齡27～46歲，平均（36.88±3.91）歲。本項(xiàng)目經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核通過(guò)，所有研究對(duì)象均自愿參與本項(xiàng)目，并簽署知情同意書。兩組病例在年齡、性別及體重指數(shù)方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2方法

各組織切片中CD117、Nestin表達(dá)的檢測(cè)：組織切片先后予梯度乙醇脫水，抗原修復(fù)，一抗過(guò)夜（鼠抗人CD117抗體、鼠抗人Nestin抗體，美國(guó)Abcam），二抗（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記）室溫靜置，蘇木素復(fù)染等處理，中性樹膠封固，光鏡下觀察。

1.3觀察指標(biāo)

光鏡下觀察，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性。觀察10個(gè)高倍鏡視野，各計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤25%為陰性，>25%為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組免疫組織化學(xué)指標(biāo)（CD117、Nestin）的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

CD117、Nestin表達(dá)情況比較：實(shí)驗(yàn)組50張組織切片中，35例CD117表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為70%，39例Nestin表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為78%，見(jiàn)圖1；對(duì)照組10張組織切片中，2例CD117表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為20%，2例Nestin表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為20%，見(jiàn)圖2；就CD117、Nestin表達(dá)陽(yáng)性率進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性率均高于對(duì)照組。見(jiàn)附表。

圖1　實(shí)驗(yàn)組乳腺組織切片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×200）

圖2　普通乳腺癌組織切片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×200）

附表　CD117、Nestin表達(dá)情況比較　例（%）

3　討論

c-kit基因是位于染色體1q12-13上的原癌基因，參與多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)錄，通過(guò)一系列自分泌和旁分泌機(jī)制促進(jìn)細(xì)胞的增殖，與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展聯(lián)系密切[11]。CD117為c-kit基因的表達(dá)產(chǎn)物，在原始細(xì)胞中高表達(dá)，隨著細(xì)胞的增殖分化，其表達(dá)水平逐漸降低，但在腫瘤組織中顯著表達(dá)，可作為惡性腫瘤的預(yù)后指標(biāo)之一[12]。Nestin主要表達(dá)于發(fā)育狀態(tài)的幼稚細(xì)胞中，正常分化成熟的組織器官中幾乎難以檢測(cè)到Nestin[13]，但近年來(lái)有學(xué)者在多種腫瘤組織中檢測(cè)到Nestin重新表達(dá)，提示Nestin可能與細(xì)胞惡性增殖有關(guān)[14]。

原癌基因在高度分化組織中處于抑制狀態(tài)，表達(dá)水平極低，當(dāng)某些致癌因素作用于機(jī)體，c-kit等原癌基因可突變激活，其將通過(guò)編碼一系列功能蛋白質(zhì)作用于細(xì)胞，刺激細(xì)胞持續(xù)增殖，致使腫瘤惡性化的發(fā)生。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)染色的方法對(duì)TNBC及普通乳腺癌病理組織切片進(jìn)行分析對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)CD117的表達(dá)在TNBC組織中顯著上調(diào)，在普通乳腺癌組織中雖然也有表達(dá)，但其表達(dá)顯著下調(diào)（P<0.05），間接證實(shí)c-kit原癌基因在TNBC組織中顯著高表達(dá)，c-kit基因在TNBC的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮重要的調(diào)控作用，這與Zhu等[15]研究結(jié)果一致；本研究還發(fā)現(xiàn)，Nestin的表達(dá)在TNBC組織中顯著上調(diào)，而在普通乳腺癌組織中表達(dá)顯著下調(diào)（P<0.05）。因此，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)CD117及Nestin在組織切片中的表達(dá)可以鑒別診斷TNBC及普通乳腺癌。

綜上所述，本研究證實(shí)CD117、Nestin在TNBC組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，參與對(duì)TNBC發(fā)生、發(fā)展的生物調(diào)控。c-kit基因上某些位點(diǎn)可能成為抗癌藥物靶向治療的潛在靶點(diǎn)。針對(duì)c-kit基因的產(chǎn)物CD117以及針對(duì)Nestin的阻斷劑可能抑制TNBC的異常增殖，延緩癌細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展。但本研究的樣本量比較小，所得結(jié)論具有一定的局限性，因此對(duì)TNBC靶向治療的可行性還有待進(jìn)一步收集大樣本資料深入研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]朱信信,楊紅鷹.三陰性乳腺癌相關(guān)分子標(biāo)記物的表達(dá)及臨床特征分析[J].診斷病理學(xué)雜志, 2015, 22(1): 53-56.

