何學(xué)紅　游箭　蒲洪波　陳竹　李蓉芬

(川北醫(yī)學(xué)院第二臨床醫(yī)學(xué)院·南充市中心醫(yī)院 影像科/介入放射科， 四川 南充 637000)

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·論著·

攜帶諾帝的聚乙烯醇顆粒治療兔VX-2肝移植腫瘤的療效研究*

何學(xué)紅游箭蒲洪波陳竹李蓉芬

(川北醫(yī)學(xué)院第二臨床醫(yī)學(xué)院·南充市中心醫(yī)院 影像科/介入放射科， 四川 南充 637000)

【摘要】目的探討經(jīng)導(dǎo)管肝動脈注射攜帶諾帝的PVA顆粒治療兔VX2肝移植腫瘤的短期療效。方法采用開腹直接種植法制備兔VX2肝移植腫瘤模型；隨機(jī)選出30只VX2瘤兔進(jìn)行介入治療，分為對照組(注射生理鹽水5ml)、TACE組(注射碘化油乳劑0.2ml/kg+順鉑1mg/kg)、實驗組(注射攜帶諾帝的PVA顆粒1mg/kg)三組，每組10只；術(shù)前1d及術(shù)后1、3、7d觀察血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)及肌酐(Cr)水平的變化，術(shù)前及術(shù)后7、14d分別行CT掃描，測量腫瘤大小計算腫瘤體積增長率、統(tǒng)計轉(zhuǎn)移部位；術(shù)后7d采用ELISA方法檢測血清VEGF蛋白含量。 結(jié)果 TACE組、實驗組術(shù)后1、3d血清ALT、AST顯著升高，兩組無明顯差異，但與對照組相比有顯著性差異(P<0.01)，兩組術(shù)后1、3d血清Cr沒有顯著性差異；ALT、AST、Cr術(shù)后 7d基本降至術(shù)前水平；TACE組、實驗組術(shù)后14d腫瘤體積增長率均小于對照組，差異顯著(P=0.000)，同時實驗組腫瘤體積增長率低于TACE組，也有顯著性差異，轉(zhuǎn)移部位少于TACE組；術(shù)后7d血清 VEGF蛋白含量以TACE組最高，與對照組、實驗組相比，具有顯著性差異；實驗組高于對照組，也有顯著性差異。結(jié)論攜帶諾帝的PVA顆粒短期內(nèi)具有一定的抑制腫瘤生長效果，可為臨床治療腫瘤提供一種新的思路。

【關(guān)鍵詞】諾帝；VX2腫瘤；介入治療；血管內(nèi)皮生長因子；腫瘤體積增長率

諾帝(Nordy，相對分子量為308)是天然脂氧化酶抑制劑去甲二氫愈創(chuàng)木酸(Nordihydroguaiaretic Acid，NDGA)經(jīng)人工改良合成的化合物，具有明顯抑制各種腫瘤細(xì)胞生長、促進(jìn)凋亡、誘導(dǎo)分化和抑制腫瘤血管生成等作用[1，2]。聚乙烯醇(Polyvinyl alcohol，PVA)顆粒是由聚乙烯醇泡沫與甲醛合制而成[3]，為非水溶性，遇水溶性液體即可膨脹，體積將增加20%，在體內(nèi)不被吸收，是一種永久性栓塞劑。鑒于張琳[4]報告TACE聯(lián)合諾帝初步應(yīng)用獲得抑制腫瘤生長、減低轉(zhuǎn)移而具有抗腫瘤生長、抑制腫瘤血管生成的作用，故我們考慮能否將具有抑制腫瘤生長、新生血管生成的諾帝與長效栓塞劑PVA顆粒相結(jié)合作為一種新型抗腫瘤藥物，擬解決化療藥物所引起的肝衰竭及栓塞劑致缺血、缺氧及新生血管生成導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的問題，目前尚無相關(guān)文獻(xiàn)報道。本實驗擬使用經(jīng)導(dǎo)管肝動脈注射攜帶諾帝的PVA顆粒治療兔VX2肝移植腫瘤，觀察不同時間生化指標(biāo)、腫瘤生長率及血管內(nèi)皮生長因子來判斷其總體療效。

