尚超，張佳星，陳秀秀，張家樂，黃寶俊

(1中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，沈陽 110001；2中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

RGCC基因在胃癌組織中的表達(dá)及其意義

尚超1，2，張佳星1，陳秀秀1，張家樂1，黃寶俊1

(1中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，沈陽 110001；2中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

目的 探討細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因(RGCC基因)在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇胃癌患者65例，取其保存完整的胃癌組織及配對癌旁組織標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測RGCC mRNA相對表達(dá)量。采用單因素方差分析RGCC表達(dá)與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，以胃癌組織中RGCC mRNA相對表達(dá)量的平均值為界，將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，比較兩組5年生存率。結(jié)果 胃癌組織RGCC mRNA相對表達(dá)量為2.505±0.502，癌旁組織為1.068±0.107，RGCC基因在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織(P<0.01)。Borrmann Ⅲ/Ⅳ型、彌漫型生長、分化程度低、浸潤程度深、存在脈管癌栓、淋巴結(jié)分期晚的患者胃癌組織RGCC mRNA表達(dá)明顯升高(P<0.05或<0.01)，不同性別、年齡、癌灶大小及部位者胃癌組織RGCC mRNA表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。高表達(dá)組5年生存率為31.0%，低表達(dá)組為64.2%，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。結(jié)論 RGCC基因在胃癌組織中表達(dá)升高，與腫瘤的惡性生物學(xué)行為和患者預(yù)后不良有關(guān)。

胃癌；細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因；惡性生物學(xué)行為；預(yù)后

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居各類腫瘤之首。近年來，雖然以手術(shù)為主結(jié)合放化療的綜合治療水平不斷提高，但中晚期患者術(shù)后5年生存率僅為30%左右[1,2]。深入研究胃癌發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制，尋找效果更佳、特異性更好的治療靶點(diǎn)是胃癌相關(guān)研究的重點(diǎn)。細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因(RGCC基因)為重要的補(bǔ)體應(yīng)答基因，在細(xì)胞增殖分化、炎癥反應(yīng)、腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等過程中起關(guān)鍵作用，參與許多疾病的發(fā)生、發(fā)展[3～5]。本研究探討RGCC基因在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2008～2009年于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)的胃癌患者65例，男33例、女32例，年齡39～74歲、中位年齡60歲?；颊吲R床資料完整，術(shù)前均未接受放療和化療。本研究均獲得患者的知情同意。

1.2 胃癌組織RGCC mRNA表達(dá)檢測 采用實(shí)時(shí)定量PCR法。取患者保存完整的胃癌組織及配對癌旁組織(距腫瘤3 cm以上)標(biāo)本，TRIzol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以GAPDH為內(nèi)參基因，按照試劑盒說明書擴(kuò)增RGCC基因。RGCC引物序列：上游引物：5′-TCAACCTTCTACCAGGCCACTC-3′，下游引物：5′-GCAAGCAGGTAAACAAAGTCAG-3′，引物長度102 bp；GAPDH引物序列：上游引物：5′-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3′，下游引物：5′-GGGGTCGTTGATGGCAACA-3′，引物長度95 bp。反應(yīng)體系：2×Premix Ex Taq 25 μL，F(xiàn)/R primer(10 μmmol/L)1 μL，50×ROX Reference Dye1 1 μL，模板4 μL，加水至50 μL。反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40個循環(huán)。每個試驗(yàn)重復(fù)5次。采用7500熒光定量儀和7500 Software v2.0軟件計(jì)算RGCC mRNA相對表達(dá)量，以2-ΔΔCT表示。

1.3 胃癌組織RGCC mRNA表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 收集患者的臨床資料，包括年齡、性別、癌灶大小、癌灶部位、Borrmann分型、生長方式、分化程度、浸潤深度、脈管癌栓及淋巴結(jié)分期情況，分析上述資料與RGCC mRNA表達(dá)的關(guān)系。

1.4 胃癌組織RGCC mRNA表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 以胃癌組織RGCC mRNA相對表達(dá)量的平均值為界，將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，計(jì)算并比較兩組5年生存率。

2 結(jié)果

2.1 胃癌與癌旁組織RGCC mRNA相對表達(dá)量比較 胃癌組織中RGCC mRNA相對表達(dá)量為2.505±0.502，癌旁組織為1.068±0.107，RGCC基因在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織(P<0.01)。

2.2 胃癌組織RGCC mRNA表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Borrmann Ⅲ/Ⅳ型、彌漫型生長、分化程度低、浸潤程度深、存在脈管癌栓、淋巴結(jié)分期晚的患者胃癌組織中RGCC mRNA的相對表達(dá)量明顯升高(P<0.05或<0.01)，患者的性別、年齡、癌灶大小及部位對胃癌組織中RGCC mRNA的相對表達(dá)量均無影響(P均>0.05)。見表1。

表1 胃癌組織RGCC mRNA表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 胃癌組織中RGCC mRNA表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 以胃癌組織中RGCC mRNA相對表達(dá)量的平均值2.505為界，高表達(dá)組39例，5年生存率為31.0%；低表達(dá)組26例，5年生存率為64.2%，低表達(dá)組生存率明顯高于高表達(dá)組(P<0.01)。

3 討論

RGCC基因是一種重要的補(bǔ)體應(yīng)答基因，又名C13orf15、補(bǔ)體應(yīng)答基因32(RGC32)，定位于人染色體13q14.11[6]。RGCC基因在多種組織中廣泛表達(dá)，具有調(diào)控細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞增殖分化及調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等作用[7，8]。近期研究報(bào)道，RGCC基因在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)，包括結(jié)直腸癌、胰腺癌等，可能參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲等，從而發(fā)揮癌基因的作用[9，10]。

本研究結(jié)果顯示，RGCC mRNA在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織；Borrmann Ⅲ/Ⅳ型、彌漫型生長、分化程度低、浸潤程度深、存在脈管癌栓、淋巴結(jié)分期晚的患者胃癌組織中RGCC mRNA表達(dá)明顯升高，不同性別、年齡、癌灶大小及部位者癌組織中RGCC mRNA表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明RGCC mRNA高表達(dá)與腫瘤的惡性生物學(xué)行為有關(guān)。夏祥偉等[11]應(yīng)用免疫組化方法檢測RGCC蛋白在胃癌組織中的表達(dá)，亦得出RGCC在胃癌組織中高表達(dá)的結(jié)論，且其表達(dá)與胃癌分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。付尚志等[12]在結(jié)腸癌研究中亦發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。本研究結(jié)果顯示，RGCC低表達(dá)的患者生存率明顯高于高表達(dá)者，說明RGCC能夠作為胃癌患者預(yù)后不良的生物學(xué)標(biāo)志物之一。

綜上所述，RGCC基因在胃癌組織中表達(dá)升高，可促進(jìn)胃癌的發(fā)生及發(fā)展，與腫瘤的惡性生物學(xué)行為和患者預(yù)后不良密切相關(guān)。RGCC基因可作為胃癌生物治療的新靶點(diǎn)，但是其具體作用機(jī)制尚不清楚，仍需進(jìn)一步深入研究。

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國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81272716)；遼寧省社會發(fā)展攻關(guān)計(jì)劃(2012225016)。

黃寶俊(E-mail： huang_bj@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.16.029

R735.2

B

1002-266X(2016)16-0077-03

2016-01-02)