馮水土，陳毅德，陳玉強，高應(yīng)勤，范鑫

[1.福建省廈門市海滄醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，福建廈門361026；2.廈門大學(xué)附屬成功醫(yī)院（解放軍一七四醫(yī)院）腫瘤治療中心，福建廈門361004]

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Gadd45α、NF-κB在胃癌中表達(dá)情況及其相關(guān)性研究*

馮水土1，陳毅德1，陳玉強2，高應(yīng)勤1，范鑫1

[1.福建省廈門市海滄醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，福建廈門361026；2.廈門大學(xué)附屬成功醫(yī)院（解放軍一七四醫(yī)院）腫瘤治療中心，福建廈門361004]

摘要：目的通過分析Gadd45α、NF-κB在不同幽門螺桿菌（HP）感染狀態(tài)胃癌中的差異表達(dá)來探討兩者表達(dá)的相關(guān)性及其對胃癌發(fā)生的意義。方法隨機(jī)選取本院70例胃癌石蠟標(biāo)本及56例相應(yīng)癌旁正常組織標(biāo)本來檢測Gadd45α、NF-κB蛋白的表達(dá)情況；分析Gadd45α蛋白與NF-κB在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果NF-κB在HP+胃癌、HP-胃癌、HP+癌旁組織中的陽性表達(dá)率分別為82.5%、53.33%和26.32%，Gadd45α蛋白在HP+胃癌、HP-胃癌、HP+癌旁組織中的陽性表達(dá)率分別為77.5%、46.67%和34.21%，經(jīng)過χ2檢驗比較陽性表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Gadd45α與NF-κB在胃癌中表達(dá)呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌組織中高表達(dá)，且Gadd45α與NF-κB蛋白兩者在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞：胃癌；Gadd45α；NF-κB；幽門螺桿菌；表達(dá)

胃癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，原發(fā)性胃癌主要是由幽門螺桿菌（helicobacter pylori，HP）感染誘發(fā)的，而我國屬HP高感染國家；HP侵染宿主胃部后，能引起宿主細(xì)胞調(diào)控出現(xiàn)紊亂，激活多條信號通路，其中一條較為重要的是NF-κB信號通路，該通路的異常激活使細(xì)胞內(nèi)多種細(xì)胞因子的表達(dá)發(fā)生改變，從而影響細(xì)胞的生物學(xué)行為，最終導(dǎo)致胃癌的形成[1-3]。許多研究[3-5]提示，NF-κB、HP表達(dá)與胃癌TNM分期、病理組織分化程度及預(yù)后之間的關(guān)系密切；Gadd45α是DNA損傷修復(fù)的重要蛋白，可以被NF-κB介導(dǎo)的泛素化蛋白酶降解。NF-κB和Gadd45α是否與胃癌的形成以及HP感染狀態(tài)之間存在相互關(guān)系的研究罕有報道。本文選擇將Gadd45α蛋白和NF-κB蛋白、HP因素綜合起來進(jìn)行初步研究，報道如下。

1　材料與方法

1.1一般資料

選取2008～2012年既往研究[5]中廈門市海滄醫(yī)院胃癌根治手術(shù)切除的大體標(biāo)本術(shù)后保存在病理科的石蠟標(biāo)本70例，所有標(biāo)本都經(jīng)病理證實為胃癌。同時還選擇了56例相應(yīng)的癌旁組織石蠟標(biāo)本作對照。入組標(biāo)本的臨床資料情況見表1。本研究獲得單位倫理委員會的批準(zhǔn)及受試者簽署的知情同意。

