林樂迎，符信清，王慶志，張紅旗

(1．贛南醫(yī)學院解剖學教研室，江西　贛州　341000; 2．新鄉(xiāng)醫(yī)學院人體解剖學教研室，河南　新鄉(xiāng)　453000; 3．復(fù)旦大學上海醫(yī)學院解剖學組織學與胚胎學系，上?！?00032)

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自發(fā)性高血壓大鼠竇房結(jié)結(jié)細胞凋亡*

林樂迎1，符信清1，王慶志2，張紅旗3

(1．贛南醫(yī)學院解剖學教研室，江西贛州341000; 2．新鄉(xiāng)醫(yī)學院人體解剖學教研室，河南新鄉(xiāng)453000; 3．復(fù)旦大學上海醫(yī)學院解剖學組織學與胚胎學系，上海200032)

摘要:目的:觀察自發(fā)性高血壓大鼠竇房結(jié)(SAN)結(jié)細胞的凋亡，探討厄貝沙坦對其影響。方法:將實驗動物雄性大鼠(Wistar-Kyoto，WKY)和SHR隨機分為:①WKY組(對照組) 10只;②SHR組(模型組) 10只;③厄貝沙坦治療組(治療組) 10只(厄貝沙坦0．6 mL·100 g(－1)·d(－1)灌胃)。WKY組和SHR組同等劑量的生理鹽水每天灌胃1次，持續(xù)喂養(yǎng)8周。SAN組織行TUNEL染色法，檢測SAN細胞凋亡指數(shù)的變化。結(jié)果: WKY組SAN內(nèi)可見散在的凋亡細胞，多分布于竇房結(jié)中央，在SHR組，可見SAN內(nèi)凋亡細胞明顯增加，呈不均一分布，凋亡細胞數(shù)量多，集中在竇房結(jié)中央;雖然治療組凋亡細胞數(shù)量比SHR組減少，但仍比WKY組多見。結(jié)論:自發(fā)性高血壓大鼠SAN 8周后出現(xiàn)結(jié)內(nèi)細胞凋亡明顯增加;自發(fā)性高血壓大鼠行厄貝沙坦降低血壓后可減少結(jié)內(nèi)凋亡細胞發(fā)生。關(guān)鍵詞: SHR;竇房結(jié);凋亡;大鼠

近幾年的研究表明，屬終極分化的心肌細胞在某些病理狀態(tài)下(如高血壓、心肌肥厚、心力衰竭、心肌梗死)也會發(fā)生凋亡［1－2］。Hamet于1995年最先提供了SHR的心肌細胞凋亡增加的證據(jù)［3］。竇房結(jié)是心傳導(dǎo)系的重要組成，由于其位置、結(jié)構(gòu)、功能的特殊性和復(fù)雜性，目前，有關(guān)自發(fā)性高血壓大鼠竇房結(jié)研究未見報道。本研究觀察自發(fā)性高血壓大鼠竇房結(jié)結(jié)細胞凋亡，探討厄貝沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠的血壓、竇房結(jié)結(jié)細胞的凋亡等相關(guān)因素的影響，為下一步的研究奠定基礎(chǔ)。

1　材料和方法

1．1動物及藥物12周SHR雄性大鼠20只，12 周Wistar-Kyoto(WKY)雄性大鼠10只，體重(200± 20) g，由上海瑞金醫(yī)院高血壓研究所提供。自然光照，普通飲食，自由飲水。室溫(21±5)℃，相對濕度(55±15) %。TUNEL凋亡試劑盒(德國Roch有限公司) ; DAB顯色試劑盒(北京中杉金橋公司)。厄貝沙坦(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)。

1．2實驗方法

1．2．1動物分組實驗動物隨機分為3組:①WKY組(對照組) 10只;②SHR組(模型組) 10只;③厄貝沙坦治療組(治療組) 10只(厄貝沙坦0．6 mL·100 g－1·d－1灌胃)。用苦味酸標記法隨機編號。WKY組和SHR組同等劑量的生理鹽水灌胃每天1次，持續(xù)喂養(yǎng)8周。

1．3檢測指標TUNEL凋亡檢測:檢測SAN細胞凋亡，每組隨機抽取10張切片，400倍視野下，記錄陽性染色的SAN細胞數(shù)及SAN細胞總數(shù)，以凋亡細胞數(shù)占視野細胞總數(shù)的百分比為凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)。

1．4統(tǒng)計學處理應(yīng)用SPSS 14軟件包進行統(tǒng)計學分析，兩組間比較采用t檢驗，兩組以上比較采用單因素方差分析作統(tǒng)計學處理。

2　結(jié)果

光鏡下，正常細胞核呈藍色，凋亡細胞核呈深淺不一的棕黃色。WKY細胞可見散在的凋亡細胞，多分布于竇房結(jié)中央;在SHR組，可見SAN內(nèi)凋亡細胞明顯增加，呈不均一分布，凋亡細胞數(shù)量多，集中在竇房結(jié)中央;雖然治療組凋亡細胞數(shù)量比SHR組減少，但仍比WKY多見。與WKY比較，SHR組凋亡率升高(P＜0．01) ;與SHR組比較，治療組凋亡率降低(P＜0．01) (表1，圖1～3)。