1材料與方法

1.1健康新西蘭大白兔40只，體重2.5～3.0kg，雌雄不限，由重慶市渝達(dá)實驗兔場提供。兔VX2荷瘤模型由第二軍醫(yī)大學(xué)動物研究所惠贈(種植成功的兔VX2荷瘤模型)。選出30只腫瘤直徑為1～2cm的瘤兔作為實驗對象，篩選標(biāo)準(zhǔn)為：病灶必須位于肝實質(zhì)內(nèi)，最大直徑不能超過2.5cm。按照文獻(xiàn)[5]報道制備1～2mm3大小的瘤塊，于劍突下1/3略偏左作1.0～1.5cm縱行切口，采用“夾心餅干”植入法種植；所有實驗兔均采用以上方法接種并進(jìn)行編號、記錄接種情況。

1.2方法將30只VX-2瘤兔分為對照組10只，注射生理鹽水5ml；TACE組10只，注射碘油乳劑0.2ml/kg+順鉑1.0mg/kg；實驗組10只，注射攜帶諾帝的PVA顆粒1.0mg/kg三組。栓塞劑劑量的選擇，碘化油0.2ml/kg、順鉑1mg/kg、PVA顆粒1mg/kg(參照張波等[6]文獻(xiàn)報道，1mg/kg為安全劑量)、攜帶諾帝的PVA顆粒1mg/kg(相當(dāng)于諾帝0.51mg/kg)并參照張琳[4]的實驗研究。將選中的30只VX2荷瘤兔依次麻醉，固定于自制實驗臺行上腹部CT灌注掃描，測量各組瘤兔腫瘤最大直徑和最小直徑，計算腫瘤體積(V=1/2axb2)；治療前1d及治療后1、3、7d檢測血清ALT、AST及CR，了解肝腎功能的變化情況；術(shù)后7d每組瘤兔抽取血樣2ml，采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測各組瘤兔的VEGF蛋白含量；術(shù)前及術(shù)后7、14d分別行CT掃描，測量腫瘤大小計算腫瘤體積增長率。術(shù)后14d處死三組實驗瘤兔，取肺、肝及腫瘤組織，常規(guī)福爾馬林固定備用。

2結(jié)果

2.1肝腎功能的變化術(shù)前1d，三組兩兩組間ALT、AST、Cr相比，沒有顯著性差異；術(shù)后1d ALT、AST升高達(dá)峰值，3d后開始下降，TACE組、實驗組治療后1、3d與治療前1d相比，具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，Cr治療前后沒有明顯變化；術(shù)后7d ALT、AST及Cr基本下降至治療前水平(見表1-3)。

2.2介入治療前后腫瘤體積的變化、腫瘤體積增長率及腫瘤轉(zhuǎn)移

2.2.1測量腫瘤的最大徑與最小徑，計算腫瘤的體積(V)=1/2ab2(其中a為最大徑、b為最小徑)；腫瘤體積增長率=(術(shù)后14d的體積-術(shù)前的體積)/治療前的體積×100%。三組瘤兔術(shù)前、術(shù)后14d瘤體的變化及其腫瘤體積增長率，對照組(1.42±0.24)cm3、(8.32±0.68)cm3，(527.02±138.84)%；TACE組(1.40±0.37)cm3、(3.88±0.69)cm3，(116.73±30.35)%；實驗組(1.44±0.17)cm3、(2.99±0.58)cm3，(116.73±30.35)%。TACE組和實驗組治療后7d、14d腫瘤體積明顯低于對照組，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.01)，見表4。

表1　各組術(shù)前1d及術(shù)后1、3、7d ALT的變化

注：TACE組、實驗組治療后1d、3d與術(shù)前1d比較P=0.000

表2　各組術(shù)前1d及術(shù)后1、3、7d AST的變化

注：TACE組、實驗組治療后1d、3d與術(shù)前1d比較P<0.01

表3　各組術(shù)前1d及術(shù)后1、3、7d Cr的變化

注：三組治療后1d、3d與術(shù)前1d比較P>0.05

Table 4The changes of tumor volume at 1 day before and 7, 14 day after treatment

n術(shù)前1d術(shù)后7d術(shù)后14d對照組101.42±0.244.89±0.778.32±0.68TACE組101.40±0.372.98±0.693.88±0.69實驗組101.44±0.172.58±0.712.99±0.58F0.03729.0187.98P0.9640.0000.000