表1　入組標(biāo)本的臨床資料比較

1.2方法

采用類似既往研究[6]使用的免疫組織化學(xué)Max Vision二步法檢測胃癌組織及癌旁組織中Gadd45α蛋白表達(dá)情況；Gadd45α蛋白表達(dá)以胞漿或胞核中出現(xiàn)棕色反應(yīng)為陽性，結(jié)果參照文獻(xiàn)[7]及既往研究[6]評分方法，選5個高倍視野計算陽性細(xì)胞數(shù)，以陽性細(xì)胞<5%記為0分；25%≥陽性數(shù)>5% 為1分；50%≥陽性數(shù)>25%為2分；陽性數(shù)>50% 為3分。著色強度計分，與陰性對照同等顏色為0分，弱著色（淡棕黃色）為1分，強著色（明顯棕黃色）為2分。陽性分級：以上2項相加，0～2分為（-）；3～5分為（+）；由兩位病理科主治醫(yī)生采用雙盲法觀察切片，判斷蛋白的表達(dá)結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所獲得的實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗或者Spearman秩相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1NF-κB、Gadd45α蛋白在不同HP感染狀態(tài)的胃癌及癌旁組織中的表達(dá)差異情況比較

在HP+胃癌、HP-胃癌、HP+癌旁組織、HP-癌旁組織中NF-κB蛋白的陽性表達(dá)率分別為82.50%、53.33%、26.32%和27.78%，Gadd45α蛋白的陽性表達(dá)率分別為77.50%、46.67%、34.21%和22.22%；經(jīng)過χ2檢驗，在HP+組與HP-組胃癌中NF-KB、Gadd45α蛋白陽性的表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.944、24.867，P<0.05），在HP+組胃癌與癌旁中NF-KB、Gadd45α蛋白陽性的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.099、14.852，P<0.05），在HP-胃癌及其癌旁組織中NF-KB、Gadd45α蛋白陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.99、2.87，P>0.05），見表2和圖1、2。

表2　NF-κB、Gadd45α蛋白在不同HP感染狀態(tài)的胃癌及癌旁組織中的陽性表達(dá)差異　例（%）

2.2NF-κB，Gadd45α蛋白在胃癌及癌旁組織的陽性表達(dá)

NF-κB蛋白在胃癌和癌旁組織中的陽性表達(dá)率分別為70.00%和26.79%（χ2=23.246，P <0.05）；Gadd45α蛋白的陽性表達(dá)率分別為64.29%和30.36%（χ2=12.611，P<0.05），經(jīng)過χ2檢驗，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌組織中高表達(dá)，在癌旁組織中低表達(dá)。見表3。

2.3胃癌組織NF-κB與Gadd45α蛋白表達(dá)的相關(guān)性

結(jié)合既往的研究[6]進(jìn)行分析，在胃癌組織中NF-κB與Gadd45α均為陽性的表達(dá)率為51.43% （36/70），均為陰性的表達(dá)率為17.14%（12/70），而NF-κB（+）/Gadd45α（-）表達(dá)率為18.57%（13/70），NF-κB（-）/Gadd45α（+）表達(dá)率為12.86%（9/70），經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，該組試驗中胃癌組織NF-κB與Gadd45α蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r s= 0.29，P<0.05），兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表4。

圖1　NF-κB在胃癌組織及癌旁正常組織中的陽性表達(dá)（×400）

圖2　Gadd45α在胃癌及癌旁組織中的陽性表達(dá)（×400）

表3　NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌及癌旁組織中的陽性表達(dá)情況

表4　NF-κB，Gadd45α蛋白在胃癌組織中表達(dá)情況的相關(guān)性檢驗　例

3　討論

研究表明[3-4]，NF-κB在HP+胃炎轉(zhuǎn)化為胃癌的過程中起到了重要作用。而Gadd45α基因是以P53基因為核心的調(diào)控體系中的重要一員[8-11]，是NF-κB下游的一個重要靶基因，Gadd45α的誘導(dǎo)表達(dá)受到多層次的調(diào)控[9，12-14]。正是這種多重的誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制決定Gadd45α具有多樣化的功能，它與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，其發(fā)揮功能的機(jī)制考慮可能與Gadd45α基因異常甲基化及表達(dá)有關(guān)[8-11，14-20]。