表1　各組大鼠竇房結(jié)結(jié)細胞凋亡的變化/±s

表1　各組大鼠竇房結(jié)結(jié)細胞凋亡的變化/±s

注:與WKY比較，★P＜0．05;與SHR組比較，▲P＜0．05。

組別　　例數(shù)　SAN AI/ (%) 10　3．93±0．55 SHR組　10　19．33±1．3★治療組　10　4．90±0．78對照組▲

圖1　WKY組SAN組織，TUNEL染色

圖2　SHR組SAN組織，TUNEL染色

圖3　治療組SAN組織，TUNEL染色

3　討論

SHR是日本教授首先研發(fā)培育的一種類似人類原發(fā)性高血壓的動物模型，適合模擬研究人類原發(fā)性高血壓使用藥物之后的療效，不良反應(yīng)等，為人類醫(yī)療實驗提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)資料，減少藥物使用并發(fā)癥的發(fā)生。

目前，研究細胞凋亡在竇房結(jié)的正常發(fā)育及在疾病中的作用剛剛起步，凋亡現(xiàn)象存在于人類心傳導(dǎo)系統(tǒng)形態(tài)發(fā)生的全過程［4］。本研究通過給SHR干預(yù)因素，觀察及檢測各組大鼠竇房結(jié)結(jié)細胞凋亡情況，探討厄貝沙坦對SHR竇房結(jié)結(jié)細胞凋亡及相關(guān)因素的影響，本實驗研究顯示，SHR組SAN內(nèi)凋亡細胞較WKY組明顯增加，呈不均一分布，且集中在竇房結(jié)中央;筆者推測，SAN內(nèi)部細胞這種凋亡的不均一性，可能會導(dǎo)致起搏沖動的發(fā)生、發(fā)放和傳遞等電生理活動紊亂，沖動在SAN內(nèi)或竇房、房室之間傳導(dǎo)出現(xiàn)障礙。

參考文獻:

［1］Kang PM，Izumo S．Apoptosis and heart failure: a critical review of the literature［J］．Circ Res，2000，86(11) :1107－1113．

［2］Gozalez A，Lopez B，Ravassa S，et al．Stimulation of cardiac apoptosis in essential hypertension，potential role of angiotensin II［J］．Hypertension，2002，39(1) : 75－80．

［3］Hamet P，Richard L，Dam TV，et al．Apoptosis in target organs of hypertension［J］．Hypertension，1995，26(4) : 642－648．

［4］謝英，易旭夫．竇房結(jié)動脈狹窄與竇房結(jié)脂肪、纖維增多、凋亡及猝死的關(guān)系［D］．成都:四川大學，2007．

Apoptosis of Sinoatrial Node Cells in Spontaneously Hypertensive Rats

LIN Le-ying1，F(xiàn)U Xin-qing1，WANGg Qing-zhi2，ZHANG Hong-qi3
(1．Dept．of Anatomy，Gannan Medical University，Ganzhou，Jiangxi 341000;2．Dept．of Anatomy，Xinxiang Medical University，Xinxiang，Henan 453003; 3．Dept．of Anatomy，Histology and Embryology，Shanghai Medical College of Fudan University，Shanghai 200032)

Abstract:Objective: To investigate cell apoptosis of Sinuatrial node and the intervention role of irbesartan in spontaneously hypertensive rats．Methods: WKY and spontaneously hypertensive rats were divided into three groups:①WKY group (control group)，10 rats;②SHR group(the model group)，10 rats;③irbesartan treated group(the treatment group)，10 rats．The treated group were injected irbesartan 0．6 mL·100 g(－1)·d(－1)intragastric administration for 8 weeks，while SHR group and WKY group were vehicle groups treated with the same dose saline．Paraffin sections of SAN were stained by TUNEL and detected the changes of apoptosis index．Results: Apoptosis cells were sporadic in the center of SAN in WKY group，whereas apoptosis cells in SAN in SHR group were more greatly than that in treated group，decreasing gradually from center to perimeter．The number of apoptosis cells in treated group were more than that in WKY group．Conclusions: Apoptosis cells in node are significantly increased after 8w in spontaneously hypertensive rats．Apoptosis cell of node were reduced after the spontaneously hypertensive rats were treated by irbesartan．

Key words:spontaneously hypertensive rats; sinuatrial node; apoptosis; rat

(收稿日期:2015－06－23) (責任編輯:敖慧斌)

*通訊作者:王慶志，男，博士研究生，教授。E-mail: wqzmgl@126．com張紅旗，男，博士研究生，教授。E-mail: zhanghq58@126．com

DOI:10．3969/j．issn．1001－5779．2016．01．009

中圖分類號:R544．1

文獻標志碼:A

文章編號:1001－5779(2016) 01－0036－02