侯滿意，熊少歡，湯鳳英，朱金女，李婉儀

(廣州血液中心花都區(qū)血站，廣東廣州510800)

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病毒滅活冷沉淀在肝硬化大鼠模型中的研究應(yīng)用

侯滿意，熊少歡，湯鳳英，朱金女，李婉儀

(廣州血液中心花都區(qū)血站，廣東廣州510800)

摘要:目的探究病毒滅活冷沉淀在肝硬化大鼠中的臨床療效。方法選取20只健康大鼠為健康對照組，20只肝硬化大鼠為實(shí)驗(yàn)組，兩組均輸入10ml病毒滅活冷沉淀，24h后剪各組存活大鼠尾尖取血2ml，測定血清中Fg和PT、TT、APTT含量。結(jié)果與健康對照組比較，實(shí)驗(yàn)組Fg顯著降低，PT、TT、APTT顯著升高（P<0.05）；對照組輸入前后未見明顯差異（P>0. 05），實(shí)驗(yàn)組輸入后凝血結(jié)果較輸入前得到明顯改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論病毒滅活冷沉淀對肝硬化大鼠有良好的糾正凝血功能效果，為病毒滅活冷沉淀的臨床推廣應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

關(guān)鍵詞：病毒滅活冷沉淀；肝硬化；臨床療效

肝硬化是一種常見的由不同原因引起的慢性、進(jìn)行性、彌漫性肝病。晚期出現(xiàn)肝功能衰竭、門靜脈高壓和多種并發(fā)癥，死亡率高。冷沉淀主要用于血友病A，血管性血友病及纖維蛋白原因子XII或纖維混合蛋白量的減少或質(zhì)的缺陷引起出血的患者，從而達(dá)到止血目的，在肝硬化患者中有良好的糾正凝血功能效果。但由于病毒標(biāo)志物的檢測技術(shù)，所檢測病毒種類的局限性及病毒的變異等原因，在所有血制品中輸注凝血因子的風(fēng)險(xiǎn)高于血漿及紅細(xì)胞和血小板，為提高輸血安全，減低風(fēng)險(xiǎn)，對冷沉淀凝血因子進(jìn)行病毒滅活處理顯得尤為重要。本研究利用肝硬化大鼠模型，評估病毒滅活冷沉淀的臨床療效，為病毒滅活冷沉淀的臨床推廣應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1材料日本sysmexCA5000凝血儀和凝血試劑（Fg、PT、TT、APTT）；40只大鼠，20只健康大鼠和20只肝硬化大鼠，體重1kg左右，均購置于廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。病毒滅活冷沉淀制備于廣州血液中心花都區(qū)血站。

1.2檢測方法健康大鼠為對照組，肝硬化小鼠為實(shí)驗(yàn)組，對照組和實(shí)驗(yàn)組均輸入10ml病毒滅活冷沉淀，24h后剪各組存活大鼠尾尖取血2ml，枸櫞酸鈉抗凝，制備血清，按試劑盒說明書測定血清中Fg 和PT、TT、APTT含量。

2　結(jié)果

2.1病毒滅活冷沉淀的質(zhì)量分析病毒滅活冷沉淀中凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ）活性、纖維蛋白原的含量均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求；且未發(fā)現(xiàn)HBV－DNA、HCV－DNA的病毒載量。

2.2健康對照組與肝硬化實(shí)驗(yàn)組凝血結(jié)果比較與健康對照組比較，實(shí)驗(yàn)組Fg顯著降低，PT、TT、APTT顯著升高（P<0.05）；對照組輸入前后未見明顯差異（P>0.05），實(shí)驗(yàn)組輸入后凝血結(jié)果較輸入前得到明顯改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1　健康對照組與肝硬化實(shí)驗(yàn)組凝血結(jié)果變化（±s，n=40）

表1　健康對照組與肝硬化實(shí)驗(yàn)組凝血結(jié)果變化（±s，n=40）

組別　　輸入前　　輸入后健康對照組　實(shí)驗(yàn)組PT APTT Fg TT 12±1.5 28±5.5 3.0±0.5 17.0±4.5 11±2.5 28.5±4.4 2.8±0.7 19±4.5輸入前　　輸入后23.5±2.2 53.3±5.6 1.2±0.45 43.2±2.3 13.3±4.3 40.1±2.3 2.0±0.2 30.1±2.6

3　討論

血液和血液制品的病毒安全性是目前輸血工作中的熱點(diǎn)和難點(diǎn)，盡管通過獻(xiàn)血者挑選，血液篩選檢測和臨床合理用血，輸血病毒安全性已有很大程度的提高，但距離零風(fēng)險(xiǎn)還有一段距離。不安全輸血除了免疫因素外，主要來源于病原微生物及其代謝產(chǎn)物的污染，特別是病毒的傳播已對輸血安全性構(gòu)成明確且后果嚴(yán)重的威脅[1]。

新鮮冰凍血漿用于凝血因子缺乏或大量輸血伴有凝血障礙的患者。普通冰凍血漿主要用于補(bǔ)充穩(wěn)定的凝血因子缺乏。而冷沉淀富含纖維蛋白原、Ⅷ因子及Ⅱ、Ⅶ等多種凝血因子，可加速Ⅹ因子的活化，促進(jìn)血小板的黏附聚集及血小板因子Ⅲ的釋放，有利于凝血酶的形成[2]。研究發(fā)現(xiàn)病毒滅活新鮮冰凍血漿與冷沉淀相比較，冷上清其不穩(wěn)定凝血因子、穩(wěn)定凝血因子、vWF和血漿蛋白的含量都明顯較低[3－5]。

