劉　瑞,周　亮,李國紅

(云南大學(xué) 云南省生物資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650091)

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帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662的化學(xué)成分研究

劉瑞,周亮,李國紅

(云南大學(xué) 云南省生物資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650091)

摘要：通過對帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladium sp. YMF1.03662發(fā)酵液的乙酸乙酯提取物及菌絲體的甲醇提取物進(jìn)行化學(xué)成分研究，分離得到2個(gè)化合物，經(jīng)波譜分析，鑒定為citrantifidiol和1-monoacylglycerol。

關(guān)鍵詞：帚梗柱孢霉屬；發(fā)酵液；菌絲體；化學(xué)成分

帚梗柱孢霉屬(Cyllndrocladium)是半知菌類、叢梗孢目、叢梗孢科、雙孢亞科真菌[1]。目前，該屬報(bào)道了22個(gè)種和1個(gè)變種。據(jù)報(bào)道[2-3]，帚梗柱孢霉屬真菌能侵染觀賞植物雞冠花，使其患上嚴(yán)重的褐腐病；對鶴望蘭的葉片也有侵染性，使其患上葉斑病。目前還未見關(guān)于其次生代謝產(chǎn)物的研究報(bào)道。為了對帚梗柱孢霉屬真菌的化學(xué)成分進(jìn)行比較全面的了解，作者在此對該屬真菌Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，分離得到2個(gè)化合物，并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定。

1實(shí)驗(yàn)

1.1菌株與培養(yǎng)基

菌株Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662，保存于西南野生種質(zhì)資源庫微生物庫。

馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯 200g，葡萄糖 20g，瓊脂 15g，蒸餾水1 000mL，pH值自然。

馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基(PDB)：PDA培養(yǎng)基中不添加瓊脂。

1.2材料、試劑與儀器

SephadexLH-20凝膠，Pharmacia公司；硅膠(200～300目)、薄層層析用硅膠G板，青島海洋化工廠。

所用有機(jī)溶劑均為重蒸工業(yè)純試劑。

DRX-500型核磁共振儀，Bruker公司；LCQ-Advantage型質(zhì)譜儀，F(xiàn)innigan公司。

1.3菌株的擴(kuò)大發(fā)酵培養(yǎng)

挑取Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662菌株的菌絲塊于PDA培養(yǎng)基上，于28 ℃恒溫培養(yǎng)10d；將培養(yǎng)在平板上的菌絲和培養(yǎng)基一起接種于裝有100mLPDB培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，于28 ℃、180r·min-1恒溫培養(yǎng)10d；再按5%的接種量接種于PDB培養(yǎng)基上，共發(fā)酵20L，于28 ℃、180r·min-1搖床培養(yǎng)10d。

1.4菌株代謝產(chǎn)物的初步分離

將上述培養(yǎng)物用8層紗布過濾，分開菌絲體和發(fā)酵液。

發(fā)酵液濃縮至1L，用乙酸乙酯反復(fù)萃取，濃縮得乙酸乙酯提取物0.376g。經(jīng)甲醇凝膠粗分，得到A1～A7共7個(gè)組分；組分A2(112mg)經(jīng)拌樣，用正相硅膠柱純化，石油醚裝柱，石油醚-丙酮(20∶1～2∶1)梯度洗脫，得到5個(gè)組分(A2-1～A2-5)；組分A2-3(23mg)用丙酮凝膠純化，得到化合物Ⅰ(6mg)。

菌絲體用甲醇浸泡多次，得甲醇提取物8.891g。經(jīng)甲醇凝膠粗分，得到B1～B6共6個(gè)組分；組分B2(214mg)用丙酮凝膠純化，得到3個(gè)組分(B2-1～B2-3)；B2-2(153mg)用丙酮凝膠純化，得到3個(gè)組分(B2-2-1～B2-2-3)；組分B2-2-2(67mg)用正相硅膠柱純化，石油醚-丙酮(20∶1)洗脫，得到3個(gè)組分(B2-2-2-1～B2-2-2-3)；組分B2-2-2-2(29mg)繼續(xù)用正相硅膠柱純化，石油醚-丙酮(40∶1)洗脫，得到化合物Ⅱ(4mg)。

2結(jié)果與討論

化合物Ⅰ為無色油狀。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ：5.16(1H,brs),2.10(2H,m),1.88(2H,m),1.71(3H,s),1.65(3H,s),1.28(3H,s),1.24(3H,s),1.07(3H,d,J=6.8 Hz)；13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ：132.2(s),124.9(d),81.7(s),75.3(s),54.7(d),44.6(t),40.8(t),26.5(q),26.1(q),25.5(q),24.7(t),23.1(t),18.1(q),15.9(q)；ESI-MS：481[2M+1]+。與文獻(xiàn)報(bào)道[4]相比較，確定化合物Ⅰ為citrantifidiol(圖1)。

圖1　從帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladium sp.

化合物Ⅱ?yàn)闊o色固體。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ：5.36(2H,m),4.22(2H,m),3.94(1H,m),3.71(1H,m),3.62(1H,m),2.36(2H,m),2.03(2H,m),1.64(2H,m),1.27～1.31(22H,m),0.90(3H,d,J=6.8 Hz)；13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ：174.5(s),130.5(d),130.1(d),70.7(d),65.6(t),63.8(t),34.6(t),32.3(t),30.2～29.5(t),27.6(t),25.2(t),23.0(t),14.5(q)；ESI-MS：379[M+Na]+。與文獻(xiàn)報(bào)道[5]相比較，確定化合物Ⅱ?yàn)?-monoacylglycerol[5](圖2)。

圖2　從帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladium sp.

3結(jié)論

從菌株帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladiumsp. YMF1.03662中分離得到2個(gè)化合物，分別鑒定為citrantifidiol和1-monoacylglycerol。

參考文獻(xiàn)：

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Chemical Constituents ofCyllndrocladiumsp. YMF1.03662

LIU Rui,ZHOU Liang,LI Guo-hong

(KeyLaboratoryforConservationandUtilizationofBio-Resource,YunnanUniversity,Kunming650091,China)

Abstract：The chemical constituents of Cyllndrocladium sp. YMF1.03662 were studied.Two compounds were separated from ethyl acetate extract of fermentation broth and methanol extract of mycelia,which were identified as citrantifidiolere and 1-monoacylglycerol by spectral analysis.

Keywords：Cyllndrocladium sp.;fermentation broth;mycelia;chemical constituent

中圖分類號：O 621.2R 284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1672-5425(2016)04-0026-02

doi：10.3969/j.issn.1672-5425.2016.04.007

作者簡介：劉瑞(1991-)，女，河南周口人，碩士研究生，研究方向：微生物次生代謝產(chǎn)物，E-mail:373664517@qq.com；通訊作者：李國紅，副研究員，E-mail:ligh@ynu.edu.cn。

收稿日期：2016-01-06

基金項(xiàng)目：國家973計(jì)劃資助項(xiàng)目(2013CB127505)，云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(2013FB003)