馮小娟，李海英，蔣 玲，秦繼寶，安仲武，薄維波，劉 霞，劉書敏△

(1.連云港市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇連云港 222042；2.連云港市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇連云港 222042)

·論 著·

T2DM患者血清25-(OH)D與HCY、β2微球蛋白關(guān)系及臨床意義

馮小娟1，李海英1，蔣 玲1，秦繼寶1，安仲武1，薄維波1，劉 霞2，劉書敏1△

(1.連云港市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇連云港 222042；2.連云港市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇連云港 222042)

目的 本研究通過檢測2型糖尿病(T2DM)患者血清25-羥維生素D[25-(OH)D] 和同型半胱氨酸(HCY)、β2微球蛋白(β2-MG)水平，探討T2DM患者血清25-(OH)D和HCY、β2-MG關(guān)系及臨床意義。方法 選擇139例T2DM患者，根據(jù)尿清蛋白/肌酐(Alb/Cr)比值(UACR)分為正常Alb尿組(UACR<30 mg/gCr)45例，微量Alb尿組(UACR≥30且<300 mg/gCr)48例，大量Alb尿組(UACR≥300 mg/gCr)46例，選取45例體檢健康者作為對照組。采用電化學(xué)發(fā)光法檢測血清25-(OH)D水平，酶法測定血清HCY水平，膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測定血清β2-MG水平，同時檢測血糖(GLU)、糖化血紅蛋白(HbA1C)、血肌酐(Cr)、血清鈣(Ca2+)、磷(P5+)等生化指標(biāo)。結(jié)果 DM患者血清25-(OH)D隨著尿清蛋白的增加而降低，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D與正常Alb尿組和健康對照組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY、β2-MG水平較健康對照組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 血清25-(OH)D水平隨著尿蛋白的增加而降低，血清HCY、β2-MG水平隨著尿蛋白的增加而增加，血清25-(OH)D水平與HCY、β2-MG呈負(fù)相關(guān)。

25.羥維生素D； 同型半胱氨酸； β2-微球蛋白； 2型糖尿病

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，因其高致殘率與死亡率已成為繼心血管病、腫瘤之后威脅人類健康的第三大非感染性疾病。Mao等[1]研究發(fā)現(xiàn)，在2型糖尿病(type 2 diabetic mellitus，T2DM)患者中，血清同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平與DN發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)率和嚴(yán)重性密切相關(guān)。β2微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是一種微量蛋白，在正常情況下在尿液及血清中微量表達(dá)，腎臟病變時其水平會明顯增加[2]。維生素D可通過減輕胰島素抵抗、促進(jìn)胰島細(xì)胞分泌胰島素、增加胰島素敏感性等途徑來改善T2DM患者血糖水平，同時作為抑炎因子通過抑制炎性反應(yīng)來保護(hù)腎臟，從而有效地延緩DN的發(fā)展。本文通過檢測T2DM患者血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG水平變化，探討T2DM患者血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年10月至2015年5月連云港市東方醫(yī)院內(nèi)分泌科T2DM患者，排除原發(fā)性腎病、肝病、非糖尿病其他內(nèi)分泌病、糖尿病急性并發(fā)癥、原發(fā)性骨質(zhì)疏松、腫瘤、自身免疫性疾病、感染、服用影響骨代謝藥物等患者。以尿清蛋白/肌酐(Alb/Cr)比值(UACR)作為尿Alb排泄異常的指標(biāo)，將T2DM患者分為3組，UACR<30 mg/g Cr 48例(正常Alb尿組)，男23例，女25例，年齡(58.8±12.0)歲；UACR 30～<300 mg/g Cr 46例(微量Alb尿組)，男24例，女22例，年齡(62.6±12.6)歲；UACR≥300 mg/g Cr 45例(大量Alb尿組)，男23例，女22例，平均年齡(62.0±11.2)歲；選擇本院同期體檢健康者45例作為健康對照組，男24例，女21例，年齡(58.8±11.4)歲。

1.2 儀器與試劑 血清[25-(OH)D]水平測定采用Roche電化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑。血清HCY、β2-MG水平測定儀器采用西門子Dimension RXL Max全自動生化分析儀。酶法測定HCY，采用儀器原裝試劑；膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測定β2-MG。寧波美康生物科技股份有限公司提供試劑及其配套的定標(biāo)液和質(zhì)控品。