雖然冷沉淀的有效性和安全性在臨床上已經(jīng)證實(shí)，但由于儀器、試劑及病毒感染的窗口期，使用冷沉淀也存在感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)[6]。由于輸血可以引起血源性疾病的傳播和同種免疫反應(yīng)[7，8]，因此目前國內(nèi)外采用病毒滅活技術(shù)避免輸注血漿制品感染傳染病，降低輸血風(fēng)險(xiǎn)，其中亞甲藍(lán)光化學(xué)法（MB）為其臨床常用技術(shù)[9]。研究發(fā)現(xiàn)病毒滅活技術(shù)對血液中的有效成份產(chǎn)生不同程度的損傷，除凝血因子FⅧ和FⅨ，其余在可接受的范圍內(nèi)[10]。而冷沉淀的治療往往需要多人份血液、大劑量使用，這就給冷沉淀的臨床應(yīng)用提出了嚴(yán)峻的問題。因此，除了嚴(yán)格把握血源檢測和進(jìn)行血漿病毒滅活外，還應(yīng)該用白細(xì)胞過濾器濾除白細(xì)胞，以避免人白細(xì)胞抗原系統(tǒng)同種免疫反應(yīng)，提高輸注血液制品療效[11]。

肝硬化是一種常見的由不同原因引起的慢性、進(jìn)行性、彌漫性肝病。晚期出現(xiàn)肝功能衰竭、門靜脈高壓和多種并發(fā)癥，死亡率高。因肝臟不能及時(shí)合成各種凝血因子，而冷沉淀富含F(xiàn)Ⅷ、FⅦ及Fg等濃縮物，F(xiàn)Ⅷ具有良好的促凝血功能，故聯(lián)合血小板應(yīng)用可有效消除肝癌、肝臟移植等手術(shù)患者的凝血障礙，突顯冷沉淀的應(yīng)用價(jià)值[12]。研究發(fā)現(xiàn)肝硬化患者PT、APTT、Fg和TT均有不同程度的異常，PT、APTT和TT的水平隨肝臟的受損程度的加重而顯著延長，而Fg則相反，呈降低趨勢[13]。但其患者在輸注病毒滅活冰凍血漿后凝血結(jié)果未能得到改善，達(dá)不到應(yīng)有的臨床療效，故臨床醫(yī)生對肝病患者在申請輸注血漿的同時(shí)申請輸注冷沉淀[14]。研究發(fā)現(xiàn)肝硬化患者輸注冷沉淀后6～24h與輸注前相比，患者的PT、APTT、TT均明顯縮短，F(xiàn)g水平顯著提高(P<001)，表明冷沉淀在肝硬化患者中有良好的糾正凝血功能效果[15]。本研究自制病毒滅活冷沉淀，檢測其凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ）活性、纖維蛋白原的含量均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求；且未發(fā)現(xiàn)HBV－DNA、HCV－DNA的病毒載量。并利用大鼠模型發(fā)現(xiàn)肝硬化大鼠在輸注病毒滅活冷沉淀24h后，PT、APTT、TT均明顯縮短，F(xiàn)g水平顯著提高(P<0.05)，臨床療效得到明顯改善。

由于病毒標(biāo)志物的檢測技術(shù)，所檢測病毒種類的局限性及病毒的變異等原因，在所有血制品中輸注凝血因子的風(fēng)險(xiǎn)高于血漿及紅細(xì)胞和血小板，為提高輸血安全，減低風(fēng)險(xiǎn)，對冷沉淀凝血因子進(jìn)行病毒滅活處理顯得尤為重要。故病毒滅活冷沉淀在肝硬化大鼠模型中的臨床療效為病毒滅活冷沉淀的臨床推廣應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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·實(shí)驗(yàn)研究·

·實(shí)驗(yàn)研究·

The value of the virus-inactivated cryoprecipitation in a rat model of cirrhosis

HOU Manyi，XIONG Shaohuan，TANG Fengying，ZHU Jinnv，LI Wanyi. Huadu Blood Stations，Guangzhou Blood Center，Guangzhou 510800，China.

Abstract：Objective To study the clinical effect of the virus-inactivated cryoprecipitation in a rats model of cirrhosis. Methods A total of 20 healthy rats were selected as Control group，and 20 rats with cirrhosis as Observation group，both groups were injected with 10ml virus-inactivated cryoprecipitation and 2ml blood was obtained from each survived rat tail after 24 hours. Then the levels of fibrinogen (Fg)，prothrombin time (PT)，thrombin time (TT) and activated partial thromboplastin time (APTT) in each sample serum were analysed. Results The levels of Fg in Observation group were significantly lower than Control group，while the levels of PT，TT and APTT were significantly higher than Control group (P<0.05)；The levels of Fg，PT，TT and APTT had no significant difference after infusion in Control group (P<0.05)，but the levels of Fbg，PT，TT and APTT had significant difference after infusion in Observation group (P<0.05). Conclusion The virus-inactivated cryoprecipitation have a good function for correcting coagulation in cirrhosis rats，that provide a theoretical basis and laboratory basis for clinical application of virus-inactivated cryoprecipitation.

Key words:Virus-inactivated cryoprecipitation；Cirrhosis rats；Clinical effect

(收稿日期2015-12-24；修回日期2016-02-05)

作者簡介：侯滿意，女，1976年3月生，主管技師，本科，QQ郵箱：1970108334@qq.com

基金項(xiàng)目：廣州市花都區(qū)醫(yī)療衛(wèi)生科研項(xiàng)目（15- HDWS- 021）

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.02.011

中圖分類號：R657.3+1，R-332

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號：1674-1129(2016)02-0161-02