王鴻垚，譚小平

(長(zhǎng)江大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 荊州 434000)

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胃癌組織中CTHRC1的表達(dá)與淋巴道轉(zhuǎn)移

王鴻垚，譚小平

(長(zhǎng)江大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 荊州 434000)

[摘要]目的: 觀察三螺旋重復(fù)膠原蛋白1(CTHRC1)在胃癌組織中的表達(dá)及其與淋巴道轉(zhuǎn)移關(guān)系，為臨床判斷胃癌的侵襲性、轉(zhuǎn)移潛能及估計(jì)預(yù)后提供及時(shí)合理的參考指標(biāo)。方法：應(yīng)用免疫組化的方法，分別檢測(cè)胃癌伴淋巴轉(zhuǎn)移、胃癌無淋巴轉(zhuǎn)移的組織中CTHRC1的表達(dá)水平。結(jié)果：胃癌組織中CTHRC1蛋白在有淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)。結(jié)論：CTHRC1在胃癌淋巴轉(zhuǎn)移中的高表達(dá)，提示CTHRC1可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展和淋巴轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了一定的作用。

[關(guān)鍵詞]三螺旋重復(fù)膠原蛋白1(CTHRC1)；胃癌； 免疫組化；淋巴道轉(zhuǎn)移

胃癌由于其腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)雜性、多步驟性、多階段性的特點(diǎn)，使之成為死亡率較高的病癥。并且呈現(xiàn)出逐年增加，患者年齡逐步年輕化的趨勢(shì)。近年來，隨著外科技術(shù)和影像技術(shù)的發(fā)展，聯(lián)合放療、化療和免疫治療的進(jìn)步，胃癌的治療取得了很大的進(jìn)展，患者存活率有所提高，但是目前的治療手段還不能從根本上解決胃癌的化療耐藥和轉(zhuǎn)移問題，因此早期診斷胃癌是目前研究重點(diǎn)。三螺旋重復(fù)膠原蛋白1(collagen triple helic repeat containing 1，CTHRC1)是一種分泌性糖蛋白，在胰腺癌、食管癌、乳腺癌等多種實(shí)體腫瘤中過度表達(dá)[1,2]。本研究主要探討CTHRC1在胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)及其臨床意義。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象

選取2013年10月至2015年12月在長(zhǎng)江大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院確診為胃癌的組織蠟塊80例，其中合并淋巴道轉(zhuǎn)移的胃癌組織蠟塊標(biāo)本58例，無淋巴道轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移發(fā)生的胃癌組織蠟塊標(biāo)本22例。免疫組化方法檢測(cè)CTHRC1在胃癌組織中的表達(dá)。

1.2主要試劑

多聚賴氨酸、二甲苯、無水乙醇、蘇木素染色液、伊紅染色液、鹽酸乙醇溶液、碳酸鋰溶液、中性樹膠、0.01M檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)、0.01M Tris鹽酸緩沖液(pH10.0)、磷酸鹽緩沖液PBS、H2O2(均為國(guó)產(chǎn)試劑)。免疫組化檢測(cè)所用試劑：①兔抗人CTHRC1多克隆抗體濃縮液；②免超敏二步法進(jìn)行免疫組化檢測(cè)試劑盒；③DAB試劑盒；④PV-9000染色試劑盒。

1.3方法

免疫組化實(shí)驗(yàn)采用SP法，石蠟切片脫蠟和烘烤后，用高溫高壓抗原修復(fù)，用 PBS(pH7.4～7.6)進(jìn)行洗滌，沖洗3次，每次5min。 每張切片放入3%雙氧水中20min， PBS沖洗3次，每次3min。去PBS液，將兔抗人CTHRC1多克隆抗體濃縮液進(jìn)行稀釋(1∶50)，每張切片加1滴，室溫下維持2h，再次用PBS 沖洗3次，每次3min。去除PBS液，每張切片滴加辣根酶標(biāo)記抗兔二抗，37℃保持30min。PBS沖洗3次，每次3min。去除 PBS液，每張切片加新鮮配制的 DAB溶液50ul，靜置幾分鐘，等待顯色后，用蒸餾水沖洗。用蘇木素復(fù)染，PBS 或自來水沖洗返藍(lán)，經(jīng)過1%鹽酸酒精脫水干燥，樹膠封片，切片進(jìn)行鏡檢。

2結(jié)果

CTHRC1蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)明顯要高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。研究還發(fā)現(xiàn)CTHRC1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與胃癌浸潤(rùn)深度的關(guān)系呈正相關(guān)，其表達(dá)明顯較未侵及漿膜組胃癌的表達(dá)要高，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。CTHRC1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表1。