本文通過免疫組織化學(xué)法檢測隨機(jī)選取的70例胃癌石蠟標(biāo)本及56例相應(yīng)癌旁正常組織標(biāo)本中NF-κB、Gadd45α的表達(dá)情況，并與不同HP感染狀態(tài)的胃癌組織中的表達(dá)情況及其相互關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計分析。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率較高的情況（表達(dá)陽性率分別為70.00%和64.29%），在HP感染型胃癌中的陽性表達(dá)率更高（表達(dá)陽性率分別為82.50%和77.50%），統(tǒng)計學(xué)分析提示差異有統(tǒng)計學(xué)意義；同時結(jié)合既往的研究[5]進(jìn)一步分析，結(jié)果提示Gadd45α表達(dá)水平與NF-κB呈正相關(guān)。但Gadd45α與NF-κB的正相關(guān)系數(shù)rs僅為分別為0.29，提示了胃癌發(fā)生、發(fā)展過程極其復(fù)雜，除NF-κB外還有很多分子參與Gadd45α的調(diào)節(jié)、影響其表達(dá)水平。這有待在以后的試驗中進(jìn)行進(jìn)一步胃癌細(xì)胞學(xué)及基因?qū)W的進(jìn)一步研究，需要有更多的相關(guān)研究加入到胃癌的研究中。上述研究結(jié)果提示，胃癌的產(chǎn)生可能與其細(xì)胞內(nèi)NF-κB、Gadd45α的活化和過表達(dá)有關(guān)，對其表達(dá)水平的檢測有益于胃癌的早期診斷及其預(yù)后的早期預(yù)測，以兩者為靶點的治療可能是對胃癌（特別是HP+胃癌）另辟的一條治療途徑。

參考文獻(xiàn)：

[1] Gonzalez CA, Agudo A. Carcinogenesis, prevention and early detection of gastric cancer: where we are and where we should go[J]. International Journal of Cancer Journal International Du Cancer, 2012, 130(4): 745-753.

[2] Xu ZH, Zhang J, Yang D, et al. Progress of research between Helicobacter pylori infection and osteoporosis[J]. China Journal of Orthopaedics and Traumatology, 2011, 24(11): 966-968.

[3]紀(jì)雪松,趙春歌,潘彥珞,等. NF-κB及其對靶基因的調(diào)控在幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)生的關(guān)系初探[J].華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2008, 10(2): 144-146.

[4]蒲澤錦,吳靈飛. NF-κB與幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎及胃癌[J].國際消化病雜志, 2006, 26(1): 46-48.

[5]成春麗,師水生.幽門螺桿菌感染胃癌中CCL20核轉(zhuǎn)錄因子-κB表達(dá)的相互關(guān)系及臨床意義[J].中國藥物與臨床, 2010, 10(4): 411-413.

[6]馮水土,陳玉強,陳毅德,等. NF-κB在幽門螺桿菌陽性和陰性胃癌中的差異表達(dá)及臨床意義[J].中國腫瘤臨床, 2012, 39(21): 1626-1629.

[7] Shimizu M, Saitoh Y, Itoh H. Immunohistochemical staining of Ha-ras oncogene product in normal, benign, and malignant human pancreatic tissues[J]. Human Pathology, 1990, 21(6): 607-612.

[8]韓敏輝.NF-κB, Gadd45γ蛋白在肝癌中的差異表達(dá)及其意義[D].第四軍醫(yī)大學(xué), 2010.

[9]韓敏輝,馮英明. Gadd45α與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2010, 18(2): 418-421.

[10]郭煒,朱鐵年,董稚明,等. Gadd45G基因在食管鱗癌組織中的異常甲基化及表達(dá)[J].腫瘤, 2013, 33(1): 74-80.

[11] Sanchez R, Pantoja-Uceda D, Prieto J, et al. Solution structure of human growth arrest and DNA damage 45alpha (Gadd45alpha) and its interactions with proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Aurora A kinase [J]. The Journal of Biological Chemistry, 2010, 285(29): 22196-22201.

[12] Ngo SN, Williams DB, Head RJ. Rosemary and cancer prevention: preclinical perspectives [J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2011, 51(10): 946-954.