2.2.2腫瘤轉(zhuǎn)移情況的觀察轉(zhuǎn)移部位為肝、肺、淋巴結(jié)、腎，其中對照組轉(zhuǎn)移涉及4個部位，腫瘤轉(zhuǎn)移部位數(shù)為40個中有31個，占77.5%，TACE組腫瘤轉(zhuǎn)移涉及4個部位，轉(zhuǎn)移部位數(shù)40個中有20個，占50%，實驗組腫瘤轉(zhuǎn)移涉及3個部位，轉(zhuǎn)移部位數(shù)30個中有10個，占33.3% ，見表5。

2.3血清VEGF蛋白水平的變化介入治療后7d測量三組實驗兔血清VEGF分別為：對照組為(1.11±0.08)ng/ml、TACE組為(1.42±0.10)ng/ml、實驗組為(1.24±0.08)ng/ml。三組兩兩相比較：TACE組與對照組相比較(T=7.3933，P<0.001)、實驗組與對照組相比較(T=3.9770，P<0.001)、實驗組與TACE組相比(T=4.1986，P<0.001)，均具有統(tǒng)計學(xué)顯著差異，見圖1。

圖1各組術(shù)后7d VEGF的蛋白含量變化

Figure 1The changes of VEGF protein level at 7 day after treatment in each group

表5　各組腫瘤轉(zhuǎn)移情況比較[n(×10-2)]

3討論

Zhang[7]等研究顯示，VEGF在HCC細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要的作用，表明VEGF是HCC患者非常重要的預(yù)后因子；然而，TACE導(dǎo)致腫瘤組織壞死缺氧促使VEGF 生成增加 和促進(jìn)腫瘤血管新生是引起腫瘤復(fù)發(fā)的原因，故使 TACE療效受到影響，有學(xué)者報道TACE聯(lián)合諾帝[4]、TACE聯(lián)合恩度[8]、TACE聯(lián)合索拉菲尼[9-11]等抗血管生成藥物來提高肝癌介入治療的療效和預(yù)后，本文采用攜帶諾帝的PVA顆粒治療兔VX2肝移植腫瘤以期分析其安全性、機(jī)制和療效。

3.1攜帶諾帝的PVA顆粒的安全性張波等[6]采用粒徑為130～300μm、不同劑量的PVA顆粒栓塞肝動脈，研究結(jié)果顯示實驗兔出現(xiàn)肝功能出現(xiàn)一過性損害且與劑量呈正比關(guān)系，表明PVA顆粒栓塞肝動脈安全有效。此外，據(jù)文獻(xiàn)報道[12]PVA顆粒栓塞急性復(fù)雜性大咯血，認(rèn)為PVA顆粒是安全、有效。劉丹寧等[13]分別采用0.025%、0.1%的諾帝滴眼液治療Long-Evans大鼠角膜堿燒傷后新生血管的研究顯示，諾帝滴眼液局部滴眼是安全的。本研究中的實驗組治療后1、3、7d肝功能出現(xiàn)一過性損害，與上述文獻(xiàn)報道相似，表明攜帶諾帝的PVA顆粒通過肝動脈治療兔VX2肝移植腫瘤是安全的。

3.2攜帶諾帝的PVA顆粒的抗腫瘤生長作用國外學(xué)者就NDGA具有抑制多種腫瘤細(xì)胞、誘導(dǎo)其凋亡的作用進(jìn)行了相關(guān)報道[1,2]。王斌等[14]研究顯示諾帝具有抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞自我更新、誘導(dǎo)分化等作用 ，從而達(dá)到控制腫瘤細(xì)胞生長的目的。本實驗通過CT觀察瘤體大小的變化及對病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察來評估攜帶諾帝栓塞藥物的抑瘤作用，實驗組治療14d后腫瘤體積增長程度最低，瘤兔處死后大體標(biāo)本顯示腫瘤壞死成分多，鏡下瘤細(xì)胞大片壞死，周圍較多纖維結(jié)構(gòu)，表明攜帶諾帝的PVA顆粒同樣具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡的作用，與上述文獻(xiàn)的觀點相同。

