李 強(qiáng)，鄧松柏，佘 強(qiáng)△，梁曉芳，丁玲新，譚憲華

（1.重慶市南川區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科 408400；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科 400010）

竇房結(jié)在心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)中自律性最高，是正常心臟電活動(dòng)的起搏點(diǎn)。竇房結(jié)起搏細(xì)胞自律性地產(chǎn)生動(dòng)作電位并經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)到達(dá)心肌細(xì)胞而控制心臟的節(jié)律性收縮。病態(tài)竇房結(jié)綜合征（sick sinus syndrome，SSS）是指由于竇房結(jié)及其鄰近組織病變引起竇房結(jié)起搏功能和（或）竇房傳導(dǎo)功能障礙，從而引起一系列心律失常及臨床癥狀的一組綜合征。臨床研究表明SSS的發(fā)病率隨著年齡的增加而增加，并以老年人群為甚［1］。目前研究發(fā)現(xiàn)竇房結(jié)功能呈增齡性遞減與竇房結(jié)的重構(gòu)相關(guān)［2-3］。本研究通過(guò)觀察不同年齡組犬的竇房結(jié)功能及組織學(xué)的變化來(lái)探討竇房結(jié)功能增齡性減退的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雌雄不拘的健康雜交犬共12只，幼年組（1～3個(gè)月齡）、成年組（2～5歲）和老年組（8～10歲）各4只（1～25kg，n＝4）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的飼養(yǎng)及取材均遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與保護(hù)的有關(guān)規(guī)定。采用LEAD2000B 多道電生理記錄儀（四川錦江通用實(shí)業(yè)有限公司）測(cè)定犬的竇房結(jié)功能。

1.2 竇房結(jié)功能的測(cè)定 以3% 戊巴比妥鈉按30mg／kg經(jīng)腹腔注射。經(jīng)頸靜脈插管置鞘，將6F 四極電極導(dǎo)管尖端朝向右側(cè)進(jìn)入心腔，根據(jù)心內(nèi)電生理圖來(lái)調(diào)整導(dǎo)管的位置，當(dāng)心內(nèi)電生理圖顯示A 波明顯時(shí)可有效刺激。固有心率（intrinsic heart rate，IHR）的測(cè)定：在心內(nèi)程序刺激之前給予阿托品（0.04mg／kg）及美托洛爾（0.1mg／kg）靜脈注射，記錄藥物注射5～10min后最高最穩(wěn)定的心率，即為IHR。竇房結(jié)恢復(fù)時(shí)間（sinus node recovery time，SNRT）及校正的竇房結(jié)恢復(fù)時(shí)間（correct sinus node recovery time，CSNRT）的測(cè)定：在心房用S1S1 250～500ms的刺激頻率連續(xù)刺激30s，記錄最后一個(gè)刺激脈沖S1 的起點(diǎn)到第一個(gè)恢復(fù)A 波的起點(diǎn)為SNRT。用SNRT 減去該次刺激前的竇性周期長(zhǎng)度，即為CSNRT。

1.3 竇房結(jié)的取材及免疫組織化學(xué)Masson染色 竇房結(jié)功能測(cè)定完畢后，即刻用空氣栓塞法處死動(dòng)物，無(wú)菌操作下取出心臟，沿冠狀溝去除心室部分，保留冠狀溝以上的組織，分辨出右房、腔耳角（上腔靜脈與右心房相接處的夾角）、界溝等解剖位置，以腔耳角上方0.5cm 為起點(diǎn)，界溝為中線，取寬約1.0 cm，長(zhǎng)約2.0cm 的組織塊即為竇房結(jié)組織，用4%多聚甲醛固定。按竇房結(jié)長(zhǎng)軸（界溝走行方向）連續(xù)進(jìn)行橫切石蠟切片，片厚10μm，每5 張為一組，行Masson 染色。利用Image-pro Plus 6.0 圖像分析系統(tǒng)，高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野（×400），統(tǒng)計(jì)每高倍視野竇房結(jié)間質(zhì)所占比例，每高倍視野竇房結(jié)間質(zhì)比例（%）＝（每高倍視野竇房結(jié)間質(zhì)面積／每高倍視野竇房結(jié)組織面積）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用±s表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩間多重比較采用q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 犬竇房結(jié)功能的增齡性變化 心內(nèi)電生理檢測(cè)方法測(cè)定犬竇房結(jié)功能結(jié)果顯示：隨著年齡的遞增，犬竇房結(jié)功能呈現(xiàn)減退現(xiàn)象。IHR 逐漸降低，同時(shí)CSNRT 逐漸增加，各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 犬竇房結(jié)功能的增齡性變化（±s）

表1 犬竇房結(jié)功能的增齡性變化（±s）

a：P＜0.05，與幼年組比較；b：P＜0.05，與成年組比較。

竇房結(jié)功能 幼年組 成年組 老年組INR（次／min） 167±11 119±9a 85±7 ab CSNRT（ms） 59±11 122±27a 176±40 ab