[13] Bertoni F, Coiffier B, Salles G, et al. MALT lymphomas: pathogenesis can drive treatment[J]. Oncology (Williston Park), 2011, 25(12): 1134-1142.

[14]馮雪鳳,王迎偉. DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因Gadd45的研究進(jìn)展[J].癌變.畸變.突變, 2009, 21(5): 404-407.

[15]郝一,宋倫. GADD45α參與維持基因組穩(wěn)定性并發(fā)揮腫瘤抑制效應(yīng)的多樣性分子機(jī)制[J].生物技術(shù)通訊, 2011, 22(2): 264-267. [16] Gao C, Zhang Z, Liu W, et al. Reduced microRNA-218 expression is associated with high nuclear factor kappa B activation in gastric cancer[J]. Cancer, 2010, 116(1): 41-49.

[17]冀秀英,王艷梅,白洋,等. Gadd45a在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡及增殖的關(guān)系[J].中國老年雜志, 2013, 33(7): 1593-1594.

[18]游慶朋,郭煒,張明慧,等.賁門腺癌中GADD45G基因的異常甲基化及表達(dá)[J].天津醫(yī)藥, 2013, 41(10): 949-952.

[19]李小靜,李柳君,李志鋒,等. 5-氮-2’-脫氧胞苷對A431細(xì)胞Gadd45α表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響[J].中華實用診斷與治療雜志, 2013, 27(2): 150-152.

[20]王赟,季洪亮. Gadd45在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J].中國實驗診斷學(xué), 2013, 17(6): 1155-1158.

（張蕾編輯）

論著

Differential expression and correlation of Gadd45α and NF-κB in human gastric cancer*

Shui-tu Feng1, Yi-de Chen1, Yu-qiang Chen2, Ying-qin Gao1, Xin Fan1
[1.Department of Medical Oncology, Xiamen Haicang Hospital, Xiamen, Fujian 361026, China;
2. Clinical Center of Tumor Therapy, Chenggong Hospital (the 174th Hospital of PLA), Xiamen University, Xiamen, Fujian 361004, China]

Abstract:Objective To explore the differential expression level of Gadd45α and NF-κB in human gastric cancer with Helicobacter Pylori (HP) infection status, and to explore a way to clinical diagnosis and treatment for gastric cancer. Methods A total of 70 paraffin-emeded samples of gastric cancer and 56 normal tissues from surgical resected tissues were selected randomly. We analyzed the correlation between the expression of Gadd45α protein and NF-κB in gastric carcinoma. Results The positive rates of expression of NF-κB protein in HP+ gastric carcinoma tissues, HP-gastric carcinoma tissues and HP+ adjacent non-neoplastic tissues were 82.5%, 53.33% and 26.32% respectively. The positive rates of expression of Gadd45α protein in HP+ gastric carcinoma tissues, HP-gastric carcinoma tissues and HP+ adjacent non-neoplastic tissues were 77.5%, 46.67% and 34.21% respectively. The difference of the expression levels was significant (P < 0.05 ). The expression of Gadd45α protein in gastric carcinoma samples was positively correlated with NF-κB (P < 0.05 ). Conclusions The levels of Gadd45α and NF-κB protein expression are up-regulated in HP+ gastric carcinoma sample. The expression of Gadd45α and NF-κB in gastric carcinoma is positively correlated.

Keywords:gastric cancer; Gadd45α; NF-κB; Helicobacter Pylori; expression

[通信作者]陳玉強，Tel：13358389899，E-mail：chenyq707@163.com

*基金項目：廈門市海滄區(qū)科技計劃項目（No：350205z20144010-05）；南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新課題（No：10MA068）；福建省自然科學(xué)基金資助項目（No：2010D013）；廈門市科技計劃創(chuàng)新項目（No：3502z20104014）

收稿日期：2015-09-14

文章編號：1005-8982（2016）08-0033-05

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.08.007

中圖分類號：R735.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A