3.3攜帶諾帝的PVA顆粒的抗血管生成作用Wang B等[15]研究證實NDGA抑制花生四烯酸(arachidonic acid)代謝過程中脂氧化酶( lypoxygenase, LOX)的活性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，以此途徑實現(xiàn)抗腫瘤血管的生成；較早的研究顯示[16]將諾帝作用于人惡性膠質(zhì)瘤裸鼠原位移植瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生凋亡、甲?；氖荏w(FPR)、VEGF表達(dá)降低，血管生成明顯減少；Yoysungnoen[17]實驗結(jié)果同樣顯示諾帝對其VEGF和/或血管生成的抑制作用顯著。本研究實驗組瘤兔治療后7d血清VEGF蛋白含量、腫瘤轉(zhuǎn)移例次和部位明顯低于TACE組，表明攜帶諾帝的PVA顆粒在一定程度上抑制了新生血管的生成、減少并延緩了腫瘤的轉(zhuǎn)移，與以上文獻(xiàn)觀點一致。另外本文實驗組腫瘤轉(zhuǎn)移例次和部位明顯低于TACE組，優(yōu)于張琳[4]報告TACE聯(lián)合諾帝初步應(yīng)用中抑制腫瘤轉(zhuǎn)移不明顯的結(jié)果，說明攜帶諾帝的PVA顆粒釋放諾帝的作用更持久，與王志軍[18]在研究攜帶索拉菲尼的載藥微球時發(fā)現(xiàn)小顆粒的載藥微球攜帶藥物性能更好的觀點一致。

4結(jié)論

攜帶諾帝的PVA顆粒具有一定的抑制兔VX2肝移植腫瘤瘤灶的生長和新生血管生成的作用。但本組實驗僅是初步探索，尚需大量的基礎(chǔ)研究及臨床實踐來證實。

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Intra-tumoral injection with polyvinyl alcohol particles containing nordy for treatment of transplanted vx-2 tumor in rabbits

HE Xuehong,YOU Jian,PU Hongbo,et al

(DepartmentofMedicalImaging,DepartmentofInterventionalRadiology,NanchongCentralHospital,TheSecondClinicalCollegeofNorthSichuanMedicalCollege,Nanchong637000,Sichuan,China)

【Abstract】ObjectiveTo explore the short-term effect of PVA particles loding nordy perfusion via hepatic artery for rabbit VX2 liver tumor. MethodsThe methods of cutting the belly open was used to make the transplanted model of VX2 carcinoma in rabbit. 30 rabbits VX2 with liver tumor model were divided into control group (injected with 5 ml NS), TACE group (injected with 0.2ml/kg lipiodol and 1 mg/kg cisplatin), experimental group (injected with 1 mg/kg PVA particles which combined with nordy ). The changes of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and creatinine (Cr) at 1 day before and 1, 3, 7 day after treatment, the blood supply, necrosis and metastasis of tumor tissue were observed by CT before and 7, 14 day after treatment, the max and minimum diameter of tumor and the tumor volume growth rate, tumor metastasis and the VEGF at 7 day after treatment were observed. ResultsThe AST and ALT at 1 day and 3 day after treatment in the TACE group and the experimental group were significant higher than that of the control group (P<0.01). But Cr was no significant change at 1th day and 3th day after treatment. The three indexes decreased to the level pre-treatment at 7 day after treatment. The tumor volume growth rate in the two groups were less than that of control group at 14 day after treatment (P=0.000). The tumor volume growth rate and tumor metastasis of experimental group were less than that of TACE group, and the difference was significant. The VEGF was the highest in TACE group, and there existed significant difference compared with the other two groups. This index in experimental group was higher than control group. ConclusionThe treatment for rabbit VX-2 liver tumor with PVA microspheres loding nordy has short-term effect of inhibitory action on tumor growth and provides a new method for the treatment of tumor.

【Key words】Nordy; VX-2 neoplasm; Interventional therapy; Vascular endothelial growth factor; Gross tumor volume growth rate

(收稿日期：2015-12-01； 編輯： 陳舟貴)

【中圖分類號】R 735.7

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

doi：10.3969/j.issn.1672-3511.2016.04.005

通訊作者：游箭，教授，本刊編委，E-mail：cqjr1997@163.com

基金項目：四川省教育廳重點項目(11ZA188)、南充市科技支撐項目(11A0118)