表1　CTHRC1蛋白的表達(dá)與胃癌患者臨床特征的關(guān)系

3討論

CTHRC1基因在染色體中的位置為8q22.3段，主要分布于細(xì)胞間隙[1]，包含4個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子，共計(jì)為11435個(gè)堿基。CTHRC1可形成膠原蛋白的和重建血管內(nèi)皮等作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)CTHRC1在多種實(shí)體腫瘤中過度表達(dá)，并與腫瘤的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有學(xué)者[1]在檢測(cè)40例胰腺患者癌組織與癌旁組織中CTHRC1的表達(dá)中發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織CTHRC1 mRNA表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P<0.05)。劉偉等[2]學(xué)者針對(duì)46例成人的食管中患有鱗癌的組織進(jìn)行分析，與之形成對(duì)比的是10例成人的正常食管組織。通過對(duì)這些組織細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)在癌癥患者的食道鱗細(xì)胞膜及細(xì)胞體中均有CTHRC1過度表達(dá)。有學(xué)者[3]通過免疫組化分析研究胃癌組織與正常胃組織中CTHRC1的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中CTHRC1呈過度表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究與之一致，胃癌組織中CTHRC1呈高表達(dá)，說明CTHRC1可作為胃癌的診斷標(biāo)志物之一。

在對(duì)乳腺癌的研究中，研究者發(fā)現(xiàn)CTHRC1主要存在于乳腺癌細(xì)胞的胞質(zhì)當(dāng)中。CTHRC1在乳腺癌的癌組織中的表達(dá)量明顯高于正常組織，并且在浸潤(rùn)性乳腺小葉癌的表達(dá)量高于浸潤(rùn)型乳腺導(dǎo)管癌[4]。值得指出的是，在乳腺癌中，CTHRC1的高表達(dá)同乳腺癌骨轉(zhuǎn)移相關(guān)。在對(duì)結(jié)直腸癌的研究中，學(xué)者發(fā)現(xiàn)有腹膜轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組CTHRC1表達(dá)顯著高于不伴有腹膜轉(zhuǎn)移組，認(rèn)為CTHRC1的高表達(dá)與結(jié)直腸癌腹膜轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。并且與患者預(yù)后較差密切相關(guān)。還有學(xué)者[6]發(fā)現(xiàn)CTHRC1在食管鱗癌組織中存在過度表達(dá)，但在癌旁鱗狀上皮組織中基本不表達(dá)。CTHRC1表達(dá)與食管鱗癌TNM分期、浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，因此，認(rèn)為CTHRC1在惡性腫瘤包括食管癌中具有促腫瘤增殖的功能。本研究顯示在58例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)較高，與其相對(duì)應(yīng)的22例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中也均有一定程度的表達(dá)，但與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。本觀察結(jié)果表明在胃癌組織中CTHRC1存在過度表達(dá)的現(xiàn)象，通過淋巴道來促進(jìn)胃癌的遷移的分子學(xué)機(jī)制可能與CTHRC1過度表達(dá)相關(guān)。

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[2] 劉偉, 施瑞華, 朱宏,等.ITGA6、CTHRC1在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2009，29(4):508～511.

[3] Lina G, Lei L, Li l Z, et al.Cthrc1 overexpression is an independent prognostic marker in gastric cancer[J].Human Pathology,2014, 45(5):1031～1038.

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[6] 王輝, 許青.CTHRC1在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志, 2015，20(6):531～534.

[編輯]一凡

26 An Observation of Curative Effects of 14 Cases of Calcaneal Fracture Involving Talocalcaneal Joints

Long Qing

(HealthCenterofGuanyinTown，Jingzhou434000,China)

Abstract：Objective：To assess the curative effects of operative treatment for calcaneal fractures involving talocalcaneal joints Methods：Open reduction and internal fixation with restoration reconstruction plates from the outside of calcaneus had been adopted for 14 cases with calcaneal fractures of 16 feet involving talocalcaneal joints. The mean time of follow-up was 14 months. The curative effects had been assessed according to the sense, the shape of foot heels, and the activity of ankle joints and the X-ray manifestation of follow-up.Results：The excellent rate was 87.5%. Conclusion：Open reduction and internal fixation can achieve better curative effects on calcaneal fractures involving talocalcaneal joints.

Key words：calcaneal fractures; talocalcaneal joints ; internal fixation; reconstruction plate

[中圖分類號(hào)]R735.2

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]1673-1409(2016)12-0016-02

[作者簡(jiǎn)介]王鴻垚(1990-)，女，碩士生，主要從事消化系統(tǒng)疾病研究工作；通信作者：譚小平，79867330@qq.com。

[收稿日期]2016-03-16

[引著格式]王鴻垚，譚小平.胃癌組織中CTHRC1的表達(dá)與淋巴道轉(zhuǎn)移[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)，2016，13(12)：16～17，27.