1.3 方法 標(biāo)本采集：采集所有研究對象空腹靜脈血5 mL和2 mL分別于分離膠管和EDTA-K2抗凝采血管，分離膠管標(biāo)本放置室溫20 min待血液凝固，3 000 r/min離心10 min分離血清于-20 ℃低溫冰箱保存，用于檢測25-(OH)D和HCY、β2-MG水平，血糖(GLU)、血肌酐(Cr)等生化指標(biāo)。EDTA-K2抗凝血標(biāo)本用于檢測糖化血紅蛋白(HbA1C)。同時留取晨尿測定尿Alb和Cr，計(jì)算UACR(Alb/Cr)。血清標(biāo)本檢測前處理：檢測前將所有標(biāo)本從-20 ℃低溫冰箱取出，置37 ℃水浴箱快速復(fù)融，將所有標(biāo)本于離心機(jī)3 000 r/min離心10 min后(避免其他蛋白的干擾)，吸取上清液檢測血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG水平，檢測前所有儀器用定標(biāo)液進(jìn)行定標(biāo)，檢測質(zhì)控品，將儀器調(diào)整至最佳狀態(tài)。

2 結(jié) 果

2.1 T2DM患者尿Alb含量隨著病程增加而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；3組患者GLU、HbA1c與健康對照組比較顯著升高(P<0.01)；大量Alb尿組患者血清Cr與健康對照組比較明顯升高(P<0.01)；大量Alb尿組患者血清Ca2+與健康對照組比較明顯降低(P<0.01)，而血清P5+明顯升高(P<0.01)，見表1。

2.2 正常Alb尿組、微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D依次降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D與正常Alb尿組和健康對照組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY、β2-MG較健康對照組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表1 T2DM患者與健康對照組的臨床資料

#：P<0.01,與正常Alb尿組比較；*：P<0.05，**：P<0.01,與健康對照組比較。

表2 T2DM患者血清[25-(OH)D]、HCY、β2-MG測定結(jié)果

*：P<0.05，**：P<0.01，與健康對照組比較；#：P<0.05，與正常Alb尿組比較；△：P<0.01,與大量Alb尿組比較。

3 討 論

近年研究發(fā)現(xiàn)維生素D缺乏是慢性腎臟病患者的突出特征[3]。本文研究顯示，T2DM患者正常Alb尿組、微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D依次降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D與正常Alb尿組和健康對照組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。進(jìn)一步證實(shí)維生素D缺乏的現(xiàn)實(shí)狀況，并且尿蛋白量越大，維生素D缺乏越嚴(yán)重。維生素D缺乏不僅可以加重胰島素抵抗、使胰島β細(xì)胞功能紊亂，而且可以增加糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病率。而腎臟損傷病變也使得維生素D的吸收水平較健康者差，排泄增多，更加重了維生素D的缺乏。楊燁等[4]研究發(fā)現(xiàn)，活性維生素D3可通過抑制糖尿病大鼠腎臟轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)對糖尿病大鼠腎臟損傷有預(yù)防保護(hù)作用。另外，補(bǔ)充維生素D可減輕胰島素抵抗，保護(hù)胰島β細(xì)胞，控制T2DM患者血糖水平，間接保護(hù)腎臟。

HCY是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，是動脈粥樣硬化重要的潛在致病因素[5]。大量的研究表明高HCY血癥可以損傷血管內(nèi)皮，在DN的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮了一定的作用[6]。本文結(jié)果顯示，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY較健康對照組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且大量Alb尿組HCY水平較微量Alb尿組和正常Alb尿組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。表明在糖尿病并發(fā)腎臟輕微損傷時HCY就已明顯升高。Tomislav等[7]研究發(fā)現(xiàn)，1型糖尿病患者蛋白尿和eGFR正常時，血漿HCY就與視網(wǎng)膜病變獨(dú)立相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了HCY的內(nèi)皮損傷作用。姚立騰等[8]認(rèn)為高HCY血癥可以作為一種內(nèi)源性致病因素，在DN的發(fā)展中發(fā)揮了一定的作用，具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