2.2 犬竇房結(jié)組織學(xué)表現(xiàn) 低倍鏡下觀察犬竇房結(jié)組織切片發(fā)現(xiàn)犬竇房結(jié)組織為形狀不規(guī)則的淡染色區(qū)域，并能與竇房結(jié)周圍的組織明顯區(qū)分開(kāi)來(lái)。竇房結(jié)表面為心外膜組織，偶爾可見(jiàn)少量的心房肌于竇房結(jié)組織內(nèi)，其深面有較厚的心房肌組織及心內(nèi)膜，也可發(fā)現(xiàn)一些區(qū)域的心房肌纖維可深入到竇房結(jié)組織中。供應(yīng)竇房結(jié)血供的竇房結(jié)動(dòng)脈大多位于竇房結(jié)組織的中央部分，也有部分位于竇房結(jié)組織的外周，竇房結(jié)動(dòng)脈的管壁較厚，周圍被膠原纖維所環(huán)繞，并向四周輻射。高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)竇房結(jié)起搏細(xì)胞，細(xì)胞核大，約占細(xì)胞直徑的1／2以上，呈圓形或多邊形，細(xì)胞質(zhì)透亮呈淺染。見(jiàn)圖1A。

光鏡下觀察各年齡組竇房結(jié)組織形態(tài)發(fā)現(xiàn)，竇房結(jié)起搏細(xì)胞數(shù)目在幼年組最多，間質(zhì)細(xì)胞較少，并隨著年齡的增長(zhǎng)起搏細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，而在老年組中脂肪細(xì)胞最多，起搏細(xì)胞數(shù)目較少，間質(zhì)細(xì)胞隨著年齡遞增而呈增加的趨勢(shì)［幼年組（0.20±0.03）%，成年組（0.42±0.05）%，老年組（0.59±0.05）%］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖1B～D。

圖1 各年齡組竇房結(jié)組織Masson染色

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)犬的竇房結(jié)所在位置與其他哺乳類動(dòng)物類似［4-7］，位于界嵴及上、下腔靜脈之間的區(qū)域，其長(zhǎng)軸與界嵴平行，并可以存在個(gè)體差異。光鏡下發(fā)現(xiàn)它是由一組結(jié)構(gòu)稀疏，細(xì)胞質(zhì)淡染、細(xì)胞核深染的起搏細(xì)胞組成，這一組起搏細(xì)胞由膠原彈性及網(wǎng)織纖維包裹而形成。竇房結(jié)動(dòng)脈提供竇房結(jié)的血運(yùn)，其可在竇房結(jié)結(jié)構(gòu)中央，也可以處于其周圍。

本研究觀察發(fā)現(xiàn)，隨著年齡的遞增，竇房結(jié)間質(zhì)逐漸增多，竇房結(jié)功能逐漸減退，這與其組織學(xué)及電學(xué)重構(gòu)相關(guān)［8］。在人體竇房結(jié)研究中發(fā)現(xiàn)，隨著年齡增加，竇房結(jié)細(xì)胞減少，脂肪浸潤(rùn)加重［9］，Ⅰ型膠原纖維逐漸增加［10］，這與本研究結(jié)果相似。在竇房結(jié)退行性改變的病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，這種組織學(xué)的重構(gòu)主要與竇房結(jié)動(dòng)脈硬化及脂肪浸潤(rùn)有關(guān)［11-12］。這一現(xiàn)象支持在老年病態(tài)竇房結(jié)綜合征的患者中缺血因素可能是其主要原因。

此外，竇房結(jié)細(xì)胞的4期自動(dòng)除極是多種離子通道及相應(yīng)離子流參與的電活動(dòng)，其中，超極化激活的環(huán)核苷酸門(mén)控的陽(yáng)離子通道超激化激活環(huán)核苷酸門(mén)控通道（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel，HCN）通道在竇房結(jié)自動(dòng)除極的作用最為顯著，也是竇房結(jié)組織的特異性標(biāo)志。竇房結(jié)自動(dòng)除極的相關(guān)離子通道的增齡性變化也會(huì)導(dǎo)致竇房結(jié)功能的降低，L型、T 型鈣通道和HCN4通道產(chǎn)生的If電流的增齡性降低被認(rèn)為是老年竇房結(jié)功能降低的主要原因［13］。也有研究發(fā)現(xiàn)竇房結(jié)HCN2及縫隙連接蛋白cx43表達(dá)降低也有可能是導(dǎo)致竇房結(jié)功能增齡性降低的原因［14-15］。

本研究發(fā)現(xiàn)犬竇房結(jié)在組織學(xué)及功能學(xué)上的增齡性變化初步揭示老年性竇房結(jié)功能退化的可能原因，但仍需要進(jìn)一步深入研究其潛在的分子機(jī)制。

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