[2]李春艷,王培,張晟,等.三陰性乳腺癌的臨床病理特征和預(yù)后分析[J].中華腫瘤雜志, 2013, 35(6): 463-467.

[3]呂剛,施開德,朱際飚,等. 79例三陰乳腺癌臨床特點(diǎn)回顧性分析[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2015, 12(6): 36-39.

[4]吳震宇.三陰性乳腺癌和HER-2過(guò)表達(dá)乳腺癌的臨床病理特征[J].健康研究, 2015, 35(1): 46-48.

[5]陳洪流.三陰性乳腺癌患者的臨床特征及預(yù)后因素[J].中國(guó)老年學(xué)雜志, 2013, 33(23): 5840-5841.

[6] Li CY, Zhang S, Zhang XB, et al. Clinic pathological and prognostic characheristics of triple-negative breast cancer (TNBC) in Chinese patients: a retrospective study [J]. Asian Pacific Journal of Cancer Prevent, 2013, 14(5): 3779-3784.

[7]余峰,張霄蓓,張晟,等.三陰性乳腺癌復(fù)發(fā)特征及危險(xiǎn)因素分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 94(28): 2180-2183.

[8]張淼,任力,胡蓉,等. ki67、EGFR在三陰性及非三陰性乳腺癌中的表達(dá)與相關(guān)性分析[J].武警醫(yī)學(xué), 2014, 25(12): 1256-1258.

[9]張春俠,王妍,章來(lái)長(zhǎng),等.趨化因子受體CCR4和CCR7在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2015, 24(6): 618-620.

[10] Usatyuk PV, Fu P, Mohan V, et al. Role of c-Met/phos-phatidylinositol 3-kinase (PI3k)/Akt signaling in hepato-cyte growth factor (HGF)-mediated lamellipodia forma tion, reactive oxygen species(ROS) generation, and motility of lung endothelial cells[J]. J Biol Chem, 2014, 289(19): 13476-13491.

[11] Shah YM, Van Den Brink GR. c-Kit as a Novel Potential Therapeutic Target in Colorectal Cancer [J]. Gastroenterology, 2015, 149(3): 534-537

[12] Zhao F, Chen Y, Wu Q, et al. Prognostic value of CD117 in cancer: a meta-analysis[J]. Int J Clin Exp Pathol, 2014, 7(3): 1012-1021.

[13] Neradil J, Veselska R. Nestin as a marker of cancer stem cells [J]. Cancer Sci, 2015, 106(7): 803-811.

[14] Gao N, Xu H, Liu C, et al. Nestin: predicting specific survival factors for breast cancer[J]. Tumour Biol, 2014, 35(3): 1751-1755.

[15] Zhu Y, Wang Y, Guan B, et al. C-kit and PDGFRA gene mutations in triple negative breast cancer[J]. Int J Clin Exp Pathol, 2014, 7(7): 4280-4285.

（張蕾編輯）

論著

Expression and clinical significance of CD117 and Nestin in triple negative breast carcinoma*

Wen Feng, Wei Song, Qing-kai Yu, Dong-mei Zhao
(Department of Pathology, The Affiliated Cancer Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou, Henan 450003, China)

Abstract:Objective To investigate the expression and clinical significance of CD117、an nestin in triple negative breast carcinoma. Methods Pathological sections of tumor tissues from breast cancer patients were collected in our hospital between 2010 and 2012. Total 50 cases negative for ER、PR、HER2 were randomly selected as experimental group. Other 50 general breast cancer cases were randomly selected as control group. The expression of CD117 and Nestin was detected by immunohistochemistry. Results The expression of CD117 and Nestin in the experimental group was higher than that in the control group(P < 0.05). Conclusions The expression of CD117 and Nestin is higher in the triple negative breast carcinomas, which is closely related to the occurrence of this disease.

Keywords:CD117; Nestin; immunohistochemistry; triple negative breast carcinoma

[通信作者]于慶凱，E-mail：yuqingkai@hotmail.com

收稿日期：2015-10-15

文章編號(hào)：1005-8982（2016）08-0048-03

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.08.010

中圖分類號(hào)：R737.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A