β2-MG是人白細(xì)胞組織相容性抗原(HLA)的輕鏈，由100個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，屬于低分子蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量約為12×103[9]。β2-MG能自由通過腎小球?yàn)V過膜，由腎小球?yàn)V過的β2-MG經(jīng)腎小管時幾乎全部被重吸收，如果β2-MG排出增高，則說明腎小管重吸收功能障礙。因此，β2-MG檢測可作為衡量糖尿病患者輕度腎損傷的一項(xiàng)簡便而又敏感的方法。但是β2-MG易受炎癥、腫瘤、免疫等多種因素影響而升高，特異度較差。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清β2-MG較健康對照組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，大量Alb尿組β2-MG水平較微量Alb尿組和正常Alb尿組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明微量Alb尿組和大量Alb尿組的腎損傷程度逐漸加重。綜合比較，β2-MG水平在DN患者的腎損傷反映程度上，具有一定的參考價值。

25-(OH)D是體內(nèi)維生素D最主要的存在形式，包括25羥維生素D2和25.羥維生素D3。腎臟病變時可能會影響維生素D的代謝，也有研究提示糖尿病患者的維生素D缺乏與DN獨(dú)立相關(guān)[10]。本文結(jié)果顯示，正常Alb尿組、微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D依次降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果表明，腎臟損傷越嚴(yán)重，25-(OH)D水平越低，具體是腎臟損傷導(dǎo)致25-(OH)D水平降低還是25-(OH)D水平降低導(dǎo)致腎臟損傷，尚需進(jìn)一步研究。

劉會苗等[11]研究，血清25-(OH)D與β2-MG的水平呈負(fù)相關(guān)。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY、β2-MG較健康對照組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果表明，蛋白排泄量越大，腎功能損傷越嚴(yán)重，血清HCY、β2-MG水平越高，血清25-(OH)D水平越低，血清HCY、β2-MG水平對于腎臟損傷的評估起到了一定的作用。維生素D具有改善血糖水平、保護(hù)腎臟的功能，如早期給予糖尿病患者維生素D的補(bǔ)充，對減緩DN的發(fā)展將有很大的臨床意義。

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Relationship between serum 25-hydroxy vitamin D with HCY and β2-microglobulin in patients with T2DM and its clinical significance

FengXiaojuan1,LiHaiying1,JiangLing1,,QinJibao1△，AnZhongwu1,BoWeibo1,LiuXia2,LiuShumin1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LianyungangMunicipalOrientalHospital,Lianyungang,Jiangsu222042,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,LianyungangMunicipaSecondPeople′sHospital,Lianyungang,Jiangsu222042,China)

Objective To detect the serum levels of 25-hydroxy vitamin D[25-(OH)D]，homocysteine(HCY) and β2-microglobulin(β2-MG) in the patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM) and to investigate the relationship between serum HCY and β2-MG with 25-(OH)D and its clinical significance.Methods A total of 139 cases of T2DM were selected anddivided into 3 groups,the normal albuminuria group for[urinary albumin to creatinine ratio (UACR)<30 mg/gCr,45 cases],microalbuminuria group (UACR ≥ 30 mg/gCr and < 300 mg/gCr,48 cases) and massive proteinuria group (UACR ≥ 300 mg/gCr,46 cases) according to the urinary albumin to creatinine ratio (UACR).Other 45 individuals undergoing the physical examination were selected as the control group.The serum 25-(OH)D level was measured by electrochemiluminescence.Serum HCY level was determined by the enzymatic method.Serum β2-MG level was measured by the latex enhanced immune turbidity method.At the same time,the biochemical indicators of FBG,HbA1C,serum calcium and phosphorus were measured.Results The serum 25-(OH)D level was decreased with the increase of urinary albumin in the DM patients.And the serum 25-(OH)D level in the microalbuminuria group and the massive proteinuria group was significantly decreased compared with the normal albuminuria group and the control group,the difference was statistically significant(P<0.01).The serum HCY and β2-MG levels in the microalbuminuria group and the massive proteinuria group were significantly increased compared with the healthy control group,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion The serum 25-(OH)D level is decreased with the increase of urinary albumin in the diabetic patients.The serum HCY and β2-MG levels are increased with the increase of urinary albumin and serum 25-(OH)D level is negatively correlated with the HCY and β2-MG levels.

25-hydroxy vitamin D; homocysteine; β2-microglobulin; type 2 diabetes mellitus

馮小娟，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事糖尿病腎病的臨床生化研究。△通訊作者,E-mail:15261379935@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.017 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-4130(2016)07-0912-03

2015